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1.
透析袋电洗脱法在蛋白质回收和纯化中的应用   总被引:7,自引:0,他引:7  
将初步纯化后的已构建的人脑硫氧还蛋白还原酶基因PET-HBTR表达产物进行SDS-PAGE电泳,分离纯化目的蛋白,免疫动物制备抗体。SDS-PAGE电泳鉴定确证该抗体具有很高的纯度,抗体滴度可达1:1000。改进后的透析袋电洗脱法较适合在大批量蛋白纯化之前进行少量蛋白的纯化,亦可用于少量样品的动物实验研究。  相似文献
2.
人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TRcDNA片段,克隆至pGEM—T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM—TR;经序列分析证实后,提取pGEM—TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET—rhTR。异丙基硫代—β—D—半乳糖苷(IPTG)诱导pET—rhTR在BL21中表达,用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TRcDNA与人胎盘组织TRcDNA同源性为99%;pET—rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36%,其分子质量为55ku。TRcDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。  相似文献
3.
在研究分析性气相色谱分离模型的基础上,提出并建立了双组分制备级气相色谱分离过程的数学模型,模型包括物料平衡方程、吸附等温方程和传质方程。描述该过程的数学模型是隐形非线性偏微分方程,通过数值求解模拟分析了柱填充空隙率和流动相流量等不同操作参数对色谱分离的影响,并与文献实验值相比较,结果基本吻合,最大相对误差在4.86%以内,为实现工业放大和生产的最优化操作和控制提供了一定的指导作用。  相似文献
4.
在20=0.05、0.10、0.15、0.20、0.25的葡萄糖水溶液中加入NaCl、KCl,在293.15K-323.15K下测定了该溶液的密度及粘度。回归计算了NaCl、KCl在该体系中的密度参数及粘度B系数。结果表明,在葡萄糖含量及NaCl、KCl浓度一定的情况下,体系的密度和粘度随温度升高而减小;在同一温度及NaCl、KCl浓度下,随葡萄糖含量的增加体系的密度和粘度随之增加;两种电解质的B系数随葡萄糖含量的增加及温度的升高也增大;在此基础上进一步讨论了该体系内部溶质—溶剂、溶质—溶质间的相互作用,说明了NaCl、KCl对葡萄糖水溶液的结构会有一定的促进和破坏作用。  相似文献
5.
目的:探讨罗格列酮对OLETF鼠股骨病理变化及成骨细胞Bcl-xL表达的影响及机制。方法:OLETF雄性大鼠20只,定期口服葡萄糖耐量试验(OGTT)监测血糖。喂养至30周时,共有成模OLETF鼠12只,随机分为罗格列酮组和模型组(每组6只),LETO鼠8只作为对照组,各组均给药12周。处死大鼠后,测股骨灰干重比。HE染色光镜观察股骨病理变化,并运用免疫组化方法检测成骨细胞Bcl-xL蛋白表达情况。结果:与模型组相比,罗格列酮组股骨灰干重比、成骨细胞计数及Bcl-xL阳性表达强度降低(P〈0.05或P〈0.01),空骨陷窝率、破骨细胞计数升高(P〈0.01);与模型组相比,对照组股骨灰干重比、成骨细胞计数及Bcl-xL阳性表达强度升高(P〈0.05或P〈0.01),空骨陷窝率、破骨细胞计数降低(P〈0.05或P〈0.01)。结论:2型糖尿病本身可影响骨组织的形成和吸收的动态平衡,使骨吸收加快而骨形成不足。罗格列酮对自发肥胖型2型糖尿病大鼠股骨有进一步的损害作用。  相似文献
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