CRYGD基因突变与一中国先天性核性白内障家系致病相关

目的对一先天性核性白内障家系进行候选致病基因的筛查,以明确其发病分子基础。方法以家系先证者基因组DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增10个白内障候选致病基因的突变热点区域,PCR产物纯化后进行直接DNA测序筛查突变位点。如发现疑似突变位点,则利用直接DNA测序法对该突变位点在家系其他成员的存在情况进行疾病表型与致病突变共分离分析,进一步确认其是否为致病性突变位点。结果该家系三代呈常染色体显性遗传,临床表型大致相同,可确诊为先天性核性白内障。候选致病基因筛查发现在患者的CRYGD基因外显子2发现一个杂合突变c.C70A,正常家系成员无此突变,临床表型与基因型共分离。该突变为错义突变,导致一个CRYGD蛋白第24位的脯氨酸被苏氨酸取代(p.P24T)。结论 CRYGD(p.P24T)突变是导致该先天性核性白内障家系的致病分子基础。     

基因组印记与遗传疾病

经典的孟德尔遗传理论认为来自双亲的等位基因具有等同的遗传性,而且可以预测遗传性状在后代中的分离。但是在哺乳动物中,有一小部分基因仅有父源或母源的拷贝有功能,这种基于亲本来源的单等位基因表达的现象称为基因组印记(genom ic imprinting),这些单等位基因表达的基因称为印记基因(imprinting gene),印记基因在胚胎生长、行为发生、肿瘤生成、神经发育等过程中起着重要的作用,基因组印记的紊乱将导致一系列的疾病。1基因组印记基因组印记是一种不符合经典孟德尔理论的遗传现象,指配子或合子胚胎期染色体修饰,而产生的一种基于亲本来源…     

MAS-PCR法快速诊断分析Leber''''s遗传性视神经病变原发性致病突变位点

目的探索一种简易、快速、高效的临床基因诊断分析原发性Leber’s遗传性视神经病变(Leber’s hereditaryoptic neuropathy,LHON)位点的新方法。方法根据已知的LHON患者线粒体DNA上的3个原发性LHON致病突变位点(G11778A、T14484C和G3460A),设计3条突变位点特异性聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)引物,直接以全血样为模板的等位基因特异性多重PCR(multiplex allele-specific polymerase chain reaction,MAS-PCR)分析3个原发性LHON致病突变位点。以此方法检测24例确诊的LHON患者,其中18例为线粒体DNA G11778A突变,4例为T14484C突变,2例为G3460A突变;同时,以20份正常血样标本作阴性对照。结果优化的MAS-PCR条件为94℃/3min,94℃/30s、59.8℃/30s、72℃/30s,30个循环,72℃/3min;以此方法检测了44份血样标本,其结果与预期结果一致,表明利用该方法筛查3个原发性LHON致病突变位点是可行的。同时,混和血液样本模拟实验结果显示,该方法可检测含多个原发性LHON致病突变位点的血液样本,且整个分析过程只需约2h。结论该方法直接以全血样作为PCR的模板,不需从血样中纯化DNA;单管一次性行PCR,可同时筛查3个原发性LHON致病突变位点。因此,该方法具有快速、高效、费用低、特异性好以及只需微量血液样本等优点。     

LHON的分子遗传学研究进展

Leber遗传性视神经病变(LHON)表现典型的母系遗传特征,与线粒体DNA(mtDNA)突变相关。然而单一的mtDNA遗传模式不能解释LHON患者男性占优势、外显率逐渐减少、女性患者发病年龄较晚和仅视神经受累等其他的临床特征。对LHON的两种遗传模式即mtDNA遗传模式和mtDNA与核基因互作遗传模式方面的研究进展进行综述。     

先天性眼外肌纤维化伴少年白发家系的KIF21A基因突变分析

目的对先天性眼外肌纤维化(Congenital fibrosis of the extraocular muscles,CFEOM)伴少年白发家系进行候选致病基因KIF21A突变筛查。方法应用Wizard Genomic DNA Purification试剂从家系成员外周静脉血中提取基因组DNA;以先证者基因组DNA为模板,PCR扩增KIF21A基因外显子8、20和21的DNA序列,PCR产物纯化后进行DNA直接测序筛查突变位点。一旦发现可疑性变异,则采用DNA双向测序方法在其他家系成员进行疾病与突变共分离分析以及进一步确认其是否为致病性突变位点。结果该家系三代呈常染色体显性遗传,临床表型大致相同,可确诊为CFEOM1型。KIF21A基因突变筛查发现患者在第21外显子携带c.C2860T杂合性突变,正常成员没有,临床表型与基因型呈共分离。该突变为一个已知突变,可导致KIF21A蛋白第954位的精氨酸变为色氨酸(p.R954W)。结论 KIF21AR954W突变是导致该家系患者眼外肌纤维化致病的遗传基础,是否与少年白发相关尚待进一步研究。     

携带睫状经营养因子的腺相关病毒载体的构建及表达

本研究通过构建睫状神经营养因子（ciliary peurotrophic factor,CNTF）腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）重组质粒，观察其在真核细胞-AAV293细胞中的表达，为研究基于AAV系统的CNTF转基因治疗视神经，视网膜疾病奠定了基础。     

乙型肝炎病毒YVDD和YIDD变异株的构建

WHO估计全世界乙肝病毒感染为3．5亿。中国感染总人数1．2亿。因为乙肝病毒感染易慢性化，可引起肝硬化甚至肝癌。因此人们在不断探索新的治疗方法以改善HBV感染的预后。拉米夫定等核苷类药物抗HBV治疗是继干扰素后一种新的抗HBV疗法。现在临床已广泛使用。治疗有效者HBV复制可受到很大程度的抑制。血清转氨酶稳定。临床症状明显改善。但长期服用可使HBVP区聚合酶基因发生变异。由野生型YMDD变异成YVDD或YIDD型。从而产生抗药性，HBV DNA阳性。因此笔者构建HBV YVDD和YIDD变异株。为建立拉米夫定耐药模型。筛选抗乙肝病毒药物打下前期基础。     

中国人群先天性白内障突变谱的建立

目的:基于PubMed和CNKI文献知识库建立中国人群先天性白内障突变谱。方法:从PubMed和CNKI文献库中检索先天性白内障基因突变相关文献,基于中英文文本挖掘的方法提取基因、变异、人群信息,并根据句级共现性建立不同信息间关联,分别在基因、外显子和突变进行频率分布分析,观察中国人群和世界其他人群突变谱的差异。结果:建立中国人群先天性白内障的突变谱,先天性白内障相关的169个变异分布在32个基因的60个外显子或内含子可变剪切区域上面。结论:基于PubMed和CNKI,通过计算机文本挖掘和人工检查相结合的方法,建立中国人群先天性白内障基因变异数据库并获得突变谱可行。该方法可为中国人群其它单基因病突变谱的获得提供借鉴。     

高耐汞菌株的筛选及其生物学特性研究

[目的]从汞污染土壤中寻找高耐汞菌。[方法]用HgCl2选择性培养基,分离和筛选出耐汞菌,测定其耐Hg2 和耐药性水平,检测耐酸碱能力和还原Hg2 能力,分析遗传背景。[结果]共筛出7株耐汞菌,形态学观察和生化鉴定分属假单胞菌或枯草杆菌。其中假单胞菌CHY-7菌株耐药性较少,耐Hg2 水平高达100 mg/L,营养要求低,耐酸碱范围广(pH 5.0~10.0);16S rRNA基因分类鉴定为恶臭假单胞菌;PCR和DNA测序证实该菌株含merA基因,位于细菌染色体上;在Hg2 为5~50 mg/L时,48 h后还原Hg2 为Hg0的效率为94.3%到82.8%。[结论]该菌株有望应用于工业汞污水的处理和汞污染土壤及水体的修复。