神经元蜡样质脂褐质沉积病伴癫痫持续状态1例报告

1病例报告 患儿女性．7岁．因“发作性抽搐伴智力、语言、运动及发育迟缓4年,持续性抽搐5h”于2013年12月5日入院。患儿4岁前智力、语言、运动及视力发育均正常。3年前无明显诱因突然出现全身性抽搐伴意识丧失,持续2～3min缓解。后每隔20d至1个月发作1次。持续数分钟至20min不等。     

hsa-miR-100的生物信息学分析

目的 对hsa-miR-100进行靶基因、功能预测等生物信息学分析,为深入研究hsa-miR-100功能提供理论和试验基础.方法 利用Pubmed检索miRNA-100相关文章,通过miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析hsa-miR-100序列,应用miRanda、TargetScan及PicTar预测hsa-miR-100靶基因,结合已证实的靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析.结果 hsa-miR-100与多种肿瘤发生、发展有关,其序列在各物种间具有高度保守性.hsa-miR-100靶基因功能富集于基因沉默、染色质沉默、细胞生物合成负性调节等(P<0.01),涉及肿瘤信号通路、溶酶体信号通路、凋亡信号通路等信号转导通路(P<0.05).结论 hsa-miR-100可能参与肿瘤发生相关的生物学过程.     

四妙散加味治疗下肢慢性溃疡

笔者近4年来,临床应用四妙散加味治疗下肢慢性溃疡14例,结果：治愈9例,好转4例,无效1例.方法如下： 方药组成及治法：苡仁、茯苓各20g,苍术、牛膝、车前子、泽兰、白术,丹参各15g,黄柏12g,生甘草6g.加减：下肢皮肤色紫黯加当归、赤芍；创面流脓加蒲公英、银花；伴湿疹加防己、虎杖；疼痛甚者加炙乳香、炙没药；病……     

miR-146b靶标预测及功能分析

目的 通过对miR-146b进行系统的生物信息学分析,预测miR-146b的靶基因及其功能.方法 应用miRBase获取并分析miR-146b的序列特征;应用TargetScan、PicTar及miRanda预测miR-146b的靶基因,进行功能注释和信号转导通路分析;应用PubMed、Google等信息搜索工具综述miR-146b已有功能研究.结果 miR-146b在各物种之间具有高度保守性.功能注释显示预测靶基因主要富集于促细胞增殖、转录调控、调控细胞分化等生物学过程.信号转导通路分析显示预测靶基因显著富集于白血病、ErbB信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶通路等.结论 生物信息学分析提示,miR-146b可能与细胞分化、代谢密切相关.     

LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响

目的观察LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,分别构建LYRM1基因过表达细胞株(LYRM1-pcDNA3.1/myc-His B)和空载对照细胞株(pcDNA3.1/myc-His B);实时定量RT-PCR验证转染情况;RT-PCR检测诱导分化成熟后的线粒体代谢酶HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C基因表达水平。结果 RT-PCR结果证实LYRM1质粒转染成功;与空载对照组比较,LYRM1过表达组HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C mRNA表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论 LYRM1基因过表达下调了3T3-L1脂肪细胞中线粒体的代谢关键酶基因表达水平,可能参与调节脂肪细胞线粒体的代谢。     

人miR-152基因的慢病毒载体的构建及稳定株筛选

目的构建人miR-152基因重组慢病毒载体并筛选稳定表达株。方法 PCR扩增包括miR-152前体所在区域的基因组DNA,克隆到慢病毒载体表达质粒pGIPZ中,得到重组的pGIPZ-miR-152表达载体,通过与包装质粒共转染HEK-293T细胞,获得携带miR-152 minigene的重组慢病毒。用病毒感染HepG2细胞,72 h后用嘌呤霉素筛选。用real-time PCR法检测miR-152基因的表达。结果构建的重组质粒经双酶切验证和测序比对鉴定正确;该质粒转染293T细胞获取的慢病毒滴度达7.5×107TU/mL;用病毒感染HepG2细胞,感染效率达70%以上。药物筛选10 d后,获得的过表达株miR-152表达量比正常细胞高近10倍。结论成功构建人miR-152基因慢病毒载体质粒pGIPZ-miR-152,并筛选出miR-152过表达细胞株,为后续实验奠定基础。     

人miR-146b慢病毒载体构建及人脂肪细胞中表达验证

目的 构建人miR-146b慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果。方法 以人基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-146b区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36 h开始观察荧光标记,72 h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-146b的相应表达量。结果 成功构建人miR-146b慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到85%以上,miR-146b过表达水平可接近4倍。结论 本研究成功构建了人miR-146b慢病毒表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础。     

NYGGF4(PID1)基因过表达对脂肪细胞线粒体代谢的影响

【目的】 观察NYGGF4(PID1)基因过表达对脂肪细胞线粒体代谢的影响。 【方法】 以3T3-L1前体脂肪细胞为研究对象,体外培养稳定转染NYGGF4(PID1)基因(NYGGF4-pcDNA3.1 (+)/myc-His B)的3T3-L1前体脂肪细胞,以转染空载体[pcDNA3.1(+)/myc-His B]的3T3-L1前体脂肪细胞为对照,经1-甲基-3异丁基黄嘌呤(MIX)加地塞米松、胰岛素方案诱导分化为成熟脂肪细胞,采用Real-time PCR检测线粒体代谢酶指标:己糖激酶(Hexokinase,HKI)、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA,ACC)、柠檬酸合成酶( citrate synthase,CS)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(Carnitine palmitoyl-transferase 1,CPT1)、细胞色素C(Cytochrome c,Cyc-c)基因表达水平。 【结果】 NYGGF4(PID1)过表达显著降低3T3-L1脂肪细胞己糖激酶、乙酰辅酶A羧化酶、柠檬酸合成酶、肉毒碱棕榈酰转移酶1、细胞色素C基因表达水平,差异有统计学意义。 【结论】 NYGGF4(PID1)基因过表达,下调3T3-L1脂肪细胞中定位于线粒体的代谢关键酶,提示NYGGF4(PID1)基因过表达能影响3T3-L1脂肪细胞的线粒体代谢。     

斑马鱼胚胎发育过程中内源性多肽的表达及与眼发育的相关研究

目的：研究斑马鱼发育过程中内源性多肽的表达规律以及与眼发育的相关性。 方法：分别收集0、48 h斑马鱼胚胎进行多肽质谱分析,筛选发育过程中的差异多肽,利用生物信息学方法分析差异多肽对应的前体蛋白及前体基因,从中筛选与眼发育相关的内源性多肽。结果：研究共筛选得到差异多肽232条。理化特性分析发现分子量均分布在2 000 Da以下,等电点主要以弱酸和弱碱性为主,中性极少。生物信息学发现Vitellogenin（VTG）、Titin（TTN）基因编码的前体蛋白富集较多与胚胎发育和眼发育相关的差异多肽。信号通路分析（ingenuity pathway analysis,IPA）发现差异多肽的分子功能和生理系统功能与胚胎发育相关,差异多肽富集信号通路包括轴突介导的信号通路、FAK信号通路和MAPK信号通路,这些信号通路与眼发育密切相关。结论：斑马鱼胚胎期发育过程中内源性差异多肽理化特性稳定,与胚胎发育密切相关,并可能通过相关信号通路来影响眼发育,将为眼发育提供新的研究思路,为机制研究奠基基础。     

hsa-miR-335靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-335进行系统的生物信息学分析,预测hsa-miR-335可能参与的生物学过程,为本研究小组深入研究其在脂肪细胞分化中的功能和机制奠定基础。方法通过miRbase获取并分析hsa-miR-335序列特征;应用TargetScan,PicTar及miRanda预测hsa-miR-335的靶基因,并结合已证实的靶标基因,进行功能注释（Gene Ontol-ogy）和Pathway富集分析（Pathway Enrichment）。应用NCBI Mapviewer、UCSC Genome Browser等工具对hsa-miR-335进行启动子相关预测。结果 miR-335在各物种之间具有高度保守性,其靶基因功能富集于胰腺外分泌、脂质激酶活性调控、wnt受体信号的调控、细胞周期等生物学过程（P〉0.01）,其靶基因信号通路富集于促性腺激素释放激素信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、细胞周期等信号转导通路（P〈0.05）。启动子预测提示hsa-miR-335为基因内miRNA,在基因组上下游10kb以内存在CpG岛,转录起始位置（TSS）、Poly A信号、转录因子结合位置（TFBS）。结论 hsa-miR-335预测的靶基因集合富集于多个生物学过程,与肥胖密切相关,并可能存在其独立的转录调控机制。为后续miR-335在肥胖人脂肪细胞中生物学功能研究奠定基础。