携带报告基因EGFP的CXCR4 RNA干扰质粒的构建及生物活性的鉴定

目的构建携带报告基因EGFP的CXCR4RNA干扰质粒,证实其高效抑制靶基因表达的生物活性。方法设计有发夹状结构的两条DNA序列,用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGensil-1质粒,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。重组质粒转染PC-3m细胞株,检测绿色荧光蛋白表达及对细胞CXCR4表达的抑制情况。结果成功构建了CXCR4靶向的RNA干扰质粒pGensil-1/siCXCR4,在靶细胞可同时表达siRNA及绿色荧光蛋白。结论pGensil-1/siCXCR4质粒的成功构建对利用基因干扰技术治疗前列腺癌转移方面的研究奠定了一定的实验基础。     

非肌层浸润性膀胱癌病人经尿道膀胱肿瘤电切术切缘范围的选择分析

目的: 探讨Ta 及T 1 期非肌层浸润性膀胱癌( Non－Muscle invasive bladder cancer NMIBC) 病人经尿
道膀胱肿瘤电切术( Transurethral resection of baldder tumor TUＲBT) 的安全切缘。方法: 回顾性分析120 例行
TUＲBT 的Ta 及T 1 期NMIBC 病人的病例资料,根据手术切缘范围分为10 mm 组( 38 例) 、15 mm 组( 52 例) 、20
mm 组( 30 例) ,分析3 组手术情况及术后复发情况,对肿瘤复发进行Cox 多因素分析。结果: 20 mm 组手术时间
长于10 mm 组、15 mm 组,术中出血量多于10 mm 组、15 mm 组,差异有统计学意义( P＜0．05) ; 20 mm 组术后出
血率为43．33%高于10 mm 组的15．79%、15 mm 组的17．31%,差异有统计学意义( P＜0．05) ,但10 mm 组、15 mm 组
术后出血率比较,差异无统计学意义( P＞0．05) ; 10 mm 组切缘阳性率44．74%高于15 mm 组的17．31%、20 mm 组
的13．33%,复发率为63．16%高于15 mm 组的38．46%、20 mm 组的36．67%,平均复发时间短于15 mm 组、20 mm
组,差异有统计学意义( P＜0．05) ,但15 mm 组、20 mm 组比较,差异无统计学意义( P＞0．05) 。单因素分析显示,
性别、肿瘤数量、临床分期与NMIBC 病人术后复发无关( P＞ 0．05) ,切缘范围、切缘阳性与术后复发有关( P＜
0．05) ; 采用Cox 回归分析显示,切缘范围减小、切缘阳性是NMIBC 复发的独立危险因素。结论: TUＲBT 切缘范
围为15 mm 既可减少手术时间、术中出血量,又不会增加降低切缘阳性率及术后复发率; 另外,切缘范围减小、切
缘阳性是NMIBC 术后复发的独立危险因素。     

腔内钬激光碎石治疗双侧输尿管结石合并肾功能不全27例临床分析

目的:探讨双侧输尿管结石合并肾功能不全的治疗方法。方法:对27例双侧输尿管结石合并肾功能不全患者采用腔内钬激光碎石治疗,分析其治疗效果。结果:26例一次碎石成功,1例结石上漂入肾盂,置双J管后行体外震波碎石术(ESWL)碎石成功,24例血生化检验指标恢复正常,3例仍有氮质血症。结论:腔内钬激光碎石术是治疗双侧输尿管结石合并肾功能不全安全有效的方法。     

小干扰RNA对LNcap细胞CXCR4基因表达的影响

目的:研究小干扰RNA(siRNA)对LNcap细胞中CXC趋化因子4(CXCR4)基因表达的影响。方法:用针对CXCR4基因的siRNA表达质粒pSilencer-CXCR4转染人前列腺癌细胞株LNcap细胞,用RT-PCR方法检测其CXCR4基因表达水平的变化。结果:重组体pSilencer-CXCR4转染LNcap细胞后,能明显抑制CXCR4基因的表达;转染48 h后,其表达水平下降75%,与空白对照组和阴性对照组比较,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论:利用RNA干扰技术能有效抑制靶基因的表达,为下一步有关CXCR4的研究奠定一定的基础。     

Syndecan-1、MMP-1在肾癌中的表达及临床意义

应用免疫组化SP法检测细胞黏附分子Syndecan-1和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）在正常肾组织和肾癌组织中的表达。结果为Syndecan-1在肾癌中低表达者预后差，MMP-1在肾癌中高表达者预后差，二者表达呈负相关（rs=-0．651，P〈0．001）。认为二者联检可预测肾癌的转移潜能及评估预后。     

经尿道等离子体电切术联合疝无张力修补术治疗高龄前列腺增生并腹股沟疝

目的 探讨经尿道等离子体双极电切术(TUPKVP)联合疝无张力修补术治疗高龄前列腺增生症(BPH)并腹股沟疝的疗效.方法 先行TUPKVP术.再同期行疝修补术:用花瓣状网塞填充疝环口,用片状补片加强腹股沟管后壁.结果 术中安全、术后效果满意,具有创伤小、恢复快、拔出尿管后排尿顺畅、腹股沟区无紧缩感、疼痛轻等优点;随访3个月～4年无严重术后并发症及疝复发的优点.结论 TUPKVP术联合疝无张力修补术一期治疗高龄BPH并腹股沟疝效果良好,尤其对合并其他内科疾病的患者更具有优越性和实用性.     

CXCR4-siRNA逆转录病毒载体体外靶向抑制hTERT^＋肿瘤细胞CXCR4基因的表达

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的RNA干扰逆转录病毒载体,并研究其在hTERT 前列腺癌细胞、乳腺癌细胞中的表达。方法:用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siR-NA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的Pgensil-1质粒,以hTERT启动子代替U6启动子,再将重组基因片段导入到逆转录病毒真核表达载体PLXSN中,行限制性酶切鉴定。转染PA317病毒包装细胞,收获病毒上清分别转染前列腺癌细胞PC-3m、LNCaP及人胚肺成纤维细胞MRC5和人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR检测CXCR4mRNA表达。结果:限制性酶切鉴定该重组质粒,成功构建了PLXSN/EGFP-hTERT-siCXCR4。与空载体组比较,PC-3m、LNCaP、MCF7细胞中CXCR4-siRNA对CXCR4mRNA的48h抑制率分别为(87.02±10.34)%、(61.70±9.77)%、(88.31±9.20)%。MRC5细胞中PLXSN-hTERT-siCXCR4对CXCR4mRNA不抑制。结论:该逆转录病毒系统中hTERT启动子调控的下游RNA干扰序列可选择性地在hTERT 前列腺癌细胞、乳腺癌细胞中表达,在hTERT-MRC5细胞不表达,具有显著的靶向性。     

经尿道等离子体电切术治疗高龄高危前列腺增生症的体会

目的：探讨经尿道等离子体双极电极汽化电切术（TUPKVP）治疗高龄高危前列腺增生症（BPH）的安全性及疗效。方法：采用TUPKVP治疗高龄高危BPH患者61例。结果：手术切除前列腺重量（14．1～90．0）g,平均53g,出血量30～100ml,未出现TURS、真性尿失禁,术中、术后无输血,所有患者术后均排尿通畅,随访3～12个月,IPSS评分由术前（22．4±4．2）分,降至术后（7.2±3．3）分。结论：TUPKVP是高龄高危BPH的安全有效的治疗方法,TUPKVP的汽化止血效果更好．更能减少TURS的发生,对高龄高危的BPH患者安全性更高。     

RNAi表达载体对前列腺癌细胞CXCR4基因表达的抑制作用

趋化因子CXC受体4及其配体基质细胞衍生因子1（SDF-1）相互构成的反应轴与肿瘤的恶性表现密切相关。它们不仅在肿瘤细胞的迁移过程中起着一定作用，而且与肿瘤细胞发生、增殖和分化等有密切关系，并可能成为肿瘤基因治疗中的一个新靶点。我们利用可在细胞内自主生成siRNA的表达质粒转染激素依赖性和非依赖性人前列腺癌细胞株LNCaP和PC-3m，观察其对CX-CR4mRNA及蛋白表达的影响。     

钬激光治疗输尿管粘连包裹性结石临床体会

目的：观察分析输尿管镜下钬激光治疗输尿管包裹粘连性结石的效果,总结手术技巧。方法：利用Wolf8/9.8CH10°输尿管硬镜。人工注水扩张输尿管口,直视入镜。钬激光设备采用美国科威中30W碎石机。处理粘连息肉功率23W,脉宽700,碎石功率16W,脉宽350。先清除息肉再碎石,最后处理与输尿管粘连的残留结石。结果：123例患者中,一次性成功113例,4例因视野不清改开放手术,穿孔1例改开放手术,5例残留结石漂移入肾盂后期行体外冲击波碎石术（ESWL）成功。术后输尿管狭窄1例。结论：钬激光治疗输尿管内包裹粘连性结石,如条件许可应作为首选治疗方法。能够将息肉与粘连一同处理,较其他碎石设备更具高效性。术前常规静脉肾盂输尿管造影（IVP）了解尿路情况。对病史长,反复ESWL结石位置无改变,结石造成上尿路积水较重或结石有中空改变者,应考虑此类情况。