中国百日咳鲍特菌血清型及其相关基因分析

目的 了解我国1955-2005年临床分离百日咳鲍特菌及疫苗株的血清型及其相关基因特征.方法 应用抗菌毛蛋白2(fim2)和3(fim3)单克隆抗体凝集反应分析我国不同时期分离的80株百日咳鲍特菌株和3株疫苗株的血清型,并与相应的多克隆抗体方法进行比较分析;同时应用PCR方法扩增这些菌株fim2和fimd基因,并对这些PCR产物进行DNA测序分析.结果 研究表明,与多克隆抗体分析结果相比较,单克隆抗体玻片凝集方法和微量凝集反应除一株临床分离株的血清型分析结果不同,其余菌株的结果均一致.研究菌株的血清型分析结果显示17株临床分离菌株和CS与P3S10疫苗株的血清型为fim2&3型、48株菌为fim2型、15株分离菌株与18530疫苗株为fim3型.在我国扩大免疫规划前分离菌株的血清型以fim2型和fim2&3型为主,随着大范围的百日咳疫苗接种,临床分离菌株中fimd型血清型细菌所占的比例逐渐增多.分析菌株中fim2和fimd的基因型以fim2-1(92.5%)和fim3-A(95.0%)亚型为主;18530疫苗株基因型为fim2-2和fim3-A,而其他两株疫苗株的基因型均为fim2-1和fim3-A.在2000年以后,分离出现含有fim3-B和fim3-D亚型菌株,这些结果表明随着我国大范围百日咳疫苗免疫接种,百日咳分离菌株表达的血清型及其基因序列也出现适应性变异.结论 本研究证实了抗fim2和fim3单克隆抗体在百日咳血清型分析的特异性和实用性.对我国不同时期分离菌株和疫苗株的血清型分析,为我国百日咳疫苗株的检定、流行病学和细菌进化的研究奠定了基础.     

经皮椎弓根置钉定位装置在胸腰椎经皮椎弓根置钉中的临床应用

目的探讨经皮椎弓根置钉定位装置在经皮椎弓根置钉术中的临床应用效果。方法收集采用经皮椎弓根螺钉置入术的椎体压缩性骨折患者30例,根据不同定位方法进行分组,试验组15例,采用经皮椎弓根定位装置定位,对照组15例,应用克氏针进行定位,椎弓根螺钉置入的数量均为60枚。比较2组使用C臂机X线透视次数、手术时间及螺钉穿破椎弓根比例。结果试验组C臂机X线透视次数少于对照组,手术时间短于对照组(均P<0.05)。2组椎弓根穿破比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在经皮椎弓根螺钉置入术中,经皮椎弓根定位装置的应用虽不能降低手术并发症的发生率,但可以减少术中C臂机X线透视次数及缩短手术时间,是一种安全、有效的定位方法。     

石氏手法松解术治疗凝肩症的临床研究

目的:观察石氏手法松解术治疗凝肩症的临床疗效。方法:200例患者按治疗方案的不同分为试验组与对照组,两组均以功能锻炼为基础治疗,其中试验组100例患者采用石氏手法松解术治疗,对照组100例患者由临床医师根据临床实际情况选用相应的治疗措施。结果:试验组97例患者、对照组93例患者获得完整随访。试验组显效率为95.88%,对照组显效率为65.59%,治疗后两组患者的肩关节简式McGill疼痛评分、Constant-Murley肩关节功能评分(CMS)均较治疗前明显改善,试验组较对照组更佳,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:石氏手法松解术治疗凝肩症可明显改善患者肩部不适及肩关节功能受限,临床疗效显著。     

无细胞百日咳疫苗抗体活性持久性监管研究

目的：比较不同类型无细胞百日咳疫苗免疫小鼠后诱导的抗体应答及其持久性。方法：将来自于3家企业,采用2种不同工艺生产的无细胞百日咳疫苗（组分苗和共纯化苗）按一定比例稀释后分别给3组小鼠皮下接种,0.5 mL/只,于第4周加强免疫,剂量与初免疫相同。于免疫后第4周、第5周、第8周、第12周、第17周、第30周、第40周、第50周和第65周取血,分离血清,检测小鼠血清中抗百日咳抗体IgG水平（抗-PT和抗-FHA）和PT的中和抗体水平,并对其结果进行分析比较。结果：两类疫苗组检测结果比较,在免疫后第30周之前,两组之间抗-PT和抗-FHA水平无显著性差异;但在30周之后,两组之间抗-PT和抗-FHA水平有显著性差异（P < 0.05）,组分苗组抗体水平高于共纯化苗组。中和抗体方面,组分苗组中和抗体水平高于共纯化苗组,两组比较有显著性差异（P < 0.05）。结论：两种类型的百日咳疫苗免疫小鼠后均能诱导产生体液免疫应答,组分苗组的抗体持久性（包括百日咳抗体IgG和百日咳PT中和抗体）强于共纯化苗组;且百日咳IgG抗体与中和抗体之间具有一定的相关性。     

百日咳鲍特菌基因组多态性分析

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支气管黏附因子(tcfA)和百日咳毒素基因上游启动子区域(ptxP)3种等位基因序列分析结果显示,共发现3种等位基因组合型:Prn1/ptxP1/tcfA2、Prn2/ptxP3/tcfA2和Prn3/ptxP1/tcfA2,所占比例分别为71.43%、19.05%和9.52%。MLVA法将21株分离菌株分成了12个不同的MLVA型,MLVA-136型和MLVA-152型为主要流行MLVA型,所占比例分别为28.57%和19.05%,并发现1种新MLVA型菌株。统计学分析表明MLVA法较等位基因分型法具有更高的分辨率。结论国内部分地区百日咳杆菌流行菌株与欧洲其他国家不同,掌握百日咳杆菌分子流行病学的第一手资料,对有效预防和控制百日咳的流行以及制定新的百日咳疫苗免疫策略具有指导意义。     

不同ELISA系统检测人血清百日咳IgG抗体的比较研究

目的使用A、B、C 3组酶联免疫吸附试验(ELISA)系统进行百日咳疫苗临床血清检测,每组ELISA系统包括至少一种百日咳毒素(PT)、一种丝状血凝素(FHA)和一种黏附素(PRN)包被抗原,其中C组抗原包括2种FHA抗原,酶标二抗是相同的抗人IgG抗体。比较不同包被抗原对百日咳疫苗临床血清中3种IgG抗体检测结果的影响。方法收集164对无细胞百日咳、白喉和破伤风疫苗基础免疫前、免疫后临床血清,使用ELISA法检测和计算血清百日咳IgG抗体的转阳率和单位值。使用χ2检验比较转阳率差异,使用方差分析比较抗体检测结果。结果 A组抗原检测IgG抗体结果为PT 82.19IU/mL,FHA 81.66IU/mL,PRN39.34IU/mL;转阳率均为100.0%。B组抗原检测结果为PT 95.59IU/mL,FHA 57.39IU/mL,PRN 40.76IU/mL;转阳率PT抗体为99.4%,其余为100.0%。C组抗原检测结果为PT 60.74IU/mL,2种FHA分别为29.33IU/mL和53.32IU/mL,PRN 34.05IU/mL,转阳率为99.4%、95.1%、100.0%和98.8%。3组抗原检测的临床血清转阳率经χ2检验FHA差异有统计学意义(P0.05),PT和PRN差异无统计学意义(P0.05);抗体GMC经方差分析,所有组抗原检测3个抗体值之间差异均有统计学意义(P0.05)。结论本次人临床血清抗体转阳率和抗体值达到保护力水平,但是不同抗原检测系统之间差异均有统计学意义,应尽快建立百日咳抗血清IgG检测用抗原试剂国家参考品。     

第三代百日咳疫苗毒性国家标准品的制备和标定

目的：制备和标定第三代百日咳疫苗毒性国家标准品,用于百日咳疫苗毒性检测。方法：按照 《中国药典》三部(2015 版)的相关要求,选用百日咳疫苗生产菌株CS 株进行发酵罐培养,将收获的百日咳菌液灭活后分装冻干,作为第三代百日咳疫苗毒性国家标准品的候选品。按照《中国药典》三部要求对候选品进行检定,以第二代百日咳疫苗毒性国家标准品为标准,组织6家单位进行协作标定, 并采用热加速试验对候选毒性标准品进行稳定性考察。结果：共制备合格候选毒性标准品7000支,其外观、水分、分装精度均符合《中国药典》的相关要求;协作标定结果经统计学分析,最终确定每支第三代毒性标准品LPU 为60,HSU 为84;且稳定性良好。结论：候选毒性标准品各项指标均符合《中国药典》的各项要求,且一致性、稳定性良好,可作为第三代百日咳疫苗毒性国家标准品使用。     

吸附百白破联合疫苗实施同步批签发的回顾性研究

为保障一类疫苗的市场供应,于2019年年初开通了疫苗同步批签发通道。目前为止,已有3家企业生产的吸附无细胞百白破联合疫苗产品实施同步批签发。本文主要以百日咳疫苗为例:1)回顾性分析该产品在实施同步批签发以后产品质量的一致性、稳定性;2)中国食品药品检定研究院在抽样检验时的主要考量依据;3)企业关键自检数据与中检院抽检数据的对比。为同步批签发的应用提供数据积累。     

吸附百白破联合疫苗实施同步批签发的回顾性研究

为保障一类疫苗的市场供应,于2019年年初开通了疫苗同步批签发通道。目前为止,已有3家企业生产的吸附无细胞百白破联合疫苗产品实施同步批签发。本文主要以百日咳疫苗为例：1)回顾性分析该产品在实施同步批签发以后产品质量的一致性、稳定性;2)中国食品药品检定研究院在抽样检验时的主要考量依据;3)企业关键自检数据与中检院抽检数据的对比。为同步批签发的应用提供数据积累。