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1.
大鼠血红素加氧酶-1基因在乳酸乳球菌中的表达   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的:在乳酸乳球菌中表达大鼠血红素加氧酶-1(HO-1)基因。方法:采用RT-PCR技术从大鼠脾总RNA中分离扩增血红素加氧酶HO-1基因,将该基因克隆进pGEM-Teasy质粒中,转化大肠杆菌DH5α提取质粒,鉴定HO-1基因。酶切后与pSEC质粒连接,经电击转化,将重组质粒转入乳酸乳球菌NZ9000中,转化子在含有氯霉素的脑心浸液培养基上培养。用nisin诱导HO-1表达,SDS-PAGE、Westernblot鉴定表达产物,并采用分光光度法测定HO-1活性。结果:表达产物相对分子量约为32kU,表达量约为7.0mg/L,HO-1活性为2.386U/(mg·h)。结论:乳酸乳球菌能够表达具有生物活性的大鼠HO-1。  相似文献
2.
目的 分析我国部分地区家族性高胆固醇血症(FH)患者载脂蛋白E(ApoE)基因型分布情况及其对FH血脂变化水平的可能影响。方法 采用PCR—RFLP法检测载脂蛋白E基因型,比较其与普通高胆固醇血症患者的基因型分布情况。提取外周血基因组DNA,PCR扩增包含2个等位基因决定位点的DNA片段,PCR扩增产物经Hha Ⅰ酶切后进行聚丙烯酰胺电泳,银染后分析ApoE基因型。检测FH患者血脂变化。结果 FH患者和普通高胆固醇血症患者ApoE表型频率:E3/2分别为3.3%、11.0%,E3/3为56.7%、63.0%,E4/2为10.0%、15.1%,E4/3为30%、9.6%;ApoE等位基因频率:ε2分别为6.7%、14.4%,ε3为73.3%、73.3%,ε4为20.0%、12.4%。ApoE基因型对FH患者血脂变化的影响不显著。结论 在所调查的FH患者中,ApoE ε4等位基因有增高的趋势,但对血脂变化影响不明显。  相似文献
3.
一个新的低密度脂蛋白受体基因突变位点   总被引:1,自引:0,他引:1  
本研究对 1例临床诊断为家族性高胆固醇血症 (FH)的患者进行了研究。为了明确诊断 ,我们应用了聚合酶链反应 单链构象多态性分析法 (PCR SSCP)结合DNA序列测定从基因水平对患者LDL R基因和载脂蛋白B基因突变位点进行了检测。现报道如下。一、对象与方法1 研究对象 :先证者 ,女 ,33岁 ,汉族。原籍北京。自出生时便发现臀部有一绿豆大小皮下结节 ,增长缓慢。以后身体其他部位渐长出多个皮下结节 ,累及手、腕、肘、膝、跟腱等处皮肤 ,呈对称性分布。检查发现血胆固醇偏高 ,遂长期服用他汀类药物降血脂治疗 ,症状得到初步控制…  相似文献
4.
目的观察重组血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)乳酸乳球菌灌胃后大鼠肠道中重组HO-1蛋白的含量。方法制备HO-1乳酸乳球菌悬液和乳酸乳球菌悬液,不同剂量和不同次数灌胃SD大鼠,在规定时间取回肠组织,酶联免疫吸附法和免疫组化法分析回肠组织HO-1的含量和分布情况。结果重组HO-1蛋白吸收后进入肠上皮细胞的胞膜和胞质中。回肠组织中HO-1含量:5倍、10倍HO-1乳酸乳球菌灌胃比20倍HO-1乳酸乳球菌灌胃高(P〈0.01),连续灌胃4天、7天比连续灌胃10天含量高(P〈0.01)。结论乳酸乳球菌中重组HO-1蛋白可以被回肠吸收,但在一定程度后增加HO-1乳酸乳球菌灌胃剂量和次数不能有效增加回肠中重组HO-1蛋白的含量。  相似文献
5.
目的 探讨诊断肾脏早期损伤的方法。方法 采用琼脂免疫扩散法检测尿C3 、α2 -巨球蛋白 ;硝基酚比色法测定尿N -乙酰 - β-D -氨基葡萄糖苷酶 (NAG)。结果 正常对照组尿C3 阴性、α2 -巨球蛋白阴性 ,NAG为(4 .75± 2 .73)U/gCr;尿C3 、α2 -巨球蛋白均为阴性的糖尿病、肾炎、高血压患者尿NAG较正常对照组显著增高 (P<0 .0 1) ;尿C3 阳性、α2 -巨球蛋白阴性的患者尿NAG较正常对照组显著增高 (P <0 .0 1) ;尿C3 阳性、α2 -巨球蛋白阳性的患者尿NAG较正常对照组显著增高 (P <0 .0 1)。提示测定尿NAG对诊断患者肾脏早期损伤有重要意义。结论 尿NAG是诊断肾脏早期损伤较灵敏、可靠的实验室指标  相似文献
6.
目的:分析家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体(LDLR)功能变化,寻找基因突变位点;阐明该基因突变类型对LDLR功能的影响。方法:患儿及其父系、母系三代共30人检查血脂和临床表现,作系谱分析,确定该患儿符合家族性高胆固醇血症纯合子的诊断;培养患儿皮肤成纤维细胞,用受体的放射性配体结合技术.定量测定细胞的LDLR的功能;提取外周血基因组DNA对LDLR基因的相应外显子进行PCR-SSCP及DNA序列分析。结果:系谱分析发现11个杂合子及1个纯合子;纯合子患儿LDLR结合功能基本正常,但其内移和降解功能只有正常人的3.6%及1.7%;DNA测序结果证实患儿第17外显子的第599和600密码子间插入一个碱基G,导致框移突变;第842密码子发生CCA→CCG的无义突变。结论:首次报道了一个新的LDLR突变位点;初步明确该突变位点对患者的影响较为显著。  相似文献
7.
目的克隆人乳铁蛋白基因并进行基因序列分析.方法从人乳腺组织中提取出的总RNA进行逆转录,生成cDNA,以其为模板进行PCR扩增人乳铁蛋白cDNA.PCR产物纯化后连接到pGEM-T easy载体上并转化到DH5α菌中,然后对其进行DNA序列测定.结果本实验获得的基因序列与发表在GeneBank的hLF序列比较其同源性达99%,长度相符,为2149bp.与其他地区或国家相比较,有4~9个碱基有所不同.结论乳铁蛋白存在着基因序列多态性.  相似文献
8.
目的 在乳酸乳球菌中表达小鼠白细胞介素-12基因.方法 用Nsi Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切pGEM-IL-12质粒后,与经同样酶切的含有乳链杆菌肽A(nisA)启动子的pSEC-E7质粒连接,从而构建成pSEC-IL-12质粒;经电击转化,将重组质粒转入乳酸乳球菌NZ9000中,转化子在含有氯霉素的脑心浸液培养基上培养.用乳链杆菌肽(nisin)诱导白细胞介素-12表达,SDS-PAGE、Western blot鉴定表达产物;用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-12的量.结果 建立了白细胞介素-12乳酸菌基因表达系统.在nisin的诱导下,NZ9000能够产生并分泌白细胞介素-12约80 ng/L.结论 乳酸乳球菌能够表达一定数量的小鼠白细胞介素-12.  相似文献
9.
目的:探究乳化异氟烷后处理对离体大鼠肺缺血再灌注损伤的影响?方法:雄性SD大鼠随机分成4组(n=6):空白对照组(S组)?缺血再灌注组(IR组)?乳化异氟烷组(EI组)?脂肪乳组(IL组),建立离体大鼠肺缺血再灌注损伤模型?分别于平衡末(T0)?缺血缺氧前即刻(T1)?再灌注30 min(T2)和再灌注60 min(T3)时,记录潮气量(tidal volume,VT)?肺静脉氧分压(oxygen partial,PaO2)?肺顺应性(compliance,CL)和气道阻力(airway resistance,R)的数值;测定肺湿/干重比(W/D)并观察肺组织HE染色情况;检测肺组织中SOD和MDA的表达水平?结果:与T0时刻比较,4组生理数据在T3时刻VT?CL和PaO2下降而R上升(P < 0.05或0.01)?与S组比较,IR组和IL组在T2?T3时刻VT?CL和PaO2下降而R上升(P < 0.05或0.01);与IR组比较,EI组和IL组在T2?T3时刻VT?CL和PaO2上升而R下降(P < 0.05或0.01);与EI组比较,IL组在T2时刻PaO2下降,在T3时刻VT?CL和PaO2下降而R上升(P < 0.05)?与S组比较,IR组?IL组W/D和MDA表达水平上升而SOD表达水平下降(P < 0.05或0.01),EI组SOD表达水平下降(P < 0.01);与IR组比较,EI组W/D和MDA表达水平下降而SOD表达水平上升(P < 0.05或0.01),IL组W/D下降而SOD表达水平上升(P < 0.05);与EI组比较,IL组SOD表达水平下降而MDA表达水平上升(P < 0.05)?病理显示EI组肺损伤轻于IR组和IL组?结论:8%乳化异氟烷后处理对大鼠肺缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与减轻肺缺血再灌注损伤后氧化应激有关?  相似文献
10.
目的探讨针刺百会穴或风府穴对丙泊酚所致小鼠记忆障碍的影响.方法 将小鼠按照分层随机区组设计分为6组(n=6):脂肪乳组(A组),丙泊酚组(B组),脂肪乳+针刺百会穴组(C组),丙泊酚+针刺百会穴组(D组),脂肪乳+针刺风府穴组(E组),丙泊酚+针刺风府穴组(F组).用跳台实验和避暗实验分别测定给药后24 h的错误次数和潜伏期.结果 在跳台实验中,与B组比较,D组错误次数减少、潜伏期延长(P<0.05),F组错误次数减少(P<0.05).在避暗实验中,与B组比较,D组错误次数减少、潜伏期延长(P<0.05),F组错误次数减少(P<0.05).结论 针刺百会穴或风府穴能改善丙泊酚所致小鼠学习记忆障碍.  相似文献
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