五指山小型猪近交系异种移植产业化研发进展

为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容。本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-猴异种角膜内皮移植取得突破性进展、WZSP近交系PERV无传染性群体建立、WZSP近交系是理想的动物模型和异种移植供体等方面,介绍WZSP近交系异种移植产业化的研发进展。     

中国近交系猪到人异种移植靶抗原研究

目的　研究人血清对近交系猪组织的结合情况及猪组织内 α-半乳糖残基 (α- Gal)的分布。方法　采取近交系中国版纳小耳猪 4头及近交系五指山猪 1头的心、肝、脾、肺、肾、胰、小肠、胸腺、皮肤、淋巴结及各级血管组织 ,分别以中国正常人 A、B、O和 AB型血清及 BSI- B4为一抗或亲和物 ,用亲和免疫组织化学方法观察各型人血清对上述各组织的结合和组织内 α- Gal的分布情况。并用 α-半乳糖基酶 (α- GT)消化后 ,重复上述实验。结果　两种近交系猪组织的血清结合及 α- Gal分布情况相似。A、B、O和 AB型血清与被测两种猪的各部位组织结合无明显差异 ,主要为各级血管内皮细胞及部分实质细胞。BSI- B4与血清结合的部位相似。软骨、外周神经、肌肉未见血清及 BSI- B4结合。经 α- GT消化后 ,人血清和 BSI- B4与两种猪组织的结合反应除少数部位存在差异外 ,反应消失。结论　对猪进行基因改造时可不考虑其抗原强弱及分布问题。α- Gal是近交系猪的主要靶抗原 ,但不排除存在 α- Gal以外的靶抗原 ,通过对近交系猪基因改造克服排斥反应是较好的策略。     

关于牙齿近中移动的实验研究

目的　通过动物实验对牙齿近中移动的发生机制进行探讨。方法　以五指山系小型猪上下颌第一磨牙为实验对象 ,通过模型测量分析实验牙近中移动情况 ,以二甲酚橙和盐酸四环素作荧光标记进行组织学观察。结果　下颌有、无对实验牙 ,16周移动量分别为 0 14mm和 1 2 1mm ,上颌实验牙 2 4周移动量分别为 1 36mm和 2 0 8mm。实验牙远中牙槽骨可见荧光标记 ;无对实验牙在垂直方向上有牙槽骨改建发生 ;下颌无对实验牙较有对实验牙远中牙槽骨荧光带间距离大 ;近远中牙骨质都有荧光带形成。结论　实验结果不支持越隔纤维作用或磨牙萌出力作用引起牙齿近中移动的观点 ;牙齿近中移动与颌骨内应力分布有关 ,牙槽骨改建的量与牙齿近中移动量呈正相关     

不同月龄近交系五指山小型猪免疫器官的组织形态学

目的对不同月龄近交系五指山小型猪免疫器官组织特点进行观察,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供基础形态学资料。方法2、4和12月龄小型猪免疫器官被分别固定,常规石蜡切片、HE染色,光镜观察。结果4月龄前,胸腺内胸腺细胞和胸腺小体的数量均随年龄的增长逐渐增多;12月龄时,胸腺细胞数量有所减少,排列比较疏松,胸腺小体的数量和体积基本没有变化;2月龄时胸腺小体周围可见许多大小不同的空泡状细胞和细胞碎片。4月龄前,脾白髓动脉周围组织淋巴鞘和脾小结在也随年龄增长而逐渐增多增大,但12月龄时有所减少并维持在一定水平,其变化与大鼠和鸡的基本一致。2月龄淋巴结皮质靠内,髓质靠外,4月龄两者分界不明显,12月龄淋巴小结较大,淋巴细胞排列疏松,髓质内淋巴细胞较少,毛细血管增多。结论从整体结构上观察,近交系五指山小型猪免疫器官的组织学结构与人和其它哺乳动物之间没有明显的差异。     

脱离接触后磨牙位移的研究——生物力学牙过萌模型的建立

牙过萌现象在口腔科临床工作中比较常见,给患者的治疗带来不少问题,引起了口腔医学界的重视,但其产生机理至今未能搞清.本文通过拔牙、调磨等方法使实验用小型猪的3个第一恒磨牙脱离(牙合)接触,经16周观察后发现,这3个牙均有较明显的(牙合)向移位,成功地建立了磨牙过萌的动物模型,为进一步研究牙过萌的机理打下了良好的基础.     

小型猪微卫星标记多重PCR体系的建立与应用

目的 建立实验用小型猪微卫星标记的多重PCR体系和进行实验猪群的遗传监测. 方法利用3种不同荧光标记的微卫星引物结合ABI3700 遗传分析仪测序的方法,通过筛选和优化反应条件,建立可用于实验用小型猪遗传质量控制的稳定的多重PCR反应体系.在此基础上进一步检测实验用小型猪近交群体的遗传变异以验证建立体系的效率.结果 筛选出了2组理想的组合:组合1包括SW742、S0228和S0218座位,复性温度58℃和56℃;组合2包括S0155、SW902和S0227三个座位,复性温度为60℃和58℃.组合内不同座位标记不同的荧光染料.还以此检测了实验用小型猪群体中的遗传变异.结论 初步建立了中国三种实验用小型猪微卫星标记检测的多重PCR体系, 为快速、大通量、准确的小型猪遗传监测提供了初步的技术基础.     

铅对五指山猪肝脏毒性的研究

目的 研究铅对五指山猪(WZSP)肝脏的毒性作用,为研究铅对人类肝脏损伤的风险评估提供理论参考.方法 将20头健康3月龄清洁级WZSP随机分为5组,每组4头(雌雄各半,雄性去势),用含铅量分别为0.046、6.790、17.370、53.600和154.000 mg/kg的饲料对其进行饲喂染毒,连续100 d.观察肝脏表观特征的变化,并测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)的活力.结果 随着染铅剂量的增高,ALT活力呈现明显的上升趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);AST活力也呈现递增的趋势,但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);γ-GGT活力逐渐升高,154.000 mg,kg染铅组γ-GGT活力高于对照组,差异有统计学意义(P＜O.05);ALP活力与对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).154.000 mg/kg染铅组的肝脏表观特征发生变化,出现颜色变暗,包膜与实体脱离及黄疸症状.结论 铅暴露可对WZSP肝脏产生毒性作用.     

哺乳动物胚胎的基因工程

基因移植技术在家畜中的应用主要受卵核观察困难的限制。利用干涉—反差显微镜(I—C)对兔和绵羊胚胎(Hammer等,1985),利用离心加干涉—反差显微镜对猪和牛胚胎(Wall等,1985)进行观察,就可观察到卵核并能进行显微注射。本文的目的是确定通过显微注射的基因能否结合到其它哺乳动物的基因组中以及人体生长激素(hGH)基因能否提高家畜的生长速率。为验证这种可能性,我们将金属巯因-人体生长激素(MThGH)融合基因显微注入兔、绵羊和猪的卵核中,并就家畜对基因的结合和表达进行检验。     

猪胚胎生殖细胞分化实验研究

目的 利用维甲酸(RA)和二甲基亚砜(DMSO)诱导猪胚胎生殖细胞(EG细胞)分化,证明猪胚胎生殖细胞能够在体外分化为多种组织细胞.方法 利用悬浮培养和无饲养层培养,将猪胚胎生殖细胞分化为拟胚体,再将拟胚体分别培养于添加维甲酸(Retinoic acid, RA)和二甲基亚砜(Dimethylsulphoxide, DMSO)诱导剂的培养基中培养,诱导胚胎干细胞分化.结果 当悬浮培养时猪EG细胞形成拟胚体,再经RA和DMSO诱导分化为类桑椹胚体、类ES样细胞集落、神经样细胞和滋养层样细胞.结论 猪胚胎生殖细胞能够在体外分化为多种组织细胞,证明猪EG细胞具有多能性.     

利用胚移技术培育SPF种猪群可能性研究

由于猪胚胎透明带是一天然屏障,能有效地防止病原体侵入,所以自1951年猪胚胎移植成功以来,许多学者利用该技术培育SPF种猪群并获得成功。为将此项技术尽快应用于我国现代化养猪业以及培育卫生合格的小型猪、近交系实验动物,1987至1990年。我们重点研究