黄连NRAMP3基因的克隆与生物信息学分析＊

目的 克隆黄连（Coptis chinensis Franch.）中自然抗性相关巨噬细胞蛋白（Natural Resistance-Associated Macrophage Protein，NRAMP）的编码基因，并进行生物信息学分析。方法 从黄连基因组中比对NRAMP3基因，并根据比对的基因序列设计特异性引物，经PCR扩增得到的黄连NRAMP3编码序列，进行克隆、测序和生物信息学分析，并利用qPCR技术对黄连NRAMP3基因进行时空表达分析。结果 得到黄连NRAMP3基因cDNA序列，全长1617 bp，编码538个氨基酸，通过与GenBank上的其他蛋白序列比对，将其命名为CcNRAMP3；序列分析显示，黄连NRAMP3基因编码的氨基酸序列包含一个典型的NRAMP结构域（PF01566），有12个跨膜结构域，亚细胞定位于液泡膜上，具有疏水性强的特点。二级结构中肽链构象主要包括α-螺旋与无规则卷曲两部分；三级结构模型具有葡萄球菌锰转运突变体（MntH）的晶体结构。利用系统进化关系分析推测它可能具有转运重金属元素Cd功能。对黄连NRAMP3基因的组织表达分析表明，CcNRAMP3基因在黄连叶片中表达量最高。在遭受镉胁迫时，在须根中表达量先升高后降低，该基因很可能主要在根部对镉进行响应并发挥作用。结论 本研究首次通过克隆得到黄连NRAMP3基因，并运用生物信息学方法对其理化性质、结构特征等进行了分析预测，这些结果将为黄连NRAMP3基因的功能研究以及其对镉转运的调控机制提供理论依据和基因资源。     

人参皂苷F2对过氧化氢诱导细胞损伤的保护作用

目的研究人参皂苷F2对人胚肾293(HEK-293)细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以0.4 mmol/L过氧化氢(H_2O_2)诱导HEK-293细胞氧化应激,1.25、5和20μmol/L人参皂苷F2预处理,MTS法检测细胞活力;DCFH-DA荧光探针考察细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量;试剂盒检测丙二醛(malondialchehyche, MDA)水平和抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性;蛋白质印迹法(Western blot)和qRT-PCR检测核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)/抑制蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)信号的蛋白和mRNA表达量。结果 1.25、5和20μmol/L人参皂苷F2处理正常HEK-293细胞后对细胞无毒性或促增殖作用;人参皂苷F2预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于损伤组,各组间差异均有统计学意义(P0.05);氧化损伤组的DCF荧光较对照组相比显著增强(P0.05),人参皂苷F2预处理后细胞ROS相对量呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P0.05);人参皂苷F2预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P0.05),SOD和GSH-Px活性显著高于损伤组(P0.05),5和20μmol/L人参皂苷F2能显著提高CAT活性(P0.05);人参皂苷F2处理后,Nrf2的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P0.05),Keap1的mRNA和蛋白表达量显著低于损伤组(P0.05)。结论人参皂苷F2具有细胞保护作用,可降低HEK-293细胞ROS和MDA水平,提高抗氧化酶活性,其作用机制可能是通过调节Nrf2/Keap1信号通路以抵抗过氧化氢导致的细胞氧化应激损伤。     

宣白承气汤联合西医常规治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期系统评价

目的系统评价宣白承气汤联合西医常规治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的临床疗效及安全性。方法计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知识资源总库(CNKI)、中国学术期刊数据库(万方数据)、中文科技期刊数据库(维普网)、Pub Med,纳入宣白承气汤及其加减联合西医常规治疗与单纯西医常规治疗比较治疗AECOPD的随机对照试验,采用Cochrane系统评价手册进行文献质量评价和数据提取,采用RevMan5.3对临床疗效指标进行Meta分析。结果纳入文献12篇,Meta分析结果显示:试验组总有效率高于对照组,差异有统计学意义[OR=4.83,95%CI(3.09,7.54),P0.000 01];试验组较对照组可显著降低中性粒细胞百分比、C反应蛋白等炎性指标和动脉血二氧化碳分压,显著提高第一秒用力呼气容积占预计值的百分比、用力肺活量占预计值的百分比、第1秒用力呼气容积/用力肺活量等肺功能指标和动脉血p H值、动脉血氧分压,差异均有统计学意义。纳入文献均未报道严重不良反应。结论宣白承气汤联合西医常规加减治疗AECOPD疗效显著,但由于纳入文献量和样本量较少,研究质量较低,其临床疗效与安全性仍需高质量的多中心、大样本、随机对照试验进一步验证。     

菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的克隆与原核表达分析＊

目的 克隆菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的全长编码序列，利用原核系统表达融合蛋白，为进一步研究该基因在菊花脑萜类合成中的功能提供理论依据。方法 以菊花脑基因组数据为基础，设计特异性引物，PCR扩增CnTPS1的全长编码序列，利用生物信息学分析软件分析序列特征。利用qRT-PCR技术分析CnTPS1基因在不同组织中的基因表达量。构建原核表达载体，体外诱导目的蛋白表达。结果 CnTPS1编码序列全长1749bp，编码582个氨基酸；基因表达模式分析表明该基因在茎和管状花中表达量较高；原核表达系统能诱导出67.58kDa大小的蛋白。结论 首次从菊花脑中克隆得到一个芳樟醇合酶基因CnTPS1，运用生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质、结构特征等进行了分析预测，分析了该基因的组织表达模式，并在原核表达系统中成功诱导表达出目标蛋白，这些结果将为菊花脑萜类合酶基因的功能以及萜类物质生物合成途径的解析提供理论依据。     

不同来源前列腺基质细胞对前列腺癌细胞IGF-1和p-AKT表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子在前列腺癌肿瘤-基质交互作用中的地位及其作用机制.方法 将前列腺癌旁基质细胞和良性前列腺基质细胞分别与前列腺癌细胞系PC-3细胞分隔共培养(并设空白对照),之后检测前列腺癌细胞中IGF-1 mRNA(半定量RT-PCR)和p-AKT蛋白表达(Western blot).结果 与空白对照组相比较,癌旁基质细胞共培养组IGF-1 mRNA表达有所上调、p-AKT蛋白表达有所上调,但无统计学意义(P＞0.05);良性基质细胞共培养组IGF-1 mRNA和p-AKT蛋白表达显著下调(P＜0.05).相关性分析显示各组前列腺癌细胞IGF-1 mRNA与p-AKT蛋白表达呈正相关.结论 良性前列腺基质细胞通过水溶性因子抑制前列腺癌细胞中IGF-1及其下游因子表达,前列腺癌旁基质细胞则丧失了该抑制作用.     

颈部端提手法对颈型颈椎病患者颈椎长度及角度影响的运动学参数分析

目的客观化描述颈部端提手法对颈椎长度及角度的影响,为端提手法操作的量化提供数据支撑。方法选择30例年龄在18~36周岁的男性颈型颈椎病患者,由同一位高年资推拿医师实施颈部端提手法操作,采用红外光点高速运动捕捉测试系统采集端提手法操作过程中,受试者颈椎长度及角度的变化情况。结果端提瞬间,受试者颈椎被提伸长度均值为10.39 mm;端提瞬间,受试者颈椎屈伸角度均值为5.81°,侧屈角度均值为2.92°,旋转角度均值为13.03°。结论受试者颈椎被端提瞬间的角度变化是一个包括屈伸、侧屈、旋转的复合过程;颈部端提手法是以解决颈椎矢状位、冠状位活动受限为主的整复类手法。     

电视胸腔镜手术治疗纵隔肿瘤41例报道

目的：探讨电视胸腔镜手术（VATS）治疗纵隔肿瘤的可行性、手术方法及临床疗效。方法回顾性分析2008年2月至2013年6月行VATS切除纵隔肿瘤41例,采用全身麻醉双腔气管插管,健侧单肺通气,备开胸包,使用VATS技术切除前、中、后纵隔肿瘤。结果41例纵隔肿瘤中,39例顺利施行胸腔镜手术,2例中转开胸,无手术死亡病例。2例术后发生一过性轻微Horner综合征,均为胸顶部神经源性肿瘤,术后予以神经营养治疗,随访1月后症状消失。无其他围术期并发症。结论在病例选择适当时,电视胸腔镜手术治疗纵隔肿瘤,安全可行。     

ICU获得性肌无力的发病与中医“痿证”相关性的探讨

根据痿证"肺热叶焦""湿热毒邪侵袭""内脏精血虚耗""脾病四肢不用""痰瘀阻络"等相关发病机制,结合促使ICU获得性肌无力(ICU-AW)发生的危险因素,探讨两者之间的相关性,并总结出润肺清热、解毒祛湿、补益脾肾、活血通络、通利关节等治法,旨在为ICU-AW的临床治疗提供思路。     

土壤熏蒸处理对连作三七生长发育及土壤理化性状的影响

目的:探讨氯化苦熏蒸后对连作三七生长发育及土壤理化性状的影响,以期为氯化苦在三七连作障碍防治应用提供参考。方法:采用田间小区试验,选用连续种植2年三七的土壤,设无熏蒸和氯化苦熏蒸两个处理,分别对三七出苗率、存苗率、农艺性状、土壤理化性状、三七药用成分含量及氯化苦在土壤和三七中的残留进行测定。结果:连作三七土壤未经氯化苦熏蒸,三七于移栽一年后全部死亡;氯化苦熏蒸后,移栽一年后的存苗率为68%,第二年为60%;氯化苦熏蒸处理显著提高二年生连作三七的株高、叶片长宽、须根长、剪口长宽、主根长宽及主根生物量等农艺性状,主根鲜重增加了84%,干重增加了111%;与无熏蒸处理相比,熏蒸处理一年后土壤交换性酸、石灰需要量显著降低了56%和15%;细菌、真菌和放线菌数量显著降低了50%、19%和38%。此外,熏蒸对连作三七植株和土壤中均无氯化苦残留,对三七药用有效成分亦无显著影响。结论:氯化苦对三七连作障碍的防治具有良好的效果,建议在生产中根据实际情况调整使用。