雌二醇和孕酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 研究雌二醇(E2)、孕酮(R4)对昆明小鼠卵母细胞体外成熟的影响.方法 小鼠经注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后48 h,摘取卵巢获得未成熟卵母细胞,分别在单独含不同浓度的E2或R4的成熟液中,或在同时含有不同浓度E2和P4的成熟液中,进行体外成熟,并对经过E2和P4处理成熟的卵母细胞进行体外受精.结果 经15～16 h的成熟培养,各E2处理组的卵母细胞第一极体排出率虽然均略高于对照组,但它们之间无显著差异;各组卵母细胞体外受精48 h后,1000 ng/mL E2处理组的卵裂率显著低于其他各处理组和对照组,但各组的囊胚率之间无显著差异.各P4处理组的极体率和卵裂率,与对照组相比无显著差异,但是各处理组的囊胚率均极显著低于与对照组;两种激素协同处理组中[1000 ng/mL E2 1000 ng/mL P4]组的极体率显著高于其他各处理组;而与对照组的极体率差异不显著.结论 P4对小鼠卵母细胞的后期发育能力有一定的抑制作用,而E2却对小鼠卵母细胞的成熟及其发育潜力无明显作用.     

冻融后小鼠休眠胚胎超微结构的研究

目的 观察小鼠休眠胚胎与正常孵化期胚胎在细胞连接和各细胞器形态与分布上的差异,以及冻融培养后的变化,从亚细胞超微结构的角度揭示其抗冻能力优于正常孵化胚胎的原因。方法 利用透射电子显微镜观察各类小鼠胚胎的超微结构,并进行相关比较分析。结果 通过亚细胞结构对比分析发现：冷冻前小鼠休眠胚胎为紧缩状,处于能量代谢较低的“基态”,通过冻融后培养,细胞器结构恢复与正常孵化胚胎冷冻前相似。异染色质减少,甚至消失;而正常孵化胚胎经过冻融后,线粒体数量减少,细胞核松散甚至碎裂,异染色质增多。结论 小鼠休眠胚胎与正常孵化胚胎冻融后相比,其细胞状态更有利于物质储存及能量代谢,表明小鼠休眠胚胎从亚细胞超微结构的角度比其正常孵化胚胎更具抗冻性。     

ICR胎鼠成纤维细胞培养方法的优化

目的确定胎鼠成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)最优制备方法,为MEF的制备节省时间与原材料。方法取胎鼠组织,采用组织块培养法、胰酶消化培养法、胰酶消后组织块培养法进行分离培养MEF,比较观察MEF纯度、生长速度、细胞形态等指标,筛选最节省时间与原料的一种培养方法。结果组织块培养法所得MEF生长速度慢,细胞体积小,杂细胞少,纯化所需传代次数少。胰酶消化培养法的MEF生长速度快,体积较大,杂细胞数量多,纯化所需传代次数较多。胰酶消化后组织块培养法的消化后组织块的成纤维细胞生长速度介于前两种方法之间,细胞体积和形态与组织块法培养结果相似,杂细胞数量较少,纯化所需传代次数少。结论胰酶消化结合组织块培养法能最大限度的利用材料,在短时间内可制备大量MEF,满足核移植试验与作为饲养层细胞的需求。因此,胰酶消化结合组织块培养法是MEF最优培养方法。     

大豆异黄酮对雌鼠初情期等生殖性状的影响

目的 通过研究大豆异黄酮对雌鼠初情期等生殖性状的影响,为母鼠的安全饲喂提供实验依据.方法 本实验选用210只21日龄ICR雌鼠随机分成3组,饲喂含不同浓度大豆异黄酮(0 mg/kg、50 mg/kg、400 mg/kg)的饲料.每日检查母鼠阴道开张和阴道栓情况.采集母鼠45和65日龄时血清,利用ELISA方法检测血清中雌激素含量,并统计45、65日龄体重和子宫重.利用免疫组织化学方法检测子宫上皮雌激素受体的表达分布情况.结果 雌鼠阴道开张的平均日龄分别为27.2 d、26.1 d和25.8 d,400 mg/kg组显著早于剂量为0mg/kg的对照组(P＜0.05);雌鼠平均初次配种时间各组间差异不显著(P＞0.05);饲养到45日龄和65日龄时400mg/kg组雌鼠体重显著高于对照组(P＜0.05).喂养8周后两个试验组在子宫间质细胞上雌激素受体的阳性细胞表达率显著高于对照组;在腺上皮中400 mg/kg组显著高于50 mg/kg组和对照组(0 mg/kg);但是在腔上皮中,各组间受体的阳性细胞表达率差异不显著(P＞0.05).结论 饲喂每公斤含400 mg大豆异黄酮的饲料可以刺激初情期前母鼠阴道的开张,提高雌鼠的体重,降低65日龄时血清雌激素含量,并在饲喂8周后影响子宫间质和腺上皮上雌激素受体的表达分布;而饲喂每公斤含50 mg大豆异黄酮的饲料仅对小鼠45日龄体重及饲喂8周后子宫间质上雌激素受体的表达分布有所影响.     

小鼠电激活孤雌胚胎早期体内外发育能力的比较

目的 探讨小鼠电激活孤雌胚胎的早期体内、外发育能力.方法 利用不同电脉冲参数和激活液对小鼠卵母细胞进行活化,观察激活后的小鼠孤雌胚体外发育状况和移植后的发育能力.结果 非电解质激活液优于电解质液,脉冲强度、脉冲宽度和脉冲次数3个参数各自处于某一范围内时,他们之间存在某种相关性,降低其中1个参数可通过升高另外2个参数得到补偿,经筛选较适宜的电脉冲参数为:1.0 kV/cm、40μs、2p,或者1.5kV/cm、30/μs、2p,分别为74.65％和71.19％,体外囊胚发育率分别为43.40％和47.62％.电激活孤雌胚体外发育时序比正常胚胎慢,但囊胚细胞数与对照组差异不显著.它们经胚胎移植后,其中的一部分能够着床,但着床率仅为3.6％,极显著低于对照组(67％,P＜0.01).结论 电刺激能够较好地模拟正常受精过程激活小鼠卵母细胞,但激活后的多数小鼠孤雌胚胎着床能力较低,不能够顺利着床.     

同期发情处理小鼠与自然发情小鼠子宫内膜中孕激素受体分布的比较

目的从孕激素受体（PR）的角度探讨同期发情处理与自然发情小鼠的子宫内膜上，孕激素受体分布是否受内源孕激素的特异诱导而变化，两者之间是否存在差异。方法27只同日龄母鼠，根据处理方式的不同随机分为三个组：自然发情假孕组（对照组）、同期发情处理假孕组和自然发情假孕第l天摘除卵巢组，3个组的小鼠在见栓后第4、6、8天分别取样后，采用免疫组织化学法观察小鼠子宫内膜中孕激素受体的分布情况。结果免疫组化结果显示，三个处理组小鼠子宫内膜的三种细胞中都有PR存在；见栓第4天时，同期发情处理组小鼠子宫腺上皮细胞和基质细胞的PR胞核阳性率显著高于自然发情组（P〈0．05）；见栓第6天时，同期发情处理组小鼠子宫内膜三种细胞中的PR胞核阳性率显著高于自然发情组（P〈0．05）；同时自然发情假孕第1天摘除卵巢组在见栓第6和8天时的阳性率均显著低于其它两组（P〈0．05）。结论同期发情处理的小鼠子宫内膜中孕激素受体分布显著高于自然发情小鼠，且两者都受其内源性孕激素的特异诱导而变化。     

利用超数排卵方法高效获取小鼠休眠胚胎

目的为提高小鼠休眠胚胎的制备效率,尝试用超数排卵方法获取小鼠休眠胚胎。方法超排小鼠在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后,按照是否注射抗孕马血清(anti-PMSG serum或A-PMSG)以及注射的不同时间分为5组:在母鼠合笼前注射A-PMSG、在母鼠见栓后注射A-PMSG、在见栓第四天卵巢摘除手术后注射A-PMSG、不注射A-PMSG的超排组和不超排组。结果见栓后注射抗PMSG组的平均出胚数(9.4枚/只)最高,显著高于其他实验组。结论常规超排处理结合注射抗PMSG血清法能有效提高小鼠休眠胚胎的回收率。     

ADAM19 在小鼠睾丸发育中的时空表达

目的 阐明含有去整合素和金属蛋白酶结构域的跨膜蛋白19(ADAM19)在小鼠睾丸发育中的作用.方法 采用半定量RT-PCR和免疫组化两种实验方法,分别检测ADAM19 mRNA和蛋白质在小鼠睾丸发育中的时空表达.结果 ①最早在胚胎发育的15.5 d才能检测到ADAM19 mRNA的表达,后其表达随着胚胎发育天数的增加而逐渐升高,到围产期表达水平达到最高.出生后,ADAM19 mRNA的表达呈现显著下降的趋势,到成体睾丸中就几乎检测不到ADAM19的表达.②和其mRNA表达变化趋势一样,ADAM19蛋白也是首次在胚胎发育的15.5 d被检测到,一直持续存在到出生后一周,一周后则几乎检测不到;阳性表达信号主要定位在睾丸的曲细精管(睾索)中.结论 ADAM19 在小鼠睾丸中的表达具有显著的发育依赖性.     

PGE2、PGF2α和Iloprost对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响

目的 从甲状腺功能及性腺功能变化的角度研究腺嘌呤诱发慢性肾衰的内分泌紊乱的机理.方法 运用腺嘌呤灌服复制大鼠慢性肾衰模型,以正常大鼠作为对照,应用放射免疫法检测大鼠性腺激素、甲状腺激素的含量及光镜观察睾丸的结构变化.结果 模型组大鼠血清甲状腺激素含量均低于正常对照组.模型大鼠的性激素含量与正常对照组有明显差异.病理结果 显示与上述结果 相一致.结论 性激素分泌量的变化和甲状腺分泌功能的降低是慢性肾衰并发内分泌功能障碍的重要原因之一.     

雌?孕激素对牛子宫内膜上皮细胞αvβ3 体外诱导差异表达的影响

目的 研究体外培养的牛子宫上皮细胞内整合素αvβ3 基因诱导差异表达的变化,以期为探究牛子宫容受态的标志蛋白提供参考?方法 运用RT-PCR 方法分析不同浓度雌激素?孕激素以及雌?孕激素协同作用对牛子宫内膜上皮细胞中整合素αvβ3 的诱导表达变化情况?结果< /b> 单独添加孕激素10^-7 mg/ mL 时,整合素αvβ3表达量均最高,10 ^-7 mg/ mL 组内αv 和β3 的表达量均显著高于对照组( P < 0.05)?单独添加雌激素10 ^-10 mg/ mL组,αv 的表达量最高,而β3 的表达量最低?协同添加雌?孕激素组中,整合素αvβ3 的表达量均高于对照组,其中αv 的表达量显著高于对照组( P <0.05);β3 的表达量与对照组相比差异不显著( P >0.05)?结论 单独添加孕激素和协同使用雌?孕激素时,均可以促进牛子宫内膜上皮细胞中整合素αvβ3 的mRNA 表达量上升;单独添加雌激素的作用则与之相反?由此,整合素αvβ3 在“种植窗”期的牛子宫内膜上皮中可作为一个潜在的子宫容受态参考标志基因?