逆转录病毒介导的IL－2和TNF－α融合基因在卵巢癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长的影响

ＩＬ－４和ＴＮＦ－α是引人注目的抗肿瘤活性因子，两者在抗肿瘤及免疫调节方面具有协同作用。我们利用逆转录病毒载体Ｘｄ１构建了插入ＩＬ－２和ＴＮＦ－α融合基因的重组逆转录病毒载体ＸｄＦ，融合基因包括编码ＩＬ－２前导肽和ＩＬ－２和ＴＮＦ－α成熟肽的序列。重组载体用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法引入病毒包装细胞ＰＡ３１７，挑选Ｇ４１８抗性克隆，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度，获得一滴度为１×１０￣４ＣＦＵ／ｍｌ的高滴度克隆。超速离心浓缩这一重组病毒上清，转导人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３，经Ｇ４１８筛选获得抗性克隆。ＰＣＲ可从融合基因转导的细胞ＤＮＡ中扩增出１．１ｋｂ的融合基因片断，证明目的基因完整的整合在细胞的基因组ＤＮＡ中，测其上清中的ＩＬ－２和ＴＮＦ－α活性结果显示：ＩＬ－２的活性为８－１５Ｕ／１０￣６ｃｅｌｌｓ／２４ｈ，ＴＮＦ－α的活性为１５０－４００Ｕ／１０￣６ｃｅｌｌｓ／２４ｈ。这一结果表明逆转录病毒介导的融合基因可以在卵巢癌细胞中获得有效表达，表达的融合基因产物在体内和体外部对肿瘤细胞的生长具有抑制作用。     

Co-modification of IL-2-TNFα fusion gene and B7.1 gene to murine breast tumor cells leads to improved tumor rejection and vaccine effect

Objective To improve the vaccine potency of gene-modified tumor cells.Methods Using recombinant adenoviruses, we expressed the B7.1 gene in murine breast tumor cell line EMF(6) and a subline previously transfected with retrovirus vector XdF harboring the IL-2-TNFα fusion gene.Results Immunization/challenge experiments demonstrated that IL-2-TNFα/B7.1 co-modified tumor cells possessed a lower tumorigenicity in vivo and an improved tumor-specific vaccine potency compared with single gene transfectant (P<0.05). Three weeks after immunization with a variety of tumor cells, the mixed lymphocyte and tumor cells reaction assay (MLTB) and (51) Cr-release assay were performed to test cellular immunity function. The results indicated that IL-2-TNFα and B7.1 together induced a more potent antitumor immune response than either molecule alone, 25% higher than IL-2-TNFα and 20% higher than B7.1, respectively.Conclusion The IL-2-TNFα fusion gene and B7.1 gene act in concert to improve their antitumor effectiveness.     

转化生长因子β1和基质金属蛋白酶抑制因子-1在肝纤维化诊断中的作用及关系

目的通过检测慢性乙型肝炎患者血清TGFβ1和TIMP-1在肝纤维化不同阶段的表达情况,探讨TGFβ1和TIMP-1在肝纤维化诊断中的作用及相互关系。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测40例慢性乙型肝炎患者和12名健康体检者血清TGFβ1、TIMP-1水平,RIA检测血清HA,LN、Ⅲ型前胶原氨基端肽（P．ⅢNP）水平,40例患者全部进行肝活组织检查,分析TGFβ1、TIMP-1与肝组织纤维化程度分期和炎症活动度分级的关系以及五项指标之间的相关性。结果血清TGFβ1、TIMP1在肝纤维化早期即明显升高,敏感性优于HA、LN、PⅢNP;且随肝纤维化程度的加重TGFβ1、TIMP-1逐渐升高（P＜0．05）;TGFβ1变化趋势与TIMP-1、HA、LN、PⅢNP均呈正相关（P＜0．01）,与TIMP-1相关性最强。结论TGFβ1、TIMP-1密切参与肝纤维化的形成过程,TIMP-1可能受TGFβ1调节,二者可作为早期肝纤维化的诊断指标。     

敲除淀粉样前体蛋白基因促进铝诱导的小鼠认知障碍损伤

目的 淀粉样前体蛋白(APP)基因是与痴呆症发生发展相关的重要基因,利用APP基因敲除小鼠探讨铝诱导的认知障碍损伤,及APP对中
毒性认知障碍损伤的作用。方法 3月龄同窝阴性小鼠分为野生对照组（WT）和铝处理组（WT+Al）,APP敲除小鼠分为模型对照组（APP^-/- ）和
模型处理组（APP^-/- +Al）,每组10只。铝处理组在粮食中加入相应剂量的乳酸铝,同窝阴性小鼠和APP^-/-小鼠给予常规鼠粮作为对照,乳酸
铝处理8周后进行水迷宫实验。HE染色观察小鼠脑组织神经病理改变;Western blotting检测糖原合成激酶3β(GSK-3β)和Caspase-3的活性变
化。结果 与WT相比,WT+Al小鼠在原平台区域停留时间和穿越原平台区域次数减少了28.1%和18.8%,而APP^-/- +Al小鼠在原平台区域停留时间
和穿越原平台区域次数减少了44.1%和51%。Western blotting显示,WT+Al小鼠和APP^-/-+Al小鼠脑组织中p-GSK-3β分别减少了17.4%和46.4%。结论 APP基因敲除促进铝诱导的神经毒性和学习记忆损伤。APP基因敲除导致GSK-3β的磷酸化水平降低、活性增高。由于GSK-3β活性增加对痴呆症具有促进作用,推测APP通过抑制GSK-3β活性在痴呆症发生过程中发挥保护效应。     

心肌营养素-1在心脏发育和心脏病发生中的作用

心肌营养素-1是1995年Pennica等从小鼠心脏发育的胚胎干细胞中克隆表达出的一种蛋白质因子。其为白细胞介素-6细胞因子家族的新成员，它可促使心肌细胞肥大，同时也有促使心肌细胞存活的作用。在缺血性心脏病、心肌病及心力衰竭等疾病时CT-1水平均有升高。本文就CT-1在心血管领域的作用及其机理的研究进展作一综述。     

造血干细胞在心脏中的归巢与分化

利用造血干细胞治疗心脏损伤尤其是由退化、缺血和炎症引起的损伤已被认为是新近发展的重要治疗心脏病变的手段之一。造血干细胞在生理及病理条件下均能归巢于心肌,并能被动员至外周血且参与心脏的自稳态和组织维持。现就造血干细胞在心脏中归巢与分化的机制以及造血干细胞在治疗心脏病变中的应用进行简要综述。     

浅谈医院信息化与财务管理的关系

一、医院信息化的发展历程与医院财务管理的发展过程息息相关我国医院信息化建设在20多年的发展中，历经了三个阶段，医院的财务管理工作也相应地有了三次飞跃。     

帕金森病α-Synuclein转基因小鼠模型的建立

目的建立人α-Synuclein野生型及两个突变型A53T和A30P基因的转基因动物模型,研究α-Synuclein在帕金森病发病过程中的作用。方法构建人α-Synuclein表达载体,利用显微注射法制备人α-Synuclein基因的转基因小鼠。通过PCR方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。通过RT-PCR和Western blotting方法鉴定转基因小鼠脑组织中人α-Synuclein mRNA和蛋白表达情况。采用免疫组化鉴定人α-Synuclein在小鼠脑组织中的表达情况。通过Rotatingrod实验评价转基因小鼠的行为改变情况。结果得到表达水平不同的野生型人α-Synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A53T突变型α-Synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A30P突变型α-Synuclein转基因小鼠3个品系。免疫组化显示,转基因小鼠大脑海马、新皮层、纹状体区出现人α-Synuclein阳性标记的细胞。Rotating rod实验结果显示转基因小鼠表现出明显的进行性运动能力障碍。结论建立了转人α-Synuclein基因的帕金森病小鼠模型。