咪喹莫特治疗支气管哮喘的动物实验研究

目的 :研究咪喹莫特治疗支气管哮喘的疗效及可能的机制。方法 :建立豚鼠哮喘模型 ,随机分为 :①对照组 (哮喘组 ) ;②咪喹莫特吸入组 ;③咪喹莫特灌胃组 ;④咪喹莫特外用组 ;⑤安慰剂组。治疗 2周后 ,支气管肺泡灌洗液 (BALF)及肺组织 ,分别测定外周血IgE ,支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞计数、分类 ,计数肺组织切片 0 1～ 0 3mm范围的支气管壁嗜酸性粒细胞 (EOS)、淋巴细胞 (L)数。结果 :咪喹莫特治疗组外周血IgE值 ,BALF细胞计数、EOS分类及 0 1～ 0 3mm支气管周围EOS计数、L计数与对照组间或安慰剂组间有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,而BALFL分类百分比 ,治疗组与对照组间或安慰剂组间无统计学意义。咪喹莫特治疗组间IgE值、BALF计数、EOS分类、支气管旁EOS计数、L计数方差分析均有统计学意义。 结论 :咪喹莫特能显著减轻支气管肺周围的炎性细胞的浸润 (主要表现为下调EOS与L数、EOS百分率和IgE)。咪喹莫特吸入可能是治疗支气管哮喘的一种新方法。     

呼吸导引操在稳定期慢性阻塞性肺疾病康复中的价值

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种死亡率呈上升趋势的慢性疾病。尽管抗炎、联合和靶向治疗取得了重要进展,但COPD药物治疗仍是治标不治本。肺康复是COPD管理过程的核心,运动训练则是肺康复的基石。传统导引术具有防病和治病的双重功效。现有研究表明,呼吸导引操可使稳定期COPD患者临床获益。本文将对COPD治疗现状、呼吸导引操在COPD患者康复中的价值作一综述。     

模拟临床的中性粒细胞性激素抵抗型支气管哮喘小鼠模型的建立及意义

目的建立一种模拟临床的中性粒细胞性激素抵抗型支气管哮喘(哮喘)小鼠模型并探讨其意义。方法采用屋尘螨(house dust mite,HDM)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)混合液,气管内给药建立哮喘小鼠模型。将18只雌性C57BL/6小鼠按照数字表法随机分为对照组、哮喘组(HDM+LPS)和地塞米松(dexamethasone,Dex)组(HDM+LPS+Dex)。肺功能仪测定小鼠气道阻力,HE染色观察肺组织炎症细胞浸润,过碘酸-雪夫染色(PAS)观察杯状细胞增生,瑞氏染色检测BALF炎症细胞总数及分类计数,聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织和BALF炎症因子。流式细胞术检测肺组织Th17细胞分化。结果HE染色显示,哮喘组肺组织炎症较对照组显著增高(P<0.05),地塞米松组肺组织炎症较哮喘组稍减轻(P>0.05);BALF细胞分类计数显示,哮喘组炎症细胞(除外嗜酸粒细胞)浸润较对照组显著增加[炎症细胞总数分别为(2797±400)×106/L和(105±75)×106/L,中性粒细胞计数分别为(1151±395)×106/L和(12±6)×106/L,淋巴细胞计数分别为(897±135)×106/L和(11±5)×106/L,巨噬细胞计数分别为(215±51)×106/L和(34±16)×106/L,均P<0.05],地塞米松组肺组织炎症细胞总数及巨噬细胞计数较哮喘组显著下降[炎症细胞总数(1140±418)×106/L vs(2797±400)×106/L,巨噬细胞计数(117±31)×106/L vs(215±51)×106/L,均P<0.05],但淋巴细胞和中性粒细胞计数无统计学意义[淋巴细胞计数(587±208)×106/L vs(897±135)×106/L,中性粒细胞计数(294±134)×106/L vs(1151±395)×106/L,均P>0.05];免疫组织化学检测结果同样证实,地塞米松组肺组织中性粒细胞浸润较哮喘组不能被有效抑制;哮喘组和地塞米松组气道阻力较对照组均显著增高(P<0.05),但两组间气道阻力差异无统计学意义(P>0.05);与哮喘组相比,地塞米松组肺组织Th2炎症指标显著降低(均P<0.05),而Th17细胞炎症指标有升高趋势,Th1炎症指标无显著改善;流式细胞术显示,地塞米松组肺组织Th17细胞浸润较哮喘组显著增多[分别为(5.8±1.9)%和(2.3±0.8)%,P<0.01]。结论成功建立了一种模拟临床的中性粒细胞性哮喘小鼠模型。地塞米松非但不能抑制小鼠中性粒细胞气道炎症和气道高反应性,而且促进Th17细胞分化,印证该哮喘模型存在激素抵抗。     

重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化

目的通过构建原核表达系统，在大肠埃希菌中表达重组人肝再生增强因子（hALR）蛋白，为各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗提供新的治疗方法奠定基础。方法利用正常人肝组织提取总RNA，经一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）获取hALR cDNA全序列，构建原核表达载体hALR—pET28a（＋）转化大肠埃希菌（BL21），诱导表达重组hALR蛋白，以组氨酸为标签进行蛋白纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western Blot鉴定重组蛋白。结果经双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入表达载体pET28a（＋），成功表达并纯化得相对分子质量为23000的重组蛋白，低温诱导表达使可溶蛋白明显增加，与预期结果相符。结论成功表达和纯化获重组hALR蛋白。     

Nano-MK-ASODN对人肝癌裸鼠原位移植模型的影响

目的 探讨中期因子反义寡核苷酸纳米脂质体（Nano-MK-ASODN）对人肝癌裸鼠原位移植模型的抑制作用。方法 利用人肝癌裸鼠原位移植模型,观察受试药品中期因子反义寡核苷酸（MK-ASODN）和Nano-MK-ASODN对荷瘤裸鼠体重、瘤重、以及肿瘤生长的抑制率的影响。检测荷瘤裸鼠血常规和血浆甲胎蛋白水平。结果 MK-ASODN高剂量组25 mg.kg-1组的瘤重抑制率为53.72%,12.5 mg.kg-1组的瘤重抑制率为48.76%,6.25 mg.kg-1组的瘤重抑制率为42.98%,Nano-MK-ASODN 25 mg.kg-1剂量组抑制率为66.94%,12.5 mg.kg-1组的瘤重抑制率为56.20%,6.25 mg.kg-1组的瘤重抑制率为52.07%,所有试验组肿瘤重量与溶剂对照组比较均有显著差异,P<0.01。Nano-MK-ASODN组肿瘤重量明显小于同等剂量MK-ASODN,P<0.01。Nano-MK-ASODN治疗组肿瘤体积以及AFP水平明显小于对照组,P<0.01。治疗组瘤重明显小于生理盐水对照组,P<0.05。Nano-MK-ASODN各治疗组及用药后体重、血常规与对照组比较指标差异均无显著性意义,P>0.05。同时,解剖学和病理组织学检查显示,Nano-MK-ASODN治疗组荷瘤裸鼠的肝内肿瘤体积缩小,并可见液化,能使部分肝癌细胞变性坏死。结论 Nano-MK-ASODN对人肝癌裸鼠原位移植瘤具有显著的抑制作用,且效果显著强于MK-ASODN。     

EV71、CA16及通用型肠道病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研发

目的 研制一种新的含竞争性内标引物,能同时检测EV71、CA16及通用型肠道病毒的四重实时荧光定量PCR诊断试剂盒,用于手足口病的临床诊断及流行病学监测.方法 设计特异性的EV71型、CA16型及其他型肠道病毒和内参基因的引物,改进病毒核酸提取方法,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的准确度、稳定性、精密度和扩增效率和检测线性范围.结果 本试剂盒的引物和探针特异性好,试剂盒采用的的病毒RNA抽提效果与QIAGEN公司QIAamp Viral RNAmini Kit抽提效果相当,但具有更低的试剂成本.优化引物探针浓度分别为0.2μmol/L的上下游引物浓度、0.06 μmol/L的通用探针浓度、0.08 μmol/L的EV71分型探针浓度和0.08μmol/L的CA16分型探针浓度.产品具有较好的稳定性和良好的准确度、精密度,CA16、EV71和肠道病毒通用型对引物的扩增效率分别是106％、101％和105％,线性检测范围是109拷贝/μl ～ 102拷贝/μl.结论 采用四重荧光定量PCR技术开发的能同时检测EV71、CA16、其他肠道病毒和内标的手足口病诊断试剂盒具有良好的准确性、稳定性、精密度和扩增效率等,具有很好的临床应用价值.     

特发性急性嗜酸粒细胞性肺炎一例临床特征分析

目的 探讨特发性急性嗜酸粒细胞性肺炎(IAEP)患者的临床特征.方法 分析解放军第81医院收治的1例IAEP患者的临床表现、影像学和病理特点,并综述有关IAEP的文献报道.结果 患者为70岁女性,咳嗽、胸闷、间断发热,急性病程,严重低氧血症.胸部CT示游走性肺浸润影伴少量胸腔积液.诊断性胸腔穿刺示胸水嗜酸粒细胞占28％.支气管肺泡灌洗液嗜酸粒细胞占59％.胸部CT引导下经皮肺穿刺活检示嗜酸粒细胞肺浸润.结论 IAEP是一种少见病,易被误诊为重症肺炎、急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征,对糖皮质激素敏感,治愈后无复发,预后良好.     

IL-4、IL-13单核苷酸多态性与中国东南方汉族人群哮喘关系的研究

目的探讨IL-4、IL-13单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与中国东南方汉族人群支气管哮喘(简称哮喘)发病危险性和哮喘相关表型的关系。方法挑选位于IL-4起动子区SNPs rs2243250(-589T/C),IL-13第四外显子区的非同义突变SNPs rs20541(+2044C/T)和启动子区SNPs rs1800925(-1112C>T)。连续性招募哮喘患者318例,正常对照352例。采用多重PCR结合标签阵列单碱基延伸技术进行基因分型。通过病例——对照研究分析这些位点与哮喘及哮喘表型的关系。结果 IL-4 rs2243250、IL-13 rs20541、rs1800925的等位基因及基因型分布频率在哮喘组与对照组差异无统计学意义(P>0.05),该3个位点共生成8种主要单倍型,在哮喘组和对照组中的分布亦无统计学差异,该3个位点SNPs与哮喘发病危险度无相关性。该3个位点SNPs与哮喘患者的外周血嗜酸粒细胞、肺功能、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆总IgE、哮喘严重度分级均无相关性。结论 IL-4、IL-13 SNPs与哮喘发病危险性和哮喘相关表型无相关性。     

高尔基体驻膜糖蛋白73的研究进展及其与肝癌等疾病的联系

高尔基体驻膜糖蛋白73( GP73)是定位于高尔基体的Ⅱ型跨膜蛋白,在肝癌组织中高表达,并分泌入血.研究表明,GP73作为血清标志物检测肝癌的特异性和灵敏度均优于AFP.另外,GP73在前列腺肿瘤、肾脏肿瘤、肺癌、食道肿瘤、精原细胞瘤等疾病中的表达也有增高,因此,GP73也可能成为这些疾病辅助诊断的新型指标.但是,目前GP73的生理功能和表达调控机制尚不清楚.文中将从理化性质、细胞内分布、表达调节、与疾病相关性和临床应用等方面对GP73的迄今研究状况作一较为全面的综述.