透射电镜观察p21HBHBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡

目的 观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡.方法 用透射电镜观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡的形态学改变.结果 细胞凋亡早期,细胞核染色体发生边集,核形不规整,核膜表面凹凸;凋亡中期,核内染色质凝聚,趋边呈月牙状,核膜孔消失,核膜呈波纹状皱缩;凋亡晚期,核固缩,细胞膜出芽形成小泡,可见凋亡小体.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡具有典型性病变特征,是研究HBV感染诱发肝癌发病机理的合适动物模型.     

猴B病毒囊膜蛋白gD的B细胞表位预测及鉴定

目的鉴定猴B病毒囊膜蛋白gD的抗原表位。方法利用生物信息学分析猴B病毒囊膜蛋白gD的二级结构、亲水性、表面可及性、抗原性指数以及柔韧性,得到可能的表位肽段;再利用合成肽与B病毒阳性血清进行ELlSA验证,评价表位肽段的特异性和敏感性。结果在异D蛋白上预测得到7个表位肽段;ELISA测定结果显示,4个肽段（序列分别为^46 LPPLEQKTD^54、^106 RGAPEATRSDA^126、^291291PELAPEERGTSRFPGD＾３０６和＾３６１AVYLVRRRGR＾３７０可与B病毒阳性血清发生免疫学反应,敏感性在40％～70％之间。结论B病毒gD蛋白上至少存在4个线性化表位。     

缺氧环境下4-DMAP形成高铁血红蛋白的药效学特征

目的研究高原缺氧环境下4-二甲基氨基苯酚（4-DMAP）形成高铁血红蛋白的药效学特征，为急进高原的氰化物中毒患者救治提供理论参考。方法急性缺氧家兔肌内注射4-DMAP，采集心血，通过比色方法测定高铁血红蛋白。结果急性缺氧对血红蛋白浓度和高铁血红蛋白本底无明显影响，但缺氧升高4-DMAP生成高铁血红蛋白的敏感性，缺氧环境下生成30％～40％高铁血红蛋白（最适抗氰浓度）所需4-DMAP的剂量为20mg／kg，相当于常氧环境所需剂量的68％～80％，当采用常氧环境的最适抗氰剂量（25～30mg／kg）时，缺氧家兔表现严重的缺氧病变，甚至死亡，而且在缺氧家兔体内，高铁血红蛋白维持时间明显延长；4-DMAP的效应还与动物缺氧时间密切相关，高铁血红蛋白生成浓度在1～5天内随缺氧时间增加而升高，5天达到高峰，7天开始回落，但仍然显著高于常氧对照组。结论缺氧提高4-DMAP生成高铁血红蛋白的能力，在缺氧动物体内，高铁血红蛋白代谢慢、维持时间长。     

实验动物微生物、寄生虫抽样调查及分析

目的 监控实验动物微生物、寄生虫质量.方法 细菌检测:常规培养、生化鉴定,免疫荧光试验(IFA)查抗体.病毒检测:酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫酶试验(IEA)、免疫荧光试验(IFA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HAI)方法检测抗体.真菌检测:常规培养、镜检.寄生虫检测:涂片镜检、间接血凝试验(IHA)方法查抗体.结果 五年来,SPF级动物检出了绿脓杆菌、嗜肺巴斯德菌、金黄色葡萄球菌、鞭毛虫,另外,泰泽病原体、小鼠细小病毒(MVM),小鼠仙台病毒(M-SC)抗体阳性.清洁级动物检出了蠕虫,且泰泽病原体、大鼠仙台病毒(R-SC)、小鼠仙台病毒(M-SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)抗体阳性.普通级动物检出了志贺菌、皮肤病原真菌、体外寄生虫、弓形虫,同时检出兔出血症病毒(RHDV)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬肝炎病毒(ICHV)未达抗体保护效价,犬布鲁杆菌、猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)抗体阳性.不同生产企业动物质量差异很大,有的动物合格率达100%,有的则同一动物有多种病原感染.结论 实验动物微生物、寄生虫质量控制有待加强.     

自体胰岛细胞移植治疗大鼠全胰十二指肠 切除术后糖尿病的研究

目的 探讨全胰十二指肠切除术后大鼠血糖变化及自体胰岛细胞移植治疗术后糖尿病的可行性和 有效性。方法 将SD 大鼠随机分成对照组、手术组和实验组（手术+ 自体胰岛移植）,每组10 只大鼠。对照组 未做任何处理;手术组和实验组均行全胰十二指肠切除术;实验组全胰切除后分离、纯化自体胰岛细胞,将胰岛 细胞通过门静脉回植入肝脏。术后各组分别监测血糖、C 肽、糖化血红蛋白,以判断单纯手术后复制模型的有 效性及实验组移植后的胰岛功能。结果 全胰切除后手术组第1 天大鼠血糖即升高为（20.58±2.00）mmol/L ; 手术组与对照组血糖比较,差异有统计学意义（P <0.05）,手术组血糖高于对照组;实验组自体胰岛细胞移植后 血糖与手术组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,实验组血糖下降。术后持续4 个月监测血清糖化血红蛋白,第 4 个月,手术组与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,手术组升高;实验组与手术组比较,差异有统计 学意义（P <0.05）。结论 全胰十二指肠切除术是复制大鼠糖尿病模型的安全可靠途径;自体胰岛细胞移植是 治疗大鼠全胰切除术后糖尿病的有效方式。     

衰变加速因子(DAF)与异种器官移植免疫

超急性排斥反应一直是异种器官移植中的主要障碍之一,其分子基础是补体及其激活.hDAF作为一种重要的膜结合补体调节蛋白,是同源限制分子.转基因技术为跨越DAF的同源限制性发挥了重要作用,将人DAF基因插入猪基因组,获得转基因猪,利用转基因猪器官可有效解决异种移植中的超急性排斥反应.     

比格犬雌激素受体β的原核表达、纯化及鉴定

目的 研究比格犬雌激素受体β(Estrogen receptor β,ERβ)及其剪接异构体在生殖调控中的功能,构建比格犬ERβ的pMAL-p5x/ERβ 480 DE3 E.coli重组菌株,并进行纯化和鉴定.方法 Trizol法提取发情期比格犬下丘脑总RNA,RT-PCR获得cDNA,以NCBI网站公布的比格犬ERβ基因CDS序列设计特异性引物,扩增ERβ保守区基因编码序列(16-496 bp),连接原核表达载体pMAL-p5x,筛选、鉴定阳性克隆并测序.将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α,再转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物经经麦芽糖亲和树脂(Amylom Resin)亲和层析分离纯化,并对纯化的融合蛋白进行鉴定.结果 构建了pMAL-p5x/ER(a)480重组质粒,在DE3大肠杆菌中诱导表达出MBP-ERβ融合蛋白,SDS-PAGE显示分子量约为60 000,与预期结果一致;优化了MBP-ERβ表达体系的表达条件:分别在0.2％葡萄糖,100 μg/ml Ampcillin,0.1mmol/L IPTG 37℃培养5h或在0.2％葡萄糖,50 μg/ml Ampcillin,0.2mmol/L IPTG 37℃培养3h,融合蛋白表达效果比较好.结论 构建了pMAL-p5x/ERβ480原核表达重组质粒,获得了比格犬MBP-ERβ融合蛋白,为犬种属特异性ERβ多克隆抗体的制备及功能分析奠定了基础.     

非洲绿猴血液学和血清生化指标的测定及分析

目的检测50只健康非洲绿猴血液学、血清生化指标,分析不同性别、不同年龄段(青幼年组:1~3岁,成年组:4~6岁)非洲绿猴的血液学、血清生化指标的差异。方法应用全自动血细胞分析仪及血液生化分析仪分别测定清醒状态下健康非洲绿猴血液学及血清生化指标。结果血液学指标中青幼年组与成年组差异显著的指标有红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、血细胞压积(HCT)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、淋巴细胞百分比(LYMPH%)、单核粒细胞百分比(MONO%)、嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)(P0.05)。青幼年组中雌猴与雄猴差异显著的指标有白细胞数(WBC)、RBC、HGB、HCT、NEUT%、LYMPH%、MONO%(P0.05),成年组中雌猴与雄猴差异显著的指标有HCT(P0.05),其它指标差异不显著。血清生化指标中青幼年组与成年组差异显著的指标有白蛋白(ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(CREA)(P0.05),青幼年组雌猴与雄猴差异显著的指标有CREA(P0.05),成年组雌猴与雄猴差异显著的指标有总蛋白(TP)、胆固醇(CHOL)(P0.05),其它指标差异不显著。结论本文初步建立了非洲绿猴的常规生物学数据,为评价其生物学特性及相关应用提供一定的数据基础,可供参考。     

不同直径山羊卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力

目的研究山羊卵巢表面不同直径卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力,优化山羊早期胚胎体外生产系统。方法收集繁殖期和非繁殖期山羊卵巢,采集表面直径小于1.5 mm、1.5-2.5 mm、2.5-3.5 mm和大于3.5 mm4种卵泡卵母细胞,以Hoechst33342染色检查核发育阶段;同时,利用体外培养方法观察不同直径卵泡卵母细胞的成熟、受精和早期胚胎发育能力。结果直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞主要处于GVI期;1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞以GVⅠ、GVⅡ和GVⅢ期为主;2.5-3.5 mm卵泡卵母细胞在GVⅡ到GVⅣ期间平均分布;大于3.5mm卵泡卵母细胞主要为GVⅢ到GVBD期。体外培养实验发现,直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞仅有个别能完成成熟和卵裂;大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,能完成成熟和受精,但1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞的受精卵通常阻滞于4-8细胞期;当卵泡直径大于2.5 mm时,卵母细胞才能较好地支持胚胎继续发育,其桑/囊胚的比例达到30%以上。卵泡卵母细胞的发育特征和体外发育能力与动物所处的繁殖季节无关。结论山羊卵巢上直径大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,大于2.5 mm卵泡卵母细胞能支持早期胚胎继续发育。     

白介素17 受体mRNA 在恒河猴中的分布

目的:阐述白介素17 受体(IL-17R)mRNA 在恒河猴不同组织中的分布与丰度。方法:建立实时荧光定量PCR 方法,检测免疫、消化和生殖等系统的各组织中IL-17RA mRNA 的水平,并检测了肠道IL鄄17RC mRNA 的水平及恒河猴、非洲绿猴和食蟹猴PBMC 中IL-17RA 和IL-17RC mRNA 的表达水平。结果:IL-17RA mRNA 在所有检测过的组织中均有表达,但不同器官系统的表达水平存在显著差异(P<0.05);IL-17RC mRNA 在大肠中的表达水平高于小肠;恒河猴PBMC 中IL-17RA mRNA 水平显著高于非洲绿猴(5 倍)和食蟹猴(3 倍),但PBMC 中IL-17RC mRNA 水平在3 种动物中均低于检测下限。结论:IL-17RA 广泛分布于恒河猴各种组织中,表达水平存在明显的组织差异和种属差异。