Max作用蛋白1-0缺失突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

目的：：构建Max作用蛋白1-0(Max interacting protein1-0,Mxi1-0)缺失突变体的真核表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况,为研究Mxi1-0细胞内定位与其功能的关系奠定基础。方法：以野生型Mxi1-0真核表达质粒为模板,聚合酶链式反应扩增出5种类型Mxi1-0缺失突变体的基因片段,克隆至增强绿色荧光蛋白真核表达载体,经酶切和测序鉴定后,利用脂质体将重组质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)。 Western blot检测融合蛋白的表达,荧光显微镜下观察融合蛋白细胞内定位情况。结果：各种Mxi1-0缺失突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3中得到表达。免疫荧光结果表明,脯氨酸富集结构域( PRD)突变体在细胞质和细胞核中均有分布,与Sin3结合域高度同源结构域( tSID)突变体主要分布于细胞质,在细胞核中有少量分布；PRD-tSID突变体及△PRD突变体分布于细胞质,而△PRD-tSID突变体主要分布于细胞核。结论：成功构建了5种人Mxi1-0缺失突变体的真核表达载体,并初步观察这些突变体在细胞内的定位情况,为探寻Mxi1-0在细胞内定位机制及功能奠定了基础。  

人骨髓间充质干细胞的体外连续传代及鉴定

[目的]将成人骨髓间充质干细胞（hMscs）进行体外连续传代并对其进行干细胞特性的鉴定。[方法]采用不连续密度梯度离心法进行人骨髓间充质干细胞的分离，使用含10％胎牛血清的L-DMEM进行体外培养，经胰蛋白酶和EDTA联合消化法体外连续传代至P5代后，对其进行生长曲线的测定、细胞周期和表面分子标志物的检测以及多向分化潜能的观察。[结果]本实验可将hMSCs体外连续传至P5代，P5代hMSCs在保持良好的分裂增殖能力的同时，表达hMSCs的表面分子标志物及保持多向分化潜能。[结论]本实验成功地将人hMSCs进行体外连续传代并保持其干细胞的特性。  

中枢神经系统白血病诊治现状

中枢神经系统是急性白血病发生直接浸润或复发的常见部位,因多种化疗药物不易透过血脑屏障,所以它成为白血病重要预后因素。适时准确的对其评估和治疗则意义重大。近年来,尽管预防性治疗使中枢神经系统白血病(central nervous system leukemia,CNSL)发病率明显下降,但仍有5%~10%的患者发生中枢神经系统浸润,而成为白血病髓外复发的主要原因,是影响急性白血病患者预后的重要因素[1-3]。  

过表达Mxi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：构建含有Max结合蛋白1（Mxi1）基因的重组慢病毒载体，并探讨过表达Mxi1基因对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：利用DNA重组技术将Mxi1基因克隆至慢病毒载体，经酶切和测序鉴定后，将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T 细胞，获得含 Mxi1基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染人胃癌SGC-7901细胞，荧光显微镜下观察感染效率，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Mxi1、cyclinB1和caspase-8的基因表达，免疫印迹法（Western blot）检测Mxi1蛋白的表达。CCK-8比色法和流式细胞术分别检测Mxi1 基因对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。结果：成功构建含 Mxi1基因的慢病毒表达载体，RT-PCR和Western blot检测到Mxi1 基因和蛋白的表达。RT-PCR结果显示，过表达Mxi1 的SGC-7901细胞与空白对照细胞及过表达空病毒对照细胞相比，细胞内cyclinB1的mRNA表达水平明显降低，而caspase-8的 mRNA表达水平显著升高。CCK-8实验和流式细胞术检测结果显示，过表达Mxi1的SGC-7901细胞与空白对照细胞及过表达空病毒对照细胞相比，细胞增殖活性明显降低，细胞凋亡率显著升高。结论：成功构建Mxi1慢病毒载体且有效转染SGC-7901细胞，过表达Mxi1 可以抑制胃癌细胞增殖并促进其凋亡。  

Max二聚化蛋白1（Mad1）真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：构建Max二聚化蛋白1 (Max dimerization protein 1,Mad1) 的真核表达载体，研究Mad1对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法：利用DNA重组技术将Mad1基因克隆至pEGFP-N1载体,构建成pEGFP-N1-Mad1重组真核表达载体。经酶切和测序鉴定后，采用脂质体转染技术将重组质粒瞬时转染人胃癌AGS细胞， RT-PCR及Western blot检测Mad1基因和蛋白的表达。荧光显微镜观察Mad1在AGS细胞内的定位情况。CCK-8和Transwell实验研究Mad1对胃癌AGS细胞增殖和迁移能力的影响。结果：成功构建携带Mad1基因的真核表达载体pEGFP-N1-Mad1。将重组质粒瞬时转染AGS细胞后，RT-PCR和Western blot检测到Mad1 基因和蛋白的表达。Mad1基因表达产物定位于AGS细胞核中。CCK-8和Transwell实验结果显示，转染Mad1的AGS细胞与转染空载体的AGS细胞、及正常AGS细胞相比，细胞增殖活力和迁移能力明显降低。 结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Mad1,研究表明Mad1可以抑制胃癌AGS细胞的增殖和迁移。  

恶性脑胶质瘤术后螺旋断层放射治疗联合替莫唑胺的疗效评价

目的：探究和分析恶性脑胶质瘤术后螺旋断层放射治疗联合替莫唑胺的治疗效果。方法：研究对象为60例恶性脑胶质瘤术后的患者，将患者随机分为对照组和治疗组，每组30例患者，对照组为单纯放疗组，治疗组为放疗联合替莫唑胺组。通过实验后对两组患者的总治疗有效率进行分析比较。结果：对照组30例患者的总治疗有效率为60.0％，相比较治疗组患者的总治疗有效率为90.0％，差异较为的明显，具有一定的统计学意义（P ＜0.05）。对于生存率的比较结果而言，治疗组的最近1、2年生存率为80.0％和50.0％，要明显的优于对照组患者，差异较为的明显（P ＜0.05）。结论：对于恶性脑胶质瘤术后的患者采用放疗联合替莫唑胺的联合治疗手段不仅能够有效的提高有效率，同时能够有效的提高患者的生存率，有较大的临床价值，建议临床上进行广泛的使用。