基于叠氮溴化丙锭结合高通量测序技术分析口腔综合治疗台水路系统中活菌多样性的研究

目的：利用叠氮溴化丙锭（propidium monoazid,PMA）预处理方法结合高通量测序技术检测口腔综合治疗台水路系统（dental unit waterline,DUWL）中活菌微生物群落,以综合评估不同科室DUWL中的污染情况及探究活菌群落构成的多样性。方法：选择南京医科大学附属口腔医院33台口腔综合治疗台,牙体牙髓病科23台（E组）,牙周病科10台（P组）,在医院开诊前收集三用枪水样,PMA预处理水样后提取活菌总DNA,经细菌通用引物PCR扩增后构建宏基因组文库,用于高通量测序和生物信息学分析。结果：样本使用1 μL PMA（最终浓度20 μmol/L）预处理10 min后暴露于卤素光照射5 min,最适合检测DUWL样品中活菌的量;高通量测序显示DUWL中活菌微生物群落呈多样性,并具有潜在的细菌致病序列。科室间具有统计学差异的菌门为蓝藻菌门（Cyanobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、衣原体门（Chlamydiae）、Aerophobetes、绿弯菌门（Chloroflexi）、Bacteria_d_norank_k__unclassified、TM6（P < 0.05）;属水平上,军团菌属（Legionella）、Methyloversatilis、Obscuribacterales__ norank差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：DUWL中致病微生物的存在对牙科医务工作者和患者都具有潜在感染风险,应重视DUWL细菌群落的多样性,有必要对DUWL进行定期水质控制。     

口腔综合治疗台水路系统中假单胞菌属污染状况的检测

目的：采用细菌培养技术与Miseq测序技术检测牙科综合治疗台水路系统(dental unit waterlines,DUWLs)中的假单胞菌属,以综合评估假单胞菌属在DUWLs中的污染情况。方法：选择南京医科大学附属口腔医院25台口腔综合治疗台作为研究对象。在医院开诊前收集三用枪水样400 mL,平均分为2份,一份用于细菌培养。另一份用于提取细菌基因组总DNA,经细菌通用引物PCR扩增后构建宏基因组文库,用于Miseq测序和生物信息学分析。结果：25个样本在不同浓度条件下经细菌培养法均未检出假单胞菌属。16个样本成功构建宏基因组文库,经Miseq测序均检测到假单胞菌属存在,检出率为100%,假单胞菌属在16个样本中的丰度为(3.02±2.12)%。结论：DUWLs中存在低水平的假单胞菌属污染,但假单胞菌属大部分可能处于死亡或“活的非可培养”状态,不具有较大的生物危害性。与传统细菌培养法相比,Miseq测序技术在特定病原菌的检测方面表现出了较高的敏感性,但无法区分样本中细菌的活性,若要将高通量测序技术用于活性病原菌的检测还需要进一步的研究。