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目的从mRNA水平和蛋白水平检测乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)对人肝癌细胞脂类代谢相关蛋白表达的影响。方法以HBV细胞株或以1.2倍体HBV基因组瞬时转染人肝癌细胞株,采用实时定量PCR和Western blot方法验证人肝癌细胞载脂蛋白AI(apolipoprotein A-I,ApoAI)、载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)、超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD 2)、NADPH脱氢酶(醌)1(NAD(P)H dehydrogenase,quinone 1,NQO 1),以及肝型脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein 1,FABP 1)和乙酰辅酶A乙酰转移酶2(acetyl-Coenzyme A acetyltransferase 2,ACAT 2)等脂类代谢相关蛋白表达水平的改变。结果 HBV细胞株或瞬时转染HBV均使人肝癌细胞SOD 2、NQO 1基因的mRNA和蛋白表达量下调,FABP 1基因的mRNA和蛋白表达量上调。结论 HBV可影响人肝癌细胞脂类代谢相关蛋白表达,为HBV致肝细胞脂肪变机制的深入研究打下良好基础。 相似文献
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目的 探讨流式细胞术检测胞内细胞因子的注意事项.方法 制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液.采用细胞表面抗原CD4、CD25及细胞核内因子FOXP3染色检测调节T细胞,胞内因子TNF-α的检测采用PMA/Iono-mycin,anti-CD3/CD28,PMA/Ionomycin与anti-CD3/CD28联合3种方案进行刺激,比较不同刺激条件下TNF-α胞内因子的表达情况,培养后各组细胞悬液采用固定破膜处理技术进行细胞表面抗原CD3、CD4及细胞内因子TNF-α染色.结果 脾脏淋巴细胞悬液制备中研磨 、裂解红细胞及染色过程中破膜等操作的不当,均导致前向/侧向(FSC/SSC)点图中目的细胞群模糊不清,从而影响后续分析.新鲜脾脏淋巴细胞得率、CD3+T淋巴细胞得率及TNF-α表达率与冻存的脾脏各类细胞比较,差别无统计学意义(P>0.05).胞内因子TNF-α检测结果显示,刺激组PMA/Ionomycin以及anti-CD3/CD28表达率显著高于未刺激组(P<0.05),PMA/Ionomycin与anti-CD3/CD28联合刺激组的表达率也显著高于未刺激组和独立刺激组(P<0.05).结论 流式细胞术胞内细胞因子的检测有很多影响因素,包括脾脏细胞悬液制备中的研磨、裂解红细胞操作,染色处理过程中的破膜、固定,上机检测过程中补偿的调节、对照的设置等均影响实验结果,检测前应注意摸索选择适合待测胞内因子的测定条件. 相似文献
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