两株鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的: 制备鼠抗人PD-1单克隆抗体(mAb)及鉴定其生物学特性.方法: 以基因转染细胞PD-1/L929为免疫原, 免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合, 经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析, 筛选分泌鼠抗人PD-1分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、 Western blot、竞争结合抑制试验及肿瘤细胞株测定等方法对mAb进行生物学特性鉴定.结果: 获得了2株持续稳定分泌鼠抗人PD-1mAb的杂交瘤细胞株, 命名为1F2和5F10.对其生物学特性的鉴定结果表明, 均为条带相对分子质量在(Mr)55 000左右的免疫球蛋白, 具有不同的PD-1结合位点;1F2 mAb可识别SKHep-1和7721细胞株表面的PD-1分子, 而5F10可识别Raji细胞株的PD-1分子.结论: 成功获得了2株鼠抗人PD-1杂交瘤及其分泌的mAb.     

川芎嗪体外对活化T细胞的抑制作用

目的 研究川芎嗪体外对活化T细胞的作用及机制.方法 应用植物血凝素(PHA)刺激正常人外周血T细胞,经川芎嗪处理后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法榆测细胞增殖,流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞上CD25(白细胞介素-2受体,IL-2R)及负性协同刺激分子程序性死亡分子1(PD-1)的表达,ELISA法检测细胞因子IL-2水平变化.结果 川芎嗪(150μg/ml)处理72 h后,能明显抑制T细胞的增殖和活化(P＜0.01),并降低IL-2水平(P＜0.01);能抑制CD4+和CD8+T细胞上IL-2R的表达(P＜0.05);对负件协同刺激分子PD-1的表达作用不明显(P＞0.05).结论 川芎嗪对免疫过激T细胞具有一定的抑制作用,其对T细胞的免疫抑制作用可能与降低IL-2的分泌和抑制IL-2R(CD25)的表达有关.     

七叶皂苷体外抗SGC-7901细胞的作用及机制研究

目的研究七叶皂苷体外抗SGC-7901肿瘤细胞的作用及其机制。方法采用MTT法观察药物对SGC-7901肿瘤细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞仪检测SGC-7901肿瘤细胞周期的变化;FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测SGC-7901肿瘤细胞的凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果七叶皂苷可明显抑制SGC-7901肿瘤细胞的增殖,并抑制细胞周期和诱导细胞发生凋亡,可下调凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结论七叶皂苷体外对SGC-7901肿瘤细胞具有良好的抑制作用,并可诱导细胞发生凋亡。     

系统性红斑狼疮发病机制的研究进展

尽管对系统性红斑狼疮(SLE)的研究进行了一个多世纪,然而其发病机制及病因还不十分明确。普遍认为该病是在遗传背景的基础上,环境因素如感染、紫外线、药物、饮食等通过表观遗传修饰打破免疫系统的平衡,导致细胞凋亡频率增加和凋亡物质清除效率降低、免疫细胞异常分化活化等,产生大量的自身抗体,最终导致多种组织器官损伤。因此,本文对现有的发病机制在基因学、表观遗传学、免疫学及环境因素四个方面的研究进展进行系统总结,旨在为SLE病因学研究提供理论和实验基础,并为SLE的诊治提供新的途径和靶点。     

PD-1在器官移植患者T细胞上的表达及其意义

目的:检测共刺激分子PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者外周血单个核细胞(PBMCs)和T细胞上PD-1的表达,并对其表达的意义以及抗PD-1单克隆抗体与免疫抑制剂的协同作用进行探讨。方法:采用流式细胞分析技术,应用单标记和双标记的方法,对应用免疫抑制剂的肝移植和肾移植患者的外周血单个核细胞和T细胞上PD-1的表达进行检测。以混合淋巴试验在体外模拟移植模型,应用MTT法,观察PD-1单抗与免疫抑制剂的协同作用。结果:PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者PBMCs和T细胞上有特异性高表达,环孢素A(CsA)能诱导PD-1在PBMCs上的表达,且抗PD-1单克隆抗体与CsA联用具有协同作用。结论:PD-1可作为抗移植排斥作用的免疫干预新靶点。     

黑色素瘤的生物标志物:从基因组学到表观遗传学

黑色素瘤是一种发病率极高、极难治愈的皮肤恶性肿瘤, 其中转移性黑色素瘤的5年生存率几乎为零。虽然化疗和免疫疗法(如抗PD-1/PD-L1单克隆抗体生物制剂)发展迅速, 药物抵抗的高发率仍是治愈率低的主要问题。因此, 目前研究热点逐渐转移至"运用生物标志物进行早期辅助诊断和药物反应预测"。随着检测技术的日新月异, 很多新型生物标志物被发现, 甚至已作为治疗靶点。本文从基因水平和表观遗传学水平总结黑色素瘤的生物标志物研究进展, 并讨论其对疾病诊断、发展和治疗反应的预测价值, 为寻找潜在治疗靶点提供新的思路。     

再生障碍性贫血患者免疫抑制性受体PD-1的作用

目的 检测程序性死亡1(PD-1)和可溶性PD-1(SPD-1)在再生障碍性贫血(AA)患者的表达,探讨其在AA发病机制中的作用.方法 采用已建立的鼠抗人PD-1分子单克降抗体,用流式细胞术检测PD-1在AA患者(AA组)及正常人(对照组)T淋巴细胞表面的含最;用人sPD-1酶标检测sPD-1在AA患者及正常人外周血血清中的含量.结果 AA组外周血T淋巴细胞上无PD-1表达,而sPD-1水平与对照组相比明显增高(P<0.01).结论 AP患者的PD-1从活化T淋巴细胞膜上脱落导致sPD-1高表达,使PD-1缺如而无法发挥负性调控作用,导致T细胞活化功能持续亢进,引起骨髓造血功能衰竭.     

可溶性PD-1酶联检测试剂盒的研制及其应用

目的:建立人的可溶性PD-1(sPD-1)酶标检测试剂盒并探讨其检测的临床意义.方法:在已成功获得两株识别位点不同的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2和5F10)的基础上,采用该室制备的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2)作为包被抗体,应用本室制备的单抗5F10经生物素(biotin)标记后作为检测抗体,建立双单抗夹心的人sPD-1酶标检测方法,并对健康供血员、甲亢、血液病患者的血清中sPD-1的含量进行了检测.结果:成功研制了人sPD-1酶联检测试剂盒,其灵敏度为200.00pg/ml.该试剂盒4℃放置1个月,离散度(CV%)＜±5.17,回收率为95%～115%,提示该检测试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性.用该试剂盒测得血清中sPD-1的正常值为1.103±0.240 ng/ml,再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量明显高于正常对照组,而甲亢和器官移植病人血清中sPD-1的含量和正常值相比没有显著差异(P＜0.05).结论:成功研制了检测人sPD-1酶标检测试剂盒,并首次发现再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量较高,该试剂盒在临床病人sPD-1的检测中具有潜在的应有价值.