Hsp90抑制剂新生霉素诱导HL-60细胞凋亡及其机制

目的研究Hsp90抑制剂新生霉素(novobiocin,NB)诱导HL-60细胞凋亡的作用,探讨该作用与线粒体凋亡途径的关系,并进一步研究NB对Hsp90客户蛋白(clientprotein)AKT和ERK2功能的影响。方法细胞用NB处理后,采用AO/EB染色后荧光显微镜观察凋亡形态,采用AnnexinV-FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性,用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C的含量,以及procaspase-3、p-AKT(Ser473)和p-ERK2的蛋白水平。结果NB能明显抑制HL-60细胞增殖,IC50是0.3546mmol.L-1;NB能促进细胞色素C释放入胞质,激活Caspase-3/9的活性,触发HL-60细胞凋亡;NB能抑制AKT和ERK的功能,使细胞内p-AKT(Ser473)和p-ERK2的蛋白含量减少。结论NB可通过线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡,还可干扰Hsp90伴侣功能阻断增殖信号通路,抑制HL-60细胞生长。     

姜黄素固体分散体的制备及体外溶出特性

目的制备姜黄素固体分散体，改善姜黄素的溶出度。方法以泊洛沙姆188为载体，用溶剂熔融法制备固体分散体，以差示扫描量热法、X射线粉末衍射进行物相鉴定，并对所得样品进行体外溶出度研究。结果姜黄素固体分散体中药物部分以分子状态分散，部分以微晶分散．药物的累积溶出速率随载体比例增加而增加，以1：9的比例效果最好。结论采用泊洛沙姆188制备的固体分散体能显著提高姜黄素的体外溶出度。     

雷公藤内酯醇在大鼠体内的组织分布

目的：建立雷公藤内酯醇的反相高效液相色谱分析方法,并对其在大鼠的组织分布进行测定。方法：用HPLC紫外检测方法测定大鼠i.v.雷公藤内酯醇后各组织中药物的含量。结果：大鼠i.v.200μg/kg的雷公藤内酯醇后药物在体内分布广泛,以肺、肝、肾中分布较高,各组织的药物含量于给药后5min最高,60min后显著下降。结论：雷公藤内酯醇在大鼠体内分布快且广泛,消除也快,且可穿越血脑屏障和血睾屏障分布到脑和睾丸中。     

使用高灵敏ELISA测定血清胰岛素

<正> 虽然ELISA已被广泛应用于测定激素。但是至今临床上还是使用放射免疫法测定血清胰岛素。其主要原因是目前一般使用的ELISA灵敏度难以达到足以测定空腹血清胰岛素的水平。作者通过使用抗胰岛素抗体包被的聚苯乙烯球(直径3.2mm)与50μl的胰岛素或待测血清在一小试管中反应。继之与使用N-(ε-马来酰亚胺已酰)琥珀酰亚胺酯(EMCS)作为双功能试剂制备的抗胰岛素Fab′-辣根过氧化酶(HRP)交联物     

灵芝三萜组分GLE的体内外抗肿瘤作用

目的:评价灵芝三萜组分GLE的体内外抗肿瘤作用。方法:建立小鼠S180实体瘤和腹水瘤两种模型,观察GLE对实体瘤抑瘤率和腹水瘤生命延长率的影响;采用MTT法检测GLE对人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2的体外抗肿瘤活性。结果:3个剂量(125,250,500 mg.kg-1)GLE对S180实体瘤小鼠均具有一定的抑制作用(P<0.05),500 mg.kg-1组的瘤重抑制百分率达51.4%;对S180腹水瘤小鼠具有明显的延长存活期作用,500 mg.kg-1组的生命延长率为52.0%(P<0.05);体外对人鼻咽癌低分化细胞CNE2有一定的抑制作用。结论:GLE对小鼠肉瘤S180及人鼻咽癌低分化细胞CNE2的生长有一定的抑制作用。     

人转铁蛋白-阿霉素结合物的制备及其体外细胞毒作用

目的 介绍人转铁蛋白－阿霉素结合物的制备及细胞毒性。方法 采用氧化葡聚糖（ＤＥＸ）Ｔ－４０作为中介体，联结人转铁蛋白（ＨＴＦ）与阿霉素（ＡＤＲ）制备人转铁蛋白－阿霉素交联物９ＨＴＦ－ＤＥＸ－ＡＤＲ）。ＨＴＦ与ＡＤＲ的克分子比为１：４０￣４５。以ＭＴＴ法测其细胞毒性。结果 交联物对肿瘤细胞Ｋ５６２１ｈ处理的ＩＣ５０中游离ＡＤＲ的４．２倍，对正常人单核细胞４８ｈ处理的杀伤只有游离ＡＤＲ的１／９。结论     

Fab′——HRP交联物微量亲和纯化法及其应用——微量EIA测定胰岛素

为了提高EIA测定的灵敏度,使用亲合纯化后的抗体是十分必要的~([1])。目前多数方法是将抗体进行亲和纯化后再与HRP交联.制备高纯度的酶标抗体~([2～4])。这     

人转铁蛋白-阿霉素结合物对耐阿霉素K562细胞的体外杀伤作用

目的 探讨阿霉素（ＡＤＭ）与人转铁蛋白（Ｔｆ）结合物对耐阿霉素Ｋ５６２细胞株的体外杀伤作用。方法 采用葡聚糖（ＤＥＸ）Ｔ－１０作为中介体、联接Ｔｆ与ＡＤＭ制备结合物Ｔｆ－ＡＤＭ,用ＭＴＴ法比较结合物对耐ＡＤＭ及ＡＤＭ敏感的Ｋ５６２细胞的体外杀伤作用强度。结果 结合物对耐ＡＤＭ的Ｋ５６２细胞株７２ｈ培养、ＭＴＴ法测定结合物对耐ＡＤＭ的Ｋ５６２细胞ＩＣ５０为４．９μｍｏｌ,游离ＡＤＭ的ＩＣ５０〉１７．２４μｍｏｌ,Ｔｆ对这两种细胞都没有体外杀伤作用。结论 结合物Ｔｆ－ＡＤＭ可提高ＡＤＭ对耐ＡＤＭ的Ｋ５６２细胞株的杀伤作用,此作用与Ｔｆ无明显关系。     

高效液相色谱测定大鼠血浆中雷公藤甲素含量的方法改进

目的改进以高效液相色谱测定大鼠血浆中雷公藤甲素含量的方法。方法采用乙酸乙酯萃取的方法处理血浆。色谱柱为Agilent HC C18，流动相为乙腈-水（23：77），流速为1．0ml／min，检测波长为221nm，进样量为20ul。结果雷公藤甲素检测浓度在12．5～200ng／ml范围内线性关系良好（r=0．9997），最低检测限为3ng／ml，方法的相对回收率为88．6％-98.3％，日内和日间41KSD〈10％．样品冻-20℃冰箱10天内稳定性良好。结论本方法操作简便，灵敏度和精确度高．重现性好，适于雷公藤甲素的体内药物浓度测定和药动学研究。     

姜黄素衍生物Fm04抑制K562细胞增殖及其对P210^bcr/abl引信号通路的影响

目的研究姜黄素衍生物Fm04对K562细胞的增殖及对P210^bcr/abl信号通路的影响。方法应用MTT法检测姜黄素衍生物Fm04对K562细胞增殖的影响；应用Western blot法检测P210^bcr/abl及其下游通路蛋白表达的变化和线粒体细胞色素C的变化；比色法测定Caspase-3、Caspase-9活化程度。结果Fm04对K562细胞的抑制作用呈量效、时效关系，4 μmol／L Fm04作用24h。抑制率88．4％，半数抑制浓度1．45 μmol／L，强度约为姜黄素的7倍；Western blot表明Fm04可显著下调P210^bcr/abl及其下游信号通路蛋白，减少细胞线粒体内细胞色素C含量；Fm04处理组Caspase-3、Caspase-9浓度值增加。结论Fm04显著抑制K562细胞的增殖并减少P210的蛋白含量从而下词P210^bcr/abl下游多种信号分子表达，通过激活caspase的活化和线粒体内细胞色素C的释放，最终诱导K562细胞的凋亡。