甲型H1N1流感病毒基因组序列分析及其特性研究

Objective To analyse the genome of influenza A (H1N1) vires so as to elucidate its molecular characteristics and evolution status. Methods DNA sequences of the influenza viruses were collected from NCBI, and compared with the genomes of referenced intluenza viruses. The phylogenetic trees were constructed by the neighbor-joining method, and the pathogenicity, drug susceptibility and vaccine protection were analyzed. Results Phyiogenetic analysis showed that the genes encoding HA, PB2, PBI, PA, NP, and NS protein were most closely related to those influenza A viruses circulating in swine populations in North America. NA and M gene belonged to Eurasia lineages swine influenza vires. The amino acid sequence of the cleavage site between HA1 and HA2 was PARSSR ↓ GLFGAI with the typical characteristics of the low pathogenic influenza virus. Influenza A(H1N1) virus can spread from person-to-person. It is sensitive to oseltamivir and zanamivir but resistant to amantadine and remantadine. The current human seasonal influenzavaccines confered little protection against influenza A/H1N1 because of the great diversity on antigenic domains between A/H1N1 virus and vaccine virus. Conclusions Influenza A(H1N1) virus is a reassortant virus of North America and Eurasia hneages swine influenza virus. It is important to develop a vaccine against the currently circulating virus strain to control the disease spread.     

不同表面处理方法在纳米混合树脂复合材料修复中的应用

目的： 分析不同表面处理方法和粘接剂自酸蚀功能单体对树脂-复合材料界面即时修复粘结强度和完整性的影响。方法： 采用纳米树脂复合材料制作98个树脂复合材料,随机分为A1、A2、B1、B2、C、D组,各14个试件。表面未处理的试件作为阳性对照组（14个试件）。A1组用Gluma 通用粘接剂系统抛光,A2组用Gluma 通用粘接剂系统抛光、喷砂,B1组用Tokuyama Bond ForceⅡ^TM粘结系统抛光,B2组用Tokuyama Bond ForceⅡ^TM抛光、喷砂,C组仅经抛光样品组。D组仅做喷砂。采用与底物相同的树脂复合材料,对修复后试件进行剪切粘结强度（shear bond strength,SBS）测试,所有样本均进行电子显微镜扫描、测定表面轮廓,进行失效分析。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学处理。结果： D组修复粘结强度显著高于阴性对照组（P<0.05）,A1、A2、B2、B1组粘结强度显著高于C、D组（P<0.05）;B1、D或A1组相比,粘结强度无显著差异（P>0.05）;B2组、阳性对照组粘结强度无显著差异（P>0.05）。除喷砂、TBFⅡ外,阳性对照组粘合强度值显著高于A1、C组（P<0.05）。抛光后表面粘合失效率高于喷砂样本（P<0.05）;抛光、Gluma处理样品粘合失败率高于抛光、TBFⅡ处理样品（P<0.05）;喷砂、TBFⅡ处理的表面内聚破坏率高于抛光、TBFⅡ处理（P<0.05）。抛光技术的表面粗糙度与喷砂技术相比,较规则且粗糙度较低（P<0.05）。结论： 经喷砂处理的复合材料基材加TBFⅡ,其修复粘结性最强,且表面内聚破坏率较高,TBFⅡ处理粘合失败率低。但经喷砂处理后的材料易堆积食物残渣,而抛光后的材料则不易发生。使用喷砂处理的复合材料基材上加TBFⅡ的患者,需正确有效地维护口腔卫生。     

戊型肝炎病毒嵌合蛋白的免疫应答的初步研究

目的：对含有HEV主要抗原表位的嵌合蛋白进行表达与纯化，并对其免疫原性进行研究。方法：将含有一段HEV ORF2基因片段（394-660aa）和HEVORF3全基因的表达质粒pHEV23在大肠杆菌中进行异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，其表达产物经Ni^2＋-NTA树脂亲和纯化，透析复性。纯化蛋白免疫小鼠，用ELISA检测小鼠血清IgG抗体，T细胞增殖反应检测细胞免疫应答。以Western-blot检测纯化蛋白对患者阳性血清的免疫反应性。结果：纯化蛋白的分子量为55KDa，纯度达90％以上；实验组特异性抗体水平明显高于对照组；T细胞增殖反应实验组与对照组比较有极显著性差异。纯化蛋白能与患者阳性血清呈特异反应。结论：嵌合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，为进一步研究开发HEV诊断试剂盒及基因工程疫苗提供了基础。     

HSV-2DNA疫苗诱导小鼠免疫应答研究

目的 探讨含有单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D全基因序列的重组质粒作为DNA疫苗的可能性。方法 采用PCR方法获得HSV-2gD片段，构建含HSV-gD片段的重组质粒pcDNA3-gD。重组质粒作为DNA疫苗免疫小鼠，观察其对小鼠免疫效果及保护作用。结果 重组质粒pcCDNA3-gD免疫小鼠后可产生特异性抗体，可保护小鼠免受HSV-2的致死性攻击，存活率达75％。结论 重组质粒pcDNA3-gD可诱导小鼠产生特异性免疫反应，可以作为HSV的候选DNA疫苗。     

甲型H1N1流感病毒基因组序列分析及其特性研究

目的 分析甲型H1N1流感病毒的基因组序列特征,阐明该毒株的遗传变异及分子特性.方法 GenBank中获取流感病毒全序列,对各段基因与已知序列进行分析比较,绘制进化树,并分析和预测甲型毒株的致病性、药物敏感性和现有疫苗的预防保护作用.结果 甲型H1N1病毒的HA、PB2、PB1、PA、NP、NS基因与美国本土的猪流感病毒序列具有高度同源性,NA和M基因具有典型的欧亚株系猪流感病毒特征.该病毒具有人传人的分子基础,HA上HA1和HA2裂解位点序列为PSIQSR↓+GLFGAI,尚不具备高致病性流感病毒的特征.病毒对金刚烷胺类药物耐药,而对达菲和扎那米韦敏感.HA片段5个抗原决定区氨基酸序列与人用流感疫苗具有较大差异,推测现有疫苗对预防本次疫情基本无效.结论 甲型H1N1是一种北美和欧亚两种猪流感病毒的混合体,开发针对本病毒的流感疫苗有助于进一步控制疫情蔓延.     

抗戊型肝炎病毒结构蛋白多克隆抗体的制备

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）引起的病毒性肝炎,该疾病主要经肠道传播,广泛流行于亚、非及美洲一些国家,发病例呈全球性分布,是发展中国家较常见的传染病,我国为高发区,人群感染率达17．2％,且呈上升趋势。近年的研究发现,     

含pcHEV乃壳聚糖纳米粒的制备及对小鼠免疫作用的影响

目的将壳聚糖包载含戊型肝炎主要抗原表位基因片段的重组质粒pcHEV23,制备成CS-pcHEV23纳米粒,并对其在小鼠体内的免疫增强效果进行初步研究。方法采用复凝聚法制备CS-pcHEV23纳米粒;检测纳米粒的粒径、包封率及抵抗核酸酶能力;分析壳聚糖与pcHEV23的聚合情况;免疫小鼠,ELISA法检测血清中HEVIgC抗体水平,流式细胞仪检测外周血CD4^＋．CD8^＋T淋巴细胞亚群百分比含量和CD4^＋/CD8＋。结果制备CS-pcHEV霉纳米粒粒径在170-470nm范围内;包封率〉95％;pcHEV。通过静电作用几乎完全被包裹在壳聚糖内;纳米粒能抵抗DNaseI酶降解有效保护pcHEV23。免疫实验表明CS--pcHEV23纳米粒可上词小鼠血清HEVIgG抗体水平,并显著提高外周血CD4^＋T淋巴细胞百分含量和CD4^＋／CD8^＋值。结论壳聚糖能高效装载外源基因pcHEV23,保护其免受核酸酶的降解,有效提高小鼠细胞免疫水平,具有良好的免疫增强作用,作为基因载体具有较大的应用潜力。     

携带肠道病毒71型中和线性表位重组流感病毒的构建

目的 获得能够携带肠道病毒71型(EV71)中和线性表位的重组流感病毒.方法 通过PCR方法,在流感病毒HA基因中插入EV71中和线性表位序列,获得重组质粒;进行反向遗传学操作,构建重组流感病毒.结果 获得了2个重组质粒pPolⅠ/Ⅱ/WSN-HA-SP55和pPolⅠ/Ⅱ/WSN- HA-SP70,并构建了能够分别携带EV71中和线性表位SP55和SP70的2株重组流感病毒,重组病毒3次传代血凝效价都保持在27和25HAU,具有较好的稳定性.结论 通过反向遗传学操作,构建出携带EV71中和线性表位的重组流感病毒,为研制预防手足口病重组流感病毒载体疫苗奠定基础.     

流感病毒介导的抗肿瘤研究进展

随着反向遗传技术的不断完善,流感病毒的改造和利用成为可能.流感病毒具有强传染性,将其改造成携带外源基因的流感病毒载体,有利于转染到目的细胞,特别是肿瘤细胞,为肿瘤基因治疗提供新的手段.同时,由于流感病毒对肿瘤细胞具有凋亡作用,有望将其开发成为肿瘤疫苗及具有基因递送作用的病毒载体用于肿瘤基因治疗.本文就流感病毒的溶瘤作用,流感病毒载体的抗肿瘤及其肿瘤靶向性这几方面的研究做一综述.