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1.
目的构建C57小鼠L型氨基酸转运载体1(LAT1)的真核表达载体,转染Neuro-2a肿瘤细胞进行表达,探讨LAT1对Neuro-2a细胞增殖及凋亡的影响。方法采用RT-PCR扩增出LAT1全长目的基因,定向克隆pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-LAT1重组表达质粒,通过脂质体法将阳性克隆转染Neuro-2a细胞,经G418筛选获得稳定表达株后,用RT-PCR和western blot蛋白印迹法检测LAT1的表达情况。通过MTT法检测各组Neuro-2a细胞的增殖情况,并借助流式细胞仪检测LAT1对Neuro-2a细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建小鼠pcDNA3.1-LAT1真核表达载体,酶切和测序证实其序列正确,并成功转染Neuro-2a细胞建立稳定转染细胞系。MTT法显示转染重组质粒pcDNA3.1-LAT1的Neuro-2a细胞增殖速度显著高于对照组(P0.05),且流式细胞术检测转染组对Neuro-2a细胞具有促进增殖抑制凋亡的作用。结论转染pcDNA3.1-LAT1质粒的Neuro-2a细胞能成功表达LAT1蛋白,且LAT1对Neuro-2a细胞的增殖和凋亡均有显著影响,为进一步研究LAT1的生物学作用奠定了重要基础。  相似文献   
2.
目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和C-Jun氨基端激酶(JNK)在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平的变化,探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的病理机制。方法 将60只大鼠随机分为糖耐量受损(IGT)模型组(n=20)、2型糖尿病(T2DM)模型组(n=20)、IGT对照组(n=10)及T2DM对照组(n=10),高脂饲料喂养复制IGT大鼠模型,高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)制备T2DM大鼠模型,采用TUNEL法检测各组大鼠肝脏细胞凋亡;实时荧光PCR 技术检测肝脏组织中MIF mRNA的表达; Western Blot方法检测肝脏组织中MIF 、Caspase-3、JNK蛋白表达及磷酸化JNK (p-JNK)的表达。结果 IGT大鼠及T2DM大鼠肝组织凋亡细胞明显增多;IGT组和T2DM组肝组织MIF基因表达较各自对照组明升高(P<0.01),MIF 、Caspase-3、JNK蛋白表达及JNK磷酸化水平也明显升高(P<0.05或P<0.01);与IGT组相比,T2DM组Caspase-3、MIF、JNK蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而JNK磷酸化水平是明显升高(P<0.01)。结论 糖代谢异常大鼠肝组织的损伤以及非酒精性脂肪肝的发生可能与肝组织MIF 、Caspase-3、JNK表达水平的升高及JNK磷酸化水平的增强有关。  相似文献   
3.
C57BL/6J小鼠脂肪组织总RNA提取及周脂素基因的克隆   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 用改进后的方法提取高质量的RNA,以此为模板,应用T-A克隆法克隆C57BL/6J小鼠周脂素基因编码区,对其进行测序验证,并与GenBank比对.方法 在试剂说明书基础上,改进提取脂肪组织RNA的方法,从C57BL/6J附睾脂肪组织提取高质量的总RNA,用RT-PCR扩增出周脂素编码区基因,并将目的基因编码区克隆入pMD18-T载体中,转化E-coli JM109后,筛选阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后,对其进行测序验证,并与GenBank比对.结果 用改进后的方法成功提取出了高质量的总RNA,并且成功提取构建的重组载体中含有周脂素基因的全长序列,与GenBank公布的序列一致.结论 改进的后的脂肪组织RNA提取方法是可行的,并获得周脂素基因的cDNA.为进一步研究其生物学功能奠定了基础.  相似文献   
4.
目的探讨术后早期炎性肠梗阻的发病机制、临床特点、诊治方法及预防措施。方法对2008年10月至2012年7月山西省定襄县中医院收治的42例腹部手术后早期炎性肠梗阻患者的临床资料进行回顾分析,42例患者均表现为排气后肠蠕动一度恢复、进食后又出现以腹胀为主的肠梗阻症状,经查体和X线腹部平片确诊。结果 40例经保守治疗后治愈,于5~21d(中位时间9d)肠蠕动重新恢复,效果良好。2例保守治疗2周不见缓解,1例由于黏连导致血运障碍而行部分小肠切除术,另1例腹腔肠管广泛黏连、扩张,行黏连松解术并肠排列术,中位治愈时间为15d。结论术后早期炎性肠梗阻,多发于腹部手术后2周以内,治疗取决于引起梗阻的原因及临床病情进展情况,首选保守治疗。  相似文献   
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目的构建小鼠周脂素(prilipin,Plin)原核表达载体,表达周脂素蛋白并进行初步纯化,为研究周脂素的功能奠定基础。方法通过酶切从pMD18-Plin重组载体上酶切下周脂素目的基因,定向插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果构建的pET-32a-Plin载体能够表达周脂素重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白的50%,经初步纯化后,纯度达95%以上。结论成功构建了周脂素原核表达载体,并在原核系统中表达了重组蛋白,纯化的蛋白纯度较高,可用于后续试验。  相似文献   
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