壳寡糖抑制炎症相关性结直肠癌的研究

目的观察壳寡糖对炎症相关性结直肠癌(CAC)的防治效果和对肠道细菌的影响。方法 32只8~10周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为健康对照组(CK,正常饮食)、壳寡糖对照组(COS,每日灌胃壳寡糖300mg/kg)、炎症相关性结直肠癌模型组(CAC,氧化偶氮甲烷AOM/葡聚糖硫酸钠DSS诱导炎症相关性结直肠癌)和壳寡糖治疗组(CAC+COS,每日灌胃壳寡糖300mg/kg的CAC处理组),每组8只。每周称量小鼠体重并测定疾病活动指数(DAI),造模结束时(第10周末)取小鼠结肠组织,进行病理组织学检查和结肠上皮细胞因子COX-2、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α丰度的RT-qPCR检测,以及小鼠粪便中总细菌、乳酸杆菌、肠球菌、具核梭杆菌、丁酸盐产生菌丰度的Real-time PCR检测,评估壳寡糖对CAC的防治效果和对肠道细菌的影响。结果 CAC+COS组小鼠成瘤率从CAC组的100%下降至71.4%,且小鼠体重下降得到明显改善,实验结束时CAC组小鼠体重为(22.14±1.18)g,CAC+COS组为(24.84±0.60)g,差异有统计学意义(P0.05);CAC组小鼠出现肛门脱垂,CAC+COS组小鼠未出现明显脱肛。CK和COS组小鼠DAI为0;CAC和CAC+COS组小鼠在实验第1周即出现腹泻等疾病活动特征,但从第4周开始,CAC+COS组小鼠DAI显著降低至实验结束时分别为1.57±0.23和2.67±0.47,与CAC组比较差异有统计学意义(P0.05)。CAC组小鼠结肠上皮细胞因子COX-2、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-αmRNA较CK和COS组均显著升高,壳寡糖的应用可显著下调上述5种因子的丰度(P0.05),ΔΔCT值CAC+COS组分别为3.57±0.90、5.25±0.82、1.26±0.64、1.32±0.25和1.50±0.25,CAC组分别为5.56±0.94,7.99±0.94,3.53±0.48,3.63±0.30和2.78±0.40。CAC组小鼠肠道的肠球菌和具核梭杆菌较CK组显著增加(Lg值分别为3.52±0.18vs.0.97±0.22,2.06±0.07vs.1.21±0.06),丁酸产生菌较CK组显著减少(Lg值为1.00±0.21vs.2.85±0.09)(P0.05);而壳寡糖治疗后的CAC+COS组中肠球菌和具核梭杆菌丰度均较CAC组小鼠显著降低(Lg值分别为1.16±0.15vs.3.52±0.18,1.69±0.20vs.2.06±0.07),丁酸盐产生菌显著增加(Lg值为2.11±0.22vs.1.00±0.21)。结论壳寡糖可通过显著降低小鼠疾病活动指数、成瘤率和改变结肠上皮细胞因子丰度控制小鼠炎症相关性结直肠癌的发生发展,且壳寡糖可显著增加肠道总细菌和丁酸盐产生菌丰度,降低肠球菌和具核梭杆菌的丰度,是预防和治疗炎症相关性结直肠癌的潜在有效药物。     

过表达IL-18的T细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤作用

目的探讨IL-18基因过表达的T细胞对胰腺癌细胞系SW1990的杀伤作用。方法用PCR技术构建含IL-18基因的重组慢病毒,HEK293T细胞包装后感染分离培养的人T淋巴细胞,与胰腺癌细胞SW-1990共培养后,检测培养上清中的LDH含量、ELISA检测IL-2和IFN-γ的含量,以间接评估其对SW-1990细胞体外的杀伤作用。结果成功构建和包装了人IL-18的重组慢病毒,感染人T淋巴细胞后,在与人胰腺癌细胞SW-1990共培养条件下,与空白对照组相比,LDH的释放显著增多(P0.01);IL-2和IFN-γ的分泌亦显著增多(P0.01)。结论过表达人IL-18蛋白的T淋巴细胞对胰腺癌细胞SW-1990具有更强的杀伤作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体与2型糖尿病及其心血管并发症的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是配体激活的核转录因子,在糖脂代谢中发挥重要作用,这在一定程度上改善糖尿病血脂异常和胰岛素抵抗,减少心血管并发症发生的危险因素。同时,动物模型的数据显示,PPAR的激活也有独立的抗动脉粥样硬化作用,包括抑制血管炎症,氧化应激和激活肾素-血管紧张素系统等。这使PPAR成为研究治疗糖尿病及其心血管并发症理想的靶基因。     

过表达IL-18 抑制人结直肠癌细胞HCT-116的增殖

目的：研究过表达IL-18 基因对人结直肠癌（colorectal cancer,CRC）HCT-116 细胞体内外增殖的影响及其可能的机制。方法：构建含人IL-18 基因片段的载体,采用慢病毒转染法获得稳定过表达人IL-18 的CRC HCT-116 细胞株HCT-116/IL-18,CCK-8 法检测HCT-116/IL-18 细胞与野生型HCT-116 细胞的增殖,Western blotting 检测两组细胞内IL-18、Cyclin D1、增殖细胞核抗原（PCNA）、DNA损伤修复酶（PARP）蛋白的表达。将HCT-116、HCT-116/IL-18 细胞分别接种于裸鼠左右两侧腋下,观察成瘤性及移植瘤的生长情况,免疫组化法检测移植瘤组织中IL-18 及PCNA的表达。结果：IL-18 基因在HCT-116 细胞内过表达,可延缓HCT-116 的增殖（P<0.05 或P<0.01）;与HCT-116 细胞相比,HCT-116/IL-18 细胞内PARP表达明显增强,PCNA、Cyclin D1 表达减弱（P<0.01）。HCT-116/IL-18 细胞系在裸鼠体内成瘤率明显降低,成瘤率为43%,与对照组比较其移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小,且HCT-116 / IL-18 异种移植瘤PCNA蛋白表达下调（P<0.01）。结论：过表达IL-18 基因对HCT-116 细胞生长增殖具有抑制作用,其机制可能与IL-18调控细胞周期和促进DNA损伤有关。     

PD-1 抗体增强奥沙利铂体内外抗结肠癌的效果

目的: 探讨奥沙利铂（oxaliplatin, OXA）联合PD-1 抗体对结肠癌的抗肿瘤作用。方法：选用结肠癌细胞系HCT-116和HT-29,用流式细胞术检测细胞中PD-L1 的表达。采用T细胞共培养的方法检测OXA预处理HCT-116 细胞联合PD-1 抗体作用后细胞因子分泌及CD4/CD8 亚型变化。建立BALB/c 小鼠的结肠癌细胞CT26 移植瘤模型,用OXA联合PD-1 抗体治疗,评估其抗肿瘤活性;同时采用CD8 抗体清除小鼠CD8+T细胞,评估CD8+T细胞在OXA抗肿瘤中的作用。结果：OXA能够显著上调结肠癌细胞表面PD-L1的表达。OXA预处理后的结肠癌HCT-116 细胞和T细胞共培养后,与单纯培养的T细胞相比,能降低其培养上清中IL-2、IFN-γ和TNF的水平（均P<0.05）及体系中CD4+记忆性T细胞和CD8+TEMRA比率（P<0.05）、增加CD4（+ P>0.05）和CD8+（P<0.05）初始T细胞比率;联合PD-1 抗体后,与OXA预处理的HCT-116 和T细胞共培养组相比,T细胞培养上清中IFN-γ 和IL-10含量（P<0.05）以及CD8+ TCM和TEMRA比率增加（P>0.05）。体内抑瘤实验表明,OXA联合PD-1 抗体可以增强其抗肿瘤活性,抑瘤率显著高于单用OXA组和αPD-1 组（58.2% vs 25.6% 、29.1%,均P<0.05）;清除CD8+ T细胞后,OXA的抗肿瘤活性由68.4%下降到46.2%（P<0.05）。结论：OXA联合PD-1抗体具有联合增效的作用,同时CD8+T细胞在OXA的抗肿瘤活性中具有重要作用。     

医学微生物学系统性实施课程思政的探索与实践

医学微生物学是重要的医学专业必修课程,面向二年级医学生开设.经过持续系统性课程思政建设,医学微生物学先后获批新乡医学院"首批校级课程思政示范课程"和河南省"2021年本科高校课程思政样板课程".其课程思政主要实施举措包括:教师是关键,全员培训强化意识;明确思政目标,修订教学大纲;深入发掘思政元素,编写了53个思政案例;...     

小鼠粪便及肠道各部位内容物细菌群落结构差异分析

【摘要】 目的 分析小鼠粪便及肠道各部位内容物细菌群落结构差异,探讨粪便取样研究肠道微生物与疾病关系的科学性和客观性,为相关实验设计提供参考。 方法 利用末端限制性片段长度多态性、变性梯度凝胶电泳和荧光定量PCR技术对BALB/c小鼠肠道不同部位（十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠）内容物及粪便中细菌群落组成和丰度进行比较,分析细菌群落在小鼠粪便及肠道各部位的分布差异。 结果 粪便与直肠、结肠中优势片段均为244 bp、255 bp和449 bp,而小肠内容物（十二指肠、空肠及回肠）的优势片段则为60 bp、73 bp、261 bp、268 bp和272 bp,且小肠各部位之间细菌群落结构差异较大;十二指肠和空肠内容物中的细菌丰度较低,分别为6.9 log(copies)/g和8.3 log(copies)/g,而粪便中细菌丰度高达11.8 log(copies)/g,约2倍于十二指肠细菌丰度,显著高于十二指肠和空肠P ＜ 0.05）,与大肠各部位及回肠内容物细菌丰度相当,差异不显著（P ＞ 0.05）。结论 粪便和大肠各部位内容物的细菌群落结构个体差异较小肠小,适合进行肠道微生态与某些相关疾病的研究;粪便与大肠特别是结直肠部位细菌群落组成相似,可通过粪便取样进行该部位的微生物生态学相关分析。     

Id2基因过表达对C57BL/6小鼠免疫表型的影响

目的：建立分化抑制因子2(ID2)过表达和CD45.1,CD45.2嵌合体小鼠模型，探讨ID2过表达(ID2^o/o)对C57BL/6小鼠免疫表型的影响。方法：利用基因编辑技术获得ID2^o/o C57BL/6模型小鼠，采用PCR、琼脂糖凝胶电泳和Western blot对小鼠进行基因型鉴定。Western blot检测ID2^o/o和WT小鼠脾脏细胞中各种ID蛋白(ID1～ID4)表达情况。流式细胞术绝对定量方法检测WT和ID2^o/o小鼠脾脏和外周血细胞中各免疫细胞数量。构建骨髓1∶1竞争性嵌合体小鼠模型，以同样方法检测CD45.1⁺和CD45.2⁺白细胞及相应免疫细胞数量。结果：PCR和Western blot结果表明ID2^o/o小鼠构建成功。在ID2^o/o小鼠脾细胞中，4种ID蛋白的表达量均显著高于WT小鼠。流式细胞分析结果显示，Id2基因过表达使C57BL/6小鼠脾脏和外周血中的中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞...