分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,其脾细胞与Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞株(HE_(20)IB_8、HE_(21)IIG_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2～6.4×10~6。因相捕捉HBeAg、HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂中的包被抗体配合人抗HBe-HRP与Abbott试剂结果非常一致。     

血管生成素在COS-7细胞中的表达及其生物活性研究

本研究旨在实现血管生成素（ANG）在真核细胞中的表达并探讨其生物学功能。通过RT—PCR获得ang基因，构建真核表达载体pcDNA3．1-ang，在转染COS-7细胞后进行瞬时表达，通过Western blot对表达产物进行鉴定。利用MTT法分析表达上清对ECV304细胞的促增殖作用，同时利用鸡胚分析表达上清的促血管生成作用。结果表明：瞬时转染后细胞培养上清中有重组ANG的表达，并能与抗-ANG单克隆抗体发生特异性反应。与转染空载体的对照相比．转染pcDNA3．1-ang的细胞培养上清具有促进ECV304细胞增殖的作用，并能显著促进鸡胚尿囊膜血管生长。结论：ang可在COS-7细胞中瞬时表达，其表达产物具有显著的促细胞增殖和促进血管生成的作用。     

人白介素22对刀豆蛋白A致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的建立小鼠急性肝损伤模型,分析和评价人白介素22在小鼠急性肝损伤模型中的保护作用。方法利用刀豆蛋白A致小鼠急性肝损伤模型,分析并评价模型效果。在此基础上将雌性小鼠随机分为正常组、保护组及模型组;保护组和模型组分别尾静脉注射重组IL-22蛋白和生理盐水6h后,尾静脉注射ConA致小鼠急性肝损伤,正常组尾静脉注射等量生理盐水。16h后检测小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）活性,同时取小鼠肝组织进行病理学检查。结果IL-22能明显降低小鼠血清的ALT、AST水平,减轻ConA对肝组织的病理损伤。结论IL-22对ConA致小鼠肝损伤具有保护作用。为进一步研究其保护作用机制奠定了基础。     

应用抗HBeAg单克隆抗体检测血清HBeAg/抗HBe

本研究室在建立分泌抗HBeAg单克隆抗体-的淋巴细胞杂交瘤细胞株之后,研究了应用单克隆抗HBe检测血清中HBeAg/抗HBe的某些条件以了解用于临床的可能性。现将结果扼要报告如下。 本研究中单克隆抗-HBe为HE_(20)IB_8及HE_(21)2G_(11)。多克隆抗-HBe为抗HBe阳性人血清,琼脂双向扩散效价在1∶16～1∶32之间,经DEAE纤维柱层析纯化IgG。单克隆抗HBe或多克隆抗HBe均以过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP)。血清标本为本院住院病人血清,经过RPHA检测HBsAg;SP-RIA检测抗HBs;ELISA检测抗HBc,HBeAg/抗HBe,4℃保存1周或     

抗人肝癌细胞相关抗原的单克隆抗体

 用人体肝癌培养细胞株SMMC—7721免疫Balb/c小鼠,融合得到六株抗人肝癌细胞单克隆抗体的杂交瘤,选其中一株（B1）连续克隆化培养5次。用间接免疫荧光测定并鉴定抗体,此株杂交瘤能在体外稳定分泌抗体,腹水效价（ELISA）为10^-8。所染色的肝癌以外的组织细胞无明确的反应,仅部分胚胎组织有交叉,说明该单克隆抗体有较好的肝癌细胞相关性。抗体亚型为小鼠IgM型。染色体核型分析,其数量是亲本细胞之和,计2n=80～106,有1～2条中部着丝点标记染色体。该杂交瘤命名为FP-4。     

重组SRH蛋白冻干保护剂的研究

目的筛选并优化重组SRH蛋白的冻干保护剂,使其能够保持良好的生物学活性。方法选择不同浓度的冻干保护剂,包括甘露醇、右旋糖酐40、蔗糖和甘氨酸等组成不同浓度的单一和复合配方,冷冻干燥后检测冻干样品的溶栓活性和成型的变化,同时,冻干样品经过37℃加速实验后,检测其溶栓活性和成型状况的改变,对比分析各组保护剂的效果。结果不同浓度的甘露醇和右旋糖苷40对SRH蛋白的保护作用良好,没有明显差异,而不同浓度的蔗糖和甘氨酸保护效果较差。复方中以右旋糖苷40、蔗糖和甘胺酸的复合对目的蛋白的保护作用最好;不同浓度的甘露醇、蔗糖和甘氨酸的复合应用无明显的保护作用。结论以右旋糖苷40、蔗糖和甘氨酸组成的复合配方对重组SRH蛋白的冻干过程有明显的保护作用。     

分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞系(HE_(20)1B_8,HE_(21)2C_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2×6.4×10~6。因相捕捉HBeAg,HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验均证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂包被抗体,配合人抗HBe-HRP,结果与Abbott试剂非常一致。     

抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

本文用聚合人血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种BALB/c/小鼠,取其脾细胞与Sp2/0-Ag骨髓瘤细胞进行常规方法融合,以4种酶联法进行筛选,并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3株为分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。再经亚克隆培养和多次传代与冻存,并用抑制酶联法检测其抗体,均为抗前S(2)抗体阳牲。接种BALB/c小鼠     

载脂蛋白A1-P11融合蛋白诱导血清抗体在大鼠、小鼠及家兔中的动态变化

目的探讨载脂蛋白A1-P11融合蛋白诱导血清抗体在大鼠、小鼠以及家兔中的变化,比较融合蛋白在三种动物中的反应原性,确定适于评价载脂蛋白A1-P11药效的动物种类。方法大鼠、小鼠及家兔各14只,随机选取7只按照1mg/kg体重静脉注射载脂蛋白A1-P11融合蛋白,隔天给药;各组余下的7只动物注射生理盐水作为对照。并在给药前1天、第2、4、8、12、15、18和20次给药时及停药后第1、2、3和4周采血。用酶联免疫吸附法检测不同时间点的中和抗体。结果载脂蛋白A1-P11在这三种动物中抗体变化的消长规律基本一致,但是家兔产生抗体显著高于小鼠和大鼠。结论三种动物中,大鼠和小鼠更适合作为评价载脂蛋白A1-P11长期功效的动物,因而这两种动物的病理模型可作为评价载脂蛋白A1-P11药效的候选动物,为探讨载脂蛋白A1-P11治疗高脂血症和干预动脉粥样硬化奠定基础。     

重组人KGF-2的制备及生物学活性研究

目的:实现重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)的原核可溶性高效表达,并获得活性良好的重组蛋白.方法:将编码人成熟KGF-2的cDNA构建至pET/21a表达载体中,利用大肠杆菌BL21进行表达,对表达条件(如诱导温度和诱导时间等)进行优化,并对目的蛋白的表达情况进行电泳分析;利用阳离子交换柱对重组蛋白进行纯化,对纯化的rhKGF-2利用MTT法检测其促IEC-6及NIH/3T3细胞的增殖活性.结果:通过对表达条件的优化,rhKGF-2的表达量可占到全菌总蛋白的25%,并且基本上全部为可溶性形式表达;利用阳离子交换柱对rhKGF-2进行纯化,薄层扫描分析其纯度高于90%.利用MTT法对rhKGF-2的活性进行研究,结果表明,低浓度的rhKGF-2就能够促进IEC-6细胞增殖,但对于NIH/3T3细胞需高浓度的rhKGF-2才能促进其增殖.结论:本研究实现了对rhKGF-2的可溶性高效表达,纯化后的rhKGF-2具有较好的活性,这为进一步的功能研究以及基因工程重组药物的开发奠定了基础.