岩大戟内酯B刺激MCF-7细胞条件培养基降低人脐静脉血管内皮细胞的增殖和迁移

目的:观察岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)刺激MCF-7条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞的影响,并分析岩大戟内酯B的作用机制。方法:分别用25,55,85 mg·L~(-1)岩大戟内酯B刺激MCF-7人乳腺癌细胞为JB刺激组,正常培养的MCF-7细胞为MCF-7组。获得25,55,85 mg·L~(-1)JB刺激的MCF-7细胞上清液为相应浓度的条件培养基。利用各组条件培养基分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为25,55,85 mg·L~(-1)JB组,正常培养的HUVEC为非条件培养基组。分别用噻唑蓝(MTT)比色法,Annexin V-FITC细胞凋亡实验,细胞划痕实验和transwell细胞小室迁移实验观察25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC增殖、凋亡、迁移的变化;并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JB对MCF-7细胞的作用机制,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析各组条件培养基中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量变化。结果:与正常组比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞凋亡数目逐渐升高(P0.01),HUVEC增殖显著降低(P0.01);25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞划痕面积闭合率和细胞迁移率较非条件培养基组均显著降低(P0.01)。与MCF-7比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB均能够明显抑制MSC-7细胞蛋白激酶B/信号传导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/STAT3/m TOR)信号通路表达,下调MCF-7细胞表达的VEGF因子。结论:岩大戟内酯B通过抑制Akt/STAT3/m TOR信号通路下调MCF-7细胞旁分泌VEGF,抑制血管内皮细胞的增殖或迁移活性。     

姬松茸药用价值研究进展

目的:介绍姬松茸的生物活性物质及其药理活性的研究进展,为该真菌的应用研究与开发提供参考。方法:采用文献综述法,阐述国内、外近年来对姬松茸药用价值的研究进展。结果:姬松茸具有抗肿瘤、免疫调节、抗突变、抗氧化、抗炎等药理学作用。结论:姬松茸的深入开发对癌症、糖尿病、高脂血症、动脉硬化以及慢性肝炎等疾病的防治具有重要意义。     

玉米须水提物对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能的影响

目的探讨玉米须水提物对T2DM大鼠胰岛β细胞功能的影响。方法水溶提取法制备玉米须水提物（主要成分为玉米须多糖）。采用高脂高糖饲养加小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导T2DM雄性SD大鼠模型,将实验动物分为正常对照组、模型对照组,以及玉米须水提物低、中、高剂量组和二甲双胍组,共6组。给药8周后,测定各组大鼠空腹血糖（FBG）、体重（BW）和空腹胰岛素（Fins）,计算HOMA-IR和HOMA-β,免疫组化法分析胰岛中胰岛素表达水平,并作HE染色观察。结果与模型组比较,中、高剂量的玉米须水提物可呈剂量依赖型显著降低糖尿病大鼠FBG、BW和Fins的水平（P〈0.05或P〈0．01）,明显降低大鼠HOMA-IR（P〈0．05或P〈0．01）,显著升高HOMA-β（P〈0．05或P〈0．01）,明显增强胰岛细胞中胰岛素表达（P〈0．05或P〈0．01）。结论玉米须水提物能改善T2DM大鼠胰岛素低抗和胰岛β细胞功能。     

稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立

目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体。经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测。用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108TU/mL和1×108TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95%以上。与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOX3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系。     

西黄丸对H22荷瘤小鼠Bcl-2基因mRNA表达的影响

[目的]研究西黄丸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中bcl-2基因mRNA表达的影响。[方法]采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定肿瘤组织中bcl-2基因mRNA在给药10d前后的表达差异。[结果]西黄丸可下调H22荷瘤小鼠瘤组织中凋亡相关基因bcl-2基因mRNA的表达。[结论]西黄丸可通过诱导肿瘤细胞凋亡而实现抑瘤作用,为传统中成药在临床上治疗肿瘤提供进一步的理论依据。     

葛根素对围绝经期抑郁症模型小鼠的神经保护作用及机制研究

目的:探讨葛根素对围绝经期抑郁症模型小鼠行为影响及神经生物学机制。方法:清洁级昆明小鼠饲养1周以适应环境。旷场实验(OFT)筛选后,随机分为假手术组、围绝经期抑郁症模型组、氟西汀组(FLU,3mg/kg)、雌激素组(E,0.15 mg/kg)和葛根素组(92 mg/kg),每组10只。采用小鼠双侧卵巢切除(OVX)联合慢性不可预知性温和应激(CUMS)法建立围绝经期抑郁症动物模型。各给药组于每日应激前1 h灌胃给药,其余各组给予等体积生理盐水,共计21 d。观察小鼠动情周期变化,测定行为学变化,观察海马组织形态学改变,测定脑组织单胺类递质含量,测定海马组织c AMP反应元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路主要蛋白表达。结果:与假手术组比较,各OVX组小鼠连续7 d内连续监测未见动情周期变化,证明去势成功;围绝经期抑郁症模型组小鼠呈现抑郁样行为,表现为自发活动及探索行为减少、行为绝望时间增加、体质量增长缓慢(P0.01或P0.05),海马神经元损伤、萎缩、数量减少、尼氏体减少及早期凋亡变化,脑组织五羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)及多巴胺(DA)含量减少(P0.01);海马组织CREB-1、磷酸化c AMP反应元件结合蛋白(p-CREB-1)、BDNF及酪氨酸蛋白激酶B(Trk B)蛋白表达减少(P0.01)。与围绝经期抑郁症模型组比较,给予葛根素(Pue)治疗后,可改善围绝经期抑郁症模型小鼠抑郁样行为,表现为增加自发活动及探索行为、减少行为绝望时间、体质量增加迅速(P0.01或P0.05);减轻海马组织神经元损伤及凋亡细胞,增加脑组织5-HT、NE及DA含量(P0.01),增加海马组织CREB-1、p-CREB、BDNF及Trk B蛋白表达(P0.01),差异具有统计学意义。结论:采用小鼠双侧OVX联合CUMS可成功制备围绝经期抑郁症动物模型。葛根素具有神经保护及抗围绝经期抑郁症作用,其机制主要通过减轻海马神经元损伤、抑制神经元早期凋亡、增加脑组织单胺类递质含量及上调脑组织CREB-BDNF信号通路主要蛋白表达而发挥的。     

齐墩果酸对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的 探讨齐墩果酸(OA)对顺铂耐药胃癌 SGC-7901(SGC-7901/CDDP)细胞增殖及细胞凋亡的影响.方法 体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株 SGC-7901 /CDDP,MTT 比色法检测OA对 SGC-7901/CDDP 细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测基因组 DNA 的降解;蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白酶的激活.结果 MTT实验证明OA对SGC-7901/CDDP 细胞的生长有抑制作用,100 μmol/L OA作用72 h对SGC-7901/CDDP细胞的抑制率达62%,并表现为时间和剂量依赖性;琼脂糖凝胶电泳实验证明100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后基因组DNA被降解,可见较典型的DNA梯形带;蛋白质免疫印迹分析表明,100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后,细胞内凋亡相关的蛋白酶caspase-3被激活.结论 OA在体外能够诱导SGC-7901/CDDP细胞凋亡,诱导凋亡的途径可能是线粒体途径.     

青春双歧杆菌双元蛋白酸奶对肠道的保护作用

目的：探讨青春双歧杆菌双元蛋白酸奶对小鼠和人群志愿者肠道正常菌群以及实验性便秘小鼠排便功能的影响.方法：实验于2004-06/2005-01在齐齐哈尔医学院药物研究所完成.选择昆明小鼠80只,雌雄各半.另选择志愿者20名,男女各半,均自愿参加观察.①青春双歧杆菌双元蛋白酸奶对小鼠肠道菌群的影响：将20只小鼠随机分成两组,正常对照组和样品组各10只.采用自身对照,样品组小鼠采用青春双歧杆菌双元蛋白酸奶25 mL/kg连续灌胃21 d,正常对照组用等量市售酸奶灌胃连续21 d.在给受试物之前及最后1次给受试物后24 h,无菌采取粪便,培养后以菌落形态、革兰氏染色等鉴定计数每克湿便菌落数,以检查正常菌群肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌的数量.②青春双歧杆菌双元蛋白酸奶对人肠道菌群的影响：将健康志愿者20名随机分成2组,正常对照组和样品组各10名.标准数据对照,样品组服青春双歧杆菌双元蛋白酸奶300mL/d,正常对照组服市售酸奶300 mL/d,均连续饮用15 d.最后给受试物之后24 h无菌采取粪便,培养后观察菌落形态、革兰氏染色等鉴定计数每克湿便菌落数.③青春双歧杆菌双元蛋白酸奶对小鼠肠推进运动的影响：取昆明小鼠30只,随机分成3组,样品组、模型组、正常组各10只.样品组灌胃青春双歧杆菌双元蛋白酸奶25 mL/kg/d,模型组、正常对照组灌胃等容量市售酸奶,连续15 d.第15天禁食12 h,样品组、模型组灌胃地芬诺酯50mg/kg,正常组除外.10min后各组用墨汁溶液灌胃,麻醉脱颈致死后取小肠,测量墨汁推进长度及小肠全长,计算墨汁推进移动率（墨汁推进率=墨汁推进长度/小肠总长度&;#215;100%）.④青春双歧杆菌双元蛋白酸奶对抗药物性便秘实验：取昆明小鼠30只,随机分成3组,样品组、模型组、正常组各10只.样品组按25 mL/kg/d灌胃青春双歧杆菌双元蛋白酸奶,连续15 d;模型组、正常组灌等容量市售酸奶15 d,实验前模型组和样品组分别灌胃地芬诺酯50 mg/kg,正常组除外,30 min后各组灌胃含受试物的墨汁,各小鼠均放入单笼,记录各小鼠排首粒黑便时间和8 h内排便总量.结果：参与者及实验动物全部进入结果分析,无脱落数据.①小鼠和受试人群粪便中肠杆菌、肠球菌、乳杆菌和双歧杆菌的数量：青春双歧杆菌双元蛋白酸奶导致小鼠及受试人群肠道内双歧杆菌、乳杆菌的数量显著高于对照组,而肠杆菌、肠球菌数量显著高于正常对照组（t=6.742～32.570,P＜0.01）.②地芬诺酯致小鼠便秘后首次排黑便时间、排便总量和墨汁推进移动率：实验性便秘小鼠首次排便时间缩短,排便量增加,墨汁推进率加快（F=7.196～111.642,P＜0.01）.结论：青春双歧杆菌双元蛋白酸奶可以通过增加有益菌双歧杆菌、乳杆菌的数量,降低肠杆菌、肠球菌数量而提高肠道的抗病能力,同时可以促进肠蠕动,防止便秘,具有明显改善肠道功能和润肠通便作用.     

姬松茸复合多糖对环磷酰胺的增效作用及其机制

目的:观察姬松茸复合多糖是否对环磷酰胺的抗肿瘤作用有增效效应,并分析其作用机制。方法:实验于2003-03/2004-04在齐齐哈尔医学院医药科学研究所完成。①选用健康成年昆明种小鼠135只,按随机数字表法分为9组:正常对照组,荷瘤对照组,环磷酰胺组,姬松茸复合多糖高、中、低剂量组,姬松茸复合多糖高、中、低剂量 环磷酰胺组,每组15只。②除正常对照组小鼠外,将0.2mL浓度为1×1010L-1S180肿瘤细胞接种于其余小鼠腋窝皮下。正常对照组和荷瘤对照组灌胃0.5mL生理盐水,1次/d,共10d。环磷酰胺组先灌胃0.5mL生理盐水,6h后腔注射环磷酰胺10mg/穴kg·d雪;姬松茸复合多糖高剂量、中剂量、低剂量组分别按700,350,175mg/穴kg·d雪灌胃姬松茸复合多糖眼姬松茸多糖(50%)、香菇多糖(33%)、茯苓多糖(94%)均购自浙江庆元县金源真菌多糖有限公司。姬松茸多糖、香菇多糖、茯苓多糖以质量比4∶2∶1的比例混合,用前以蒸馏水稀释至所需浓度演1次/d,共10d。姬松茸复合多糖高、中、低剂量 环磷酰胺组先分别灌胃350,175,88mg/穴kg·d雪姬松茸复合多糖,6h后各组小鼠腹腔注射环磷酰胺5mg/kg;正常对照组和荷瘤对照组胃饲给予等体积蒸馏水。1次/d,共10d。③用药4周后,计算抑瘤率眼(1-实验组平均瘤重/荷瘤对照组平均瘤重)×100%演。依q值评价联合用药增效情况。q=两药合用时的抑瘤率/眼A药的抑瘤率 (1-A药的抑瘤率)B药的抑瘤率演。q=0.85～1.25为两药作用相加,q>1.25为两药作用增强(或协同),q<0.85为两药拮抗。④应用电子显微镜观察肿瘤细胞形态变化,采用酶联免疫分析法检测血清白细胞介素2和P27蛋白表达变化。⑤组间比较采用t检验。结果:在实验过程中,荷瘤对照组造模失败1只,死亡3只,环磷酰胺组死亡3只,造模失败2只,姬松茸复合多糖高剂量组死亡2只,联合用药组死亡2只,造模失败1只。有121只进入结果分析。①抑瘤率:姬松茸复合多糖高、中、低剂量组和环磷酰胺组分别为10.6%,52.5%,30.2%,72.1%,姬松茸复合多糖高、中、低剂量 环磷酰胺组分别为65.8%,83.4%,82.7%,q值分别为0.876,0.962,1.027,均>0.85,表明不同剂量的复合多糖能增强环磷酰胺的抗小鼠S180肿瘤的作用。②血清白细胞介素2水平:荷瘤对照组明显低于正常对照组(t=11.655,P<0.01),复合多糖中、低剂量组,姬松茸复合多糖中、低剂量 环磷酰胺组明显高于荷瘤对照组和环磷酰胺组(t=2.413～9.935,P<0.05～0.01)。③P27蛋白表达:荷瘤对照组明显低于正常对照组穴t=68.976,P<0.01雪,而各治疗组明显高于荷瘤对照组(t=3.188～2.684,P<0.01)。姬松茸复合多糖中、低剂量和姬松茸复合多糖高、低剂量 环磷酰胺组明显高于环磷酰胺组(t=3.132～5.511,P<0.01)。④透射电镜观察结果:单用姬松茸复合多糖各剂量组可见肿瘤细胞核固缩明显,凋亡细胞数量增多,部分细胞核崩解形成小体。姬松茸复合多糖各剂量 环磷酰胺组可见肿瘤细胞体积变小,细胞核固缩明显,细胞表面微绒毛消失,细胞内游离核蛋白体明显减少,胞质内线粒体空泡变性。结论:不同剂量的复合多糖均能增强环磷酰胺的抗小鼠S180肿瘤作用,其作用机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡,增强白细胞介素2、抑癌基因p27的表达有关。     

硝酸异山梨醇酯霜膜复合剂经皮给药治疗心绞痛的疗效

硝酸异山梨醇酯霜膜复合剂经皮给药治疗心绞痛的疗效刘玉梅，刘吉成，皮秀杰，孙居亮，康慧笔者运用局部给药而产生全身作用的ＴＴＳ（ｆｒａｎｓｄｅｒｍａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ．ｓｙｓｔｅｍ）原理，研制了硝酸异山梨醇酯（ＩＳＤＮ）霜膜复合剂。经临床试用表明，...