DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的流式细胞术检测

目的 运用流式细胞术检测二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的作用. 方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养,进行细胞形态学观察,应用流式细胞术检测凋亡率、早期凋亡细胞以及caspase-3活性. 结果 DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,PI单染法检测结果 :随着不同浓度DADS作用HL-60细胞24 h,HL-60细胞出现明显亚二倍峰,细胞周期也发生了相应的改变;Annexin V/PI 双染法检测结果 :10 mg/L DADS作用HL-60细胞4、8、12和24 h后,早期凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性(P<0.05);间接免疫荧光流式细胞术结果 显示在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,且与作用时间呈依赖关系. 结论 流式细胞术检测结果 表明,DADS能有效诱导HL-60细胞凋亡.     

二烯丙基二硫对人白血病HL-60细胞凋亡启动过程的影响

背景与目的：二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）作为一种抗肿瘤物质日益受到关注。本研究在建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型的基础上,研究DADS启动人白血病HL-60细胞凋亡的相关蛋白。方法：提取未处理HL-60细胞和3．6mg／LDADS处理2d的HL-60细胞的总蛋白,双向电泳分离细胞总蛋白质,绘制图谱,PDQuest软件分析,切割差异蛋白质,进行质谱分析、生物信息学分析。Westernblot以及RT-PCR验证部分差异蛋白。结果：对照组和处理组蛋白质表达量相差2倍以上的点有29个,其中22个上调,7个下调。质谱分析和数据库搜索鉴定了9个蛋白质点。其中7个蛋白质点有意义。这些蛋白功能分别与信号转导、基因转录及调控、细胞骨架、细胞新陈代谢等有关。Western blot结果显示DADS处理后Rac2（ras-related C3 botulinum toxin substrate2）蛋白表达明显上调,RT-PCR显示DADS处理后Rac2表达增强。结论：Rac2等蛋白参与了DADS诱导的HL-60细胞凋亡,但其具体机制还有待于进一步研究。