大鼠神经元型一氧化氮合酶基因慢病毒载体的构建及功能测定

目的：构建编码大鼠神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）全长基因的慢病毒载体,并检测其表达效率和催化活性功能。方法：采用RT?PCR提取nNOS的cDNA,同时改造真核表达载体pCDH?GFP。鉴定nNOS的cDNA碱基序列正确后,将目的基因克隆入慢病毒载体pCDH?GFP,得重组载体pCDH?GFP/nNOS,采用Lipofectamine 2000将其及慢病毒包装辅助质粒转染293T细胞,超速离心纯化后,感染神经干细胞和海马齿状回神经元进行感染能力鉴定,并检测nNOS蛋白表达和催化功能。结果：成功构建编码nNOS全长cDNA,测序证明重组慢病毒载体pCDH?GFP/nNOS构建成功。包装慢病毒颗粒LV?nNOS?GFP可以感染离体神经干细胞和在体神经元。Western blot检测证明nNOS蛋白成功表达。一氧化氮浓度检测表明表达的nNOS具有催化活性。结论：慢病毒载体LV?nNOS?GFP构建成功,可以表达功能性全长nNOS蛋白。     

检测蛋白质相互作用方法的进展

生物体的生命活动受蛋白质的控制和调节,而绝大部分蛋白质都是通过与其他蛋白相互作用来实现其功能。文章系统总结基于生物化学与分子生物学、生物物理学以及生物信息学等原理检测蛋白相互作用的研究方法,并对这些方法的特点进行了系统性评述。     

正交试验优选四逆汤机械煎煮工艺

目的:优化四逆汤机械煎煮工艺。方法:以苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸和6-姜酚的含量为考核指标,采用RP-HPLC法测定指标成分含量,通过单因素试验和正交设计考察加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等影响因素,优选四逆汤机械煎煮工艺。结果:四逆汤最佳机械煎煮工艺为浸泡时间60 min,煎煮时间60 min,加水量10倍,煎煮2次。结论:优化的煎煮工艺合理可行,为提高四逆汤剂质量与临床疗效提供实验基础。     

一种活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基过表达慢病毒载体的构建及功能初步测定

目的:构建含活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基(去除氨基酸702~712的mTERT,命名为mTERTΔ)基因的慢病毒载体,检测其表达和功能?方法:从先前构建的表达mTERT全长的pDC315-EGFP-mTERT质粒中,通过缺失突变PCR扩增小鼠mTERTΔ基因,构建真核表达载体GV287-EGFP/mTERTΔ?鉴定正确后将目的基因克隆入慢病毒载体pGC-LV,得重组载体pGC-LV/mTERTΔ-EGFP,采用Lipofectamine2000将其转染293T细胞,包装慢病毒颗粒LV-mTERTΔ-EGFP后感染神经干细胞和原代神经元,TRAP-PCR方法检测端粒酶活性,荧光显微镜观察目的片段表达和细胞增殖情况?结果:成功构建TERTΔ基因片段,测序证明重组慢病毒载体pGC-LV/mTERTΔ-EGFP构建成功?包装慢病毒颗粒LV-mTERTΔ-EGFP可以感染神经干细胞和神经元,端粒酶活性测试证明目的蛋白的端粒酶催化活性缺陷,抑制神经干细胞增殖,抑制内源性mTERT功能?结论:慢病毒载体LV-mTERT-EGFP构建成功,可以表达无活性mTERT片段?     

姜黄素对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响

目的：研究姜黄素对双侧颈总动脉永久性结扎（2VO）所致血管性痴呆大鼠学习记忆功能减退的作用。方法：以2VO来制备大鼠血管性痴呆模型，将大鼠分为3组（假手术组、溶剂对照组、给药组），一部分于术后2周检测脑组织氧自由基（O2^-）和羟自由基（OH），另一部分于术后4周和8周分别进行水迷宫实验，来检测各组大鼠学习记忆能力的差异，通过HE染色和免疫组化来观察细胞数量和形态的差异。结果：姜黄素能明显降低因2VO所造成的氧自由基（O2^-）和羟自由基（OH）水平的升高（P〈0．05），改善由2VO所致的学习记忆功能的减退（P〈0．05和P〈0．01）。HE染色和免疫组化证实，姜黄素减少了2VO所导致的神经细胞死亡。结论：姜黄素能改善2VO所致的学习记忆减退，其机制与减少自由基的产生以及减少神经细胞死亡有关。     

四逆汤机械煎煮工艺研究

目的：优化四逆汤机械煎煮工艺。方法：通过单因素试验,采用RP-HPLC法以苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸和6-姜酚的含量及浸膏重量为考核指标,采用正交试验研究四逆汤机械煎煮的最佳工艺。结果：四逆汤最佳机械煎煮工艺为：浸泡时间为60 min,煎煮时间为60 min,加水倍量为10倍,煎煮2次。结论：优化出的煎煮工艺合理可行,为提高汤剂质量与临床疗效提供了实验基础。     

盐酸阿比朵尔在大鼠体内的药代动力学

目的研究盐酸阿比朵尔在大鼠体内的药代动力学。方法将健康♂Wistar系大鼠(200～220 g),随机分组,每组6只。单次灌胃给予药物,剂量分别为9、18、54 mg.kg-1,从眼眶静脉丛分时取血、处理。采用高效液相色谱-质谱联用方法测定药物在血浆中的浓度,应用DAS 2.0软件计算主要药代动力学参数。结果按9、18、54 mg.kg-13个剂量分别单次灌胃给予大鼠盐酸阿比朵尔后,药物在动物体内的Cmax分别为644.1、1002、4711μg.L-1;Tmax分别为0.35、0.28、0.18 h;AUC0-t分别为1127、1956、6790μg.h.L-1;AUC0-∞分别为1250、2224、7558μg.h.L-1;T12分别为3.2、3.6、3.3 h。结论以上数据经统计学分析,结果表明:在9～54 mg.kg-1剂量范围内,单剂量灌胃给予大鼠盐酸阿比朵尔后,药物在动物体内的动力学行为具有线性特征。     

电压门控钠离子通道在难治性癫痫中的作用机制研究进展

癫痫是一种常见神经系统慢性疾病。国际抗癫痫联盟将癫痫发作定义为由于大脑中异常过度或同步化的神经元活动导致的体征或症状的短暂发生。大约70%的患者通过适当药物治疗可以有效控制癫痫发作,但仍有约1/3患者对现有抗癫痫药物(antiepilepsy drug,AED)治疗没有反应。电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channel,VGSC)的α亚基由1个高度保守的基因家族进行编码,其中SCN1A、SCN2A和SCN8A基因突变是中枢神经系统疾病的重要病因。已有研究表明,VGSC 在难治性癫痫(treatment-resistant epilepsy,TRE)病理进程中发挥重要作用。本文对TRE概念、发病和耐药机制进行全面分析, 并综述了VGSC介导TRE机制研究的进展。