焦磷酸测序法快速检测胰腺癌K-ras基因点突变

目的 建立基于焦磷酸测序技术的胰腺癌K-ras基因点突变的检测方法,并与Sanger测序法作一比较.方法 用焦磷酸测序法(Pyrosequencing)和Sanger测序法(Sanger sequencing)分别在10名正常胰腺组织、49例胰腺癌、11例慢性胰腺炎、18例胰腺良性囊肿、7例胰岛素癌、9例壶腹癌、7例胆管癌及7例十二指肠乳头癌石蜡包埋组织的DNA中检测K-rag基因12密码子点突变.结果 采用上述两种方法在所有正常胰腺组织、慢性胰腺炎、胰腺良性囊肿、胰岛素癌、壶腹癌、胆管癌及十二指肠乳头癌均未见K-ras基因点突变,而采用焦磷酸测序法发现胰腺癌石蜡包埋组织K-ras基因点突变率为71.4%(35/49),显著高于采用Sanger测序法发现胰腺癌石蜡包埋组织K-rag基因点突变率(61.2%,30/49).结论 焦磷酸测序法较Sanger测序法更为敏感,且焦磷酸测序法准确、快速、高通量,适合临床标本的批量测定.     

色素上皮细胞衍生因子对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 本研究试图通过检测人脑胶质瘤U87细胞中色素上皮细胞衍生因子(PEDF)以及凋亡相关蛋白的表达,探讨其表达在胶质瘤的增殖和细胞凋亡调控中的作用.方法 将100μg/ml的PEDF加入U87细胞中(PEDF处理组),同时以未加PEDF蛋白的胶质瘤细胞作对照组(U87con),采用四甲基偶氮唑蓝法榆测PEDF对胶质瘤细胞U87增殖率的影响;流式细胞术检测胶质瘤细胞是否凋亡;Western-blot(免疫印迹)检测PEDF处理组凋亡相关蛋白p16的变化.结果 实验数据显示:与对照组相比,当PEDF浓度为100μg/ml时,对U87的抑制率为(54.29±0.62)%,PEDF处理组胶质瘤细胞的增殖明显减慢(t=2.63,P＜0.05);PEDF处理过的凋亡细胞产生明显增多,annexin V+和PI-的细胞为(21.84±0.36)%,提示胶质瘤细胞处于凋亡早期(t=2.86,P＜0.05);PEDF诱导的发生凋亡的胶质瘤细胞中,p16蛋白的表达量明显增加(0.82±0.09),与对照组相比(0.43±0.03),差异具有统计学意义.结论 PEDF与p16协同作用,可能在胶质瘤细胞凋亡的调控中起着重要的作用,从而抑制胶质瘤细胞增殖.     

胶质瘤患者RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化的研究

目的 探讨RASSF1A(RAS association domain family 1A)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与启动子甲基化的关系。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测28份胶质瘤组织和4份正常脑组织中RASSF1A基因mRNA相对表达水平;用甲基化特异性PCR方法研究胶质瘤组织、正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 RASSF1A mRNA在4份正常脑组织中全部表达;在脑胶质瘤中表达缺失率为21.4％(6/28),且表达量低于正常脑组织,但与患者年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度间的差异无显著意义(P>0.05)。按病理学分类,胶质母细胞瘤与少突胶质肿瘤的差异有显著意义(P=0.011)。脑胶质瘤中RASSF1A基因启动子发生甲基化的频率为39.3％(11/28),正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动了未发生甲基化。11份启动子区甲基化的胶质瘤标本中,5份同时伴mRNA表达缺失(P=0.022)。结论 RASSF1A基因启动了在胶质瘤中发生异常甲基化。尽管RASSF1A mRNA在脑胶质瘤中表达缺失并不广泛,但其表达普遍下调。推测启动子区CpG岛甲基化可能是导致RASSF1A基因在胶质瘤中表达缺失或表达水平下调的一种机制。     

微卫星不稳定性与胃癌预后的研究

目的探讨微卫星不稳定性(MSI)与胃癌预后的关系.方法采用聚合酶链-简单序列长度多态性(PCR-SSCP)的方法对胃癌MSI进行检测,明确MSI与临床病理参数(肿瘤大小、部位、分化、Lauren′s分型、分期)之间的关系.其次,应用图像细胞仪(ICM)对胃癌组织进行细胞核DNA含量测定,比较MSI阳性组与MSI阴性组之间DNA含量的差异.平均DNA含量及细胞增殖指数作为观察指标.结果51例胃癌MSI总阳性率为43.1%(22/51).中-高分化腺癌MSI检出率(65.2%)显著高于低分化腺癌(25.0%)(P＜0.01);肠型胃癌MSI阳性率(57.7%)高于弥漫型胃癌(25.0%)(P＜0.05).MSI阳性组平均DNA含量、细胞增殖指数均显著低于MSI阴性组(10.01616±0.96677 VS 16.33144±2.97253 & 0.39066±0.08901VS 0.73955±0.10433,P＜0.01).结论MSI阳性胃癌预后可能相对较好.     

肺心病并上消化道出血110例分析

上消化道出血是肺心病严重并发症之一,本文对去2年我院收治的249例肺心病,其中110例并上消化道出血,现简析如下。1 临床资料1.1一般资料110例中男55例、女65例、年龄38～78岁。有明确吸烟史者61例。1.2临床表现上腹痛、腹胀者42例,临终前无先兆、突然呕出咖啡样物者38例,黑便者23例、上消化道出血前血压逐渐下降者42例。并发肺脑者48例,肾功改变     

乙醇脱氢酶1C 基因多态性与中国北方汉族男性酒精依赖的关联

目的：分析中国北方汉族男性乙醇脱氢酶1C（ADH1C）基因多态性与酒精依赖的关联。方法选取60例符合DSM －Ⅳ诊断标准的中国北方汉族男性酒精依赖患者及60名与之匹配的健康志愿者,测定其ADH1C基因上rs698位点的多态性,对酒精依赖组及健康对照组间各基因型和等位基因频率分布的差异进行比较。结果酒精依赖组患者的基因型分别为AA型32例,AG型27例,GG型1例,健康对照组AA型27人,AG型30人,GG型3人,两组间基因型和等位基因频率分布的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论中国北方汉族男性ADH1C基因rs698位点多态性与酒精依赖无关联。     

肝癌组织碱性磷酸酶糖链结构的研究

目的 探讨肝癌组织碱性磷酸酶(ALP)N-糖链结构的改变及与肝癌侵袭性的关系。方法 用凝集素亲和层析法检测9例正常肝组织、16例肝癌组织和16例肝癌癌旁组织中ALP的多种凝集素结合率。凝集素包括L型红腰豆凝集素(L-PHA)、小扁豆凝集素(LCA)、蔓陀萝凝集素(DSA)、E型红腰豆凝集素(E-PHA)和黑接榾凝集素(SNA)等。结果 肝癌组织ALP的L-PHA、LCA、DSA、E-PHA和SNA结合率分别为22.94％±5.30%、55.97％±13.72％、38.16％±8.87％、11.56％±4.81％和69.80％±13.71％,均明显高于正常肝组织(5.89％±2.75％、36.20％±11.58％、17.90％±6.71％、5.38％±2.20％和57.32％±11.27%),t值分别为8.94、3.64、5.94、3.62和2.32,P值均<0.01;侵袭性肝癌组织ALP的L-PHA结合率(25.84％±4.67％)明显高于非侵袭性肝癌组织(18.10％±3.64％),t 3.71,P<0.01。结论 肝癌组织ALP的糖链结构发生改变,且ALP的L-PHA结合率与肝癌侵袭性有关。     

中国汉族人群B细胞表面调节蛋白基因1单核苷酸多态性与类风湿关节炎的相关性研究

目的 探究B细胞表面的调节蛋白基因(BANK1)单核苷酸多态性(SNPs)与类风湿关节炎(RA)的关系.方法 221例确诊RA组和310名健康对照组的外周全血提取DNA,采用非标记探针-高分辨率熔解曲线法分别检测rs10516487,rs17266594和rs3733197 SNPs位点,采用X2检验分析3个位点与RA的相关性.结果 RA患者rs17266594 TT基因型频率较健康对照显著升高(X2=6.241,P=0.044);rs10516487、rs17266594和rs3733197的等位基因频率(分别是G、T和G等位基因)较健康对照呈升高的趋势,但差异无统计学意义;rs10516487和rs17266594呈强连锁不平衡(D'=0.993,r2=0.985);3个SNPs的TGG单倍体型在RA患者频率较健康对照显著升高[P=0.037,OR=1.345,95％CI(1.018～1.776)].结论 BANK1 rs17266594与RA相关,3个SNPs TGG单倍体型可能是RA的易感因素.     

血液回收技术对婴幼儿心脏外科术后临床结果的影响

目的评价心脏矫治术期间使用血液回收(CS)技术处理回输术中出血及体外循环(CPB)管路余血对心脏外科患儿节约用血的意义和对临床结果的影响。方法根据术中是否使用CS,将100例在CPB下行先天性心脏病矫治术的患儿随机分为两组:洗血球组(CS组,n=50)和对照组(CON组,n=50)。记录两组患儿围术期红细胞比容(Hct),术后输入洗涤红细胞(RBCs)、血浆及血小板量,术后肝肾功能,术后24 h胸腔引流量,升压药使用时间和机械通气时间、ICU时间和住院时间,并进行统计学分析。结果两组患儿均痊愈出院。术后输入库血量及术后输血率CS组均明显低于CON组(P<0.05)。术后升压药使用时间CS组明显低于CON组(P<0.05)。两组患儿其余指标及术后恢复情况无明显差异(P>0.05)。结论对先天性心脏病婴幼儿手术期间使用CS处理术中出血和CPB管路余血可以明显减少术后输血量以及输血患儿的比率,达到节约用血的目的。     

儿童急性淋巴细胞白血病患者肝癌缺失基因1启动子的异常甲基化

目的 分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子的甲基化水平,探讨DLC-1启动子甲基化用于判断儿童ALL预后的临床价值.方法 选择34例ALL患者骨髓,5例正常骨髓和T淋巴细胞白血病细胞系6T-CEM,分别采用MSP和焦磷酸测序法检测DLC-1启动子甲基化,并采用荧光定量PCR检测5-aza-2'-deoxycytidine处理6T-CEM细胞前后DLC-1的表达.结果 经MSP检测,21例ALL患者骨髓中存在DLC-1甲基化,而在正常骨髓中未发现该基因甲基化.采用焦磷酸测序法检测的结果与MSP法完全一致,而焦磷酸测序法能对DLC-1启动子上的CG位点甲基化进行定量,DLC-1基因的甲基化与年龄、性别、WBC计数、FAB分类、免疫学分型、临床分型等临床病理学参数无显著相关性(P＞0.05).DLC-1基因甲基化阳性的18例获得完全缓解的ALL患者中有14例在12个月内复发,而甲基化阴性的12例获得完全缓解的ALL患者仅4例复发.采用5-aza-2'-deoxycytidine在体外处理DLC-1甲基化细胞6T-CET后,可使DLC-1恢复表达,且呈剂量依赖性.结论 从儿童ALL患者中检测到DLC-1启动子存在高频率的异常甲基化,DLC-1甲基化对预测儿童ALL复发具有一定意义.同时证明焦磷酸测序法是一种敏感、简单,并能对DLC-1启动子甲基化进行定量检测的新方法.