我国利什曼原虫RAPD分析

目的　我国不同疫区利什曼原虫分离株的RAPD分析。　方法　用 7种随机引物 ,扩增来自我国 3个疫区 (得自利什曼病患者、病犬及白蛉 )的利什曼原虫分离株和国际标准株 ,并将扩增产物进行聚类分析。　结果　①来自我国山丘疫区及平原疫区的L d .分离株分别聚为两类 ,两者遗传距离较远 ;②来自新疆荒漠疫区、近荒漠疫区及平原地区的L d .XJ771、L d .XJ90 1和L d .XJ80 1聚在一类 ,表明它们的遗传距离较近 ;③山丘疫区虫株中来自病人和病犬的分离株区别不明显 ,两者同源性高 ,表明犬在传播中起着重要作用 ;④印度平原型标准株L d .DD8与我国平原疫区虫株聚在一类 ;⑤L infantum与我国山丘疫区的L d .分离株分属于两类 ;⑥L dJed与平原疫区L d .分离株亲缘关系较近 ;⑦L infantum与L tropica最早聚合 ,遗传距离最近。　结论　我国不同疫区利什曼原虫分离株在基因水平上存有差异。     

夏氏疟原虫感染的红细胞膜表面抗原Pc90的cDNA特征 I．cDNA文库的构建及阳性克隆的筛选

目的：构建夏氏疟原虫早期滋养体的ｃＤＮＡ文库，并从中筛选出表达Ｐｃ９０的阳性克隆。方法：采用ＧＴＣ／ＣｓＣｌ法提取ＲＮＡ，ｃＤＮＡ克隆入λ－ＺＡＰ噬菌体，用抗Ｐｃ－ＨＣＰＭ血清３次筛选并经抗Ｐｃ９０单克隆抗体复筛，阳性克隆经体内剪接后行限制性内切酶酶切分析。结果：该ｃＤＮＡ文库有１．９×１０６个重组体。用抗Ｐｃ９０－ＨＣＰＭ的多克隆抗体筛选后，得到１６个阳性克隆，其长度分别为：０．６ｋｂｐ，１．４ｋｂｐ，１．６ｋｂｐ，２．２ｋｂｐ以及２．５ｋｂｐ。其中仅２．２ｋｂｐ和２．５ｋｂｐ克隆与抗Ｐｃ９０单克隆抗体反应呈阳性。限制性内切酶酶切分析表明，２．２ｋｂｐ，２．５ｋｂｐ和１．６ｋｂｐ的克隆具有不同的特征。结论：２．２ｋｂｐ和２．５ｋｂｐ的克隆极有可能表达Ｐｃ９０蛋白。     

心房颤动患者左心房肌电重构和基因表达11例初探

心房颤动(房颤)是临床上最常见的快速心律失常。有关风湿性心脏瓣膜病患出现房颤时Na^ ／Ca^2 交换体的基因表达分析及电重构与心房形态研究报道较少，故本研究采用Na^ ／Ca^2 交换体基因表达探讨左心房肌电重构与房颤的关系。     

内毒素对体外培养的肝细胞凋亡相关基因表达的影响

内毒素（ｌｉｐｏｐｐｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）在体外可以诱导肝细胞发生凋亡［１］。细胞凋亡的发生发展与许多凋亡相关基因表达的改变有密切的关系。１．材料与方法：采用Ｓｅｇｌｅｎ将雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠的肝细胞分离后培养２４ｈ。在培养基中直接加入ＬＰＳ１０ｍｇ／Ｌ，分别在３ｈ、６ｈ、１２ｈ、和２４ｈ收集肝细胞，同时设正常对照组。用Ｍｏｏｒｅ等［２］的方法提取培养细胞的ＤＮＡ片段。一步法提取ＲＮＡ。半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测在不同时间点基因ＰＣＲ产物的含量。２．结果：肝细胞的凋亡随着ＬＰＳ作用时间…     

GX-50抗皮肤衰老的研究

目的 研究GX-50抗皮肤衰老的作用。方法 通过在20月高龄小鼠背部涂抹GX-50,采用HE染色和免疫组织化学法对GX-50抗皮肤衰老的作用进行组织学观察。原代培养人皮肤成纤维细胞,采用H₂O₂诱导建立皮肤细胞衰老模型,分为空白对照组、DMSO组、GX-50组、H₂O₂组和GX-50预处理后H₂O₂处理组（GX-50+H₂O₂组）;采用β-半乳糖苷酶染色实验以及测定细胞分泌物丙二醛（MDA）和细胞内活性氧（ROS）含量检测GX-50在细胞水平的抗衰老能力。应用Draize兔眼刺激性实验评价GX-50的刺激性。结果 在组织学水平,GX-50可使高龄小鼠衰老的皮肤年轻化,增加胶原蛋白的表达。在细胞水平,GX-50可使人皮肤成纤维细胞β-半乳糖苷酶合成降低;GX-50组细胞MDA分泌量较空白对照组下降30.45%,GX-50+H₂O₂组较H2O2组下降61.46%,组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）;GX-50组细胞胞内ROS荧光值较空白对照组下降8.03%,GX-50+H₂O₂组较H2O2组下降8.36%,组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。Draize兔眼刺激性评分为0。结论 GX-50可以在一定程度上保护和延缓皮肤衰老,具有作为护肤品有效添加剂的应用前景。     

雄性激素对鼠巨噬细胞杜氏利什曼原虫感染的影响

目的 :研究雄性激素对鼠巨噬细胞株 (ana 1)细胞杜氏利什曼原虫感染率及感染水平的影响。方法 :体外培养巨噬细胞 ,实验组用雄激素 (0 4μmol L)处理 2 4h ,按巨噬细胞和前鞭毛体 1∶10的比例感染杜氏利什曼原虫。Giemsa染色法观察不同时限 (感染初期 ,3h ,6h ,12h ,2 4h ,36h ,48h)的感染率及感染水平。结果 :雄性激素处理的巨噬细胞对杜氏利什曼原虫感染率及感染水平明显高于未加雄性激素的对照组 ,并且随着时间的延长这种差别愈趋明显 (感染后 12h ,2 4h ,P <0 0 5 ;36h ,48h ,P <0 0 1)。结论 :雄性激素增强杜氏利什曼原虫对巨噬细胞株细胞感染率及感染水平。     

用RAPD技术对利什曼原虫kDNA、nDNA的分析

目的用RAPD技术分析利什曼原虫的kDNA及nDNA.方法用7种随机引物扩增L.infantum和L.donovani GS2的kDNA和nDNA,分析扩增结果并计算两虫种间kDNA和nDNA共享度F值.结果7种随机引物对两虫种的kDNA、nDNA均扩增出各自特有带型.L.infantum和L.donovani GS2两虫种间kDNA、nDNA扩增片段的F值分别为0.227和0.2.结论kDNA和nDNA均可作为利什曼原虫的RAPD扩增模板,这7种引物均可用于对L.infantum和L.donovani GS2进行RAPD分析.该两虫种kDNA、nDNA的共享度较低,说明二者遗传距离较远.在进行RAPD分析时,提取全DNA(包括kDNA和nDNA)进行扩增即可.     

大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因的体外扩增及克隆

目的：构建大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因重组质粒。方法：从雌性SD大鼠脑组织中提取总RNA，根据OSCP基因已知序列，设计合成1对引物，用PCR方法扩增编码OSCP的基因片段，插入pGEM-T easy质粒，转化大肠杆菌JMl09感受态细胞，经酶切鉴定，而后进行测序。结果：OSCP基因体外扩增产物大小为700bp，重组质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子，测序结果与已知序列基本吻合。结论：在国内初次克隆了大鼠OSCP基因，为下一步OSCP的表达及功能研究奠定了基础。     

正常生育男性成熟精子mRNA的种类和特征

目的:剖析具有正常生育能力男性成熟精子mRNA的种类和丰度。方法:健康并育有后代的成年男性10例,禁欲1周后取精液,上游法优化精子,Trizol试剂提取精子总RNA。混合所有总RNA进行基因表达系列分析(SAGE)。结果:所建SAGE文库共获877个克隆,测序得到21 052个标签,出现两次以上的独特性标签有2 712种。经与SAGEm ap数据库比对,19.7%的独特性标签没有基因匹配,代表新基因;其余能匹配的基因中,67%具有蛋白质结合或核酸结合能力,41%具有催化活性,13%与信号转导有关,与细胞运输、精子结构、转录调节相关者分别达到10%左右。结论:人成熟精子中存在数量庞大、种类繁多的mRNA。