基于STEM理念的幼儿园教育探索

STEM教育以培养具有跨学科思雏能力的创新型人才为目标,具有团队协作实施\跨学科学习和社会服务支持等特点。把STEM教育引入幼儿园,将会让学前教育更具有全面性。在两种教育相结合的同时也面临着诸多挑战,但这也有利于教师提升自己的教育观和儿童观。     

2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究北大核心CSCD

目的构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及Spc^(R)抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D。将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用Spc^(R)抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证。比较野毒株05ZYH33和敲除株Δcps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同。结果L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1030 bp)、R(1030 bp)以及S(1130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株Δcps2D;与野毒株05ZYH33相比,Δcps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄。结论成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础。     

早期抗抑郁治疗对基底节区脑出血患者预后的影响研究

目的探讨早期抗抑郁治疗对基底节区脑出血患者预后的影响。方法 103例患者随机分为两组。对照组给予常规治疗和护理,实验组在对照组基础上给予早期抗抑郁治疗,包括早期心理干预和抗抑郁药物治疗。采用汉密尔顿抑郁量表评分(HAMD-17)、临床神经功能缺损评分(NFA)、简式Fugl-Meyer评分(FMA)及Barthel指数BI评定,比较入院时和治疗后3个月的评分变化,评估患者抑郁状态、神经功能缺损、运动功能以及日常生活能力。结果治疗后3个月,与对照组比较,实验组HAMD评分、FMA评分、BI指数均优于对照组(P<0.01),两组NFA评分无显著差异(P>0.05)。结论早期抗抑郁治疗能够缓解基底节区脑出血患者的不良情绪,并能提高患者的预后和日常生活能力。     

人源化抗ROR1抗体及其AGAP偶联物对卵巢癌生物学特性的影响

目的：制备酪氨酸激酶样孤儿受体1（tyrosine?kinase?like orphan receptor1,ROR1）的全分子抗体（ROR1?IgG1）及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体（fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti?tumor polypeptide IgG1,IgG1?AGAP）,检测ROR1?IgG1和IgG1?AGAP对卵巢癌细胞生物学特性的影响,探讨ROR1在卵巢癌中的作用机制。方法：以本实验室筛选并保存的ROR1Fab载体为模板,构建ROR1?IgG1和IgG1?AGAP真核表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO?S）,收集上清并纯化。利用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、Biacore X100、免疫荧光、流式细胞术（fluorescence?activated cell sorting,FACS）等评估IgG1?AGAP和 ROR1? IgG1的免疫学活性。通过CCK?8法、划痕实验、Transwell侵袭实验等比较两者对卵巢癌细胞HO8910生物学特性的影响。用蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮细胞?间充质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关标志物的表达,评估ROR1?IgG1和IgG1?AGAP对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：成功制备出ROR1?IgG1和IgG1?AGAP,且能够与ROR1蛋白特异性结合;IgG1?AGAP与ROR1?IgG1均可抑制ROR1阳性卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且IgG1?AGAP组的抑制作用显著高于ROR1?IgG1组,而未观察到对ROR1阴性人正常卵巢上皮细胞IOSE386的抑制作用。Western blot结果表明,在空白对照组、ROR1?IgG1组和IgG1?AGAP组中,Snail的表达量呈现递减趋势,而E?cadherin表达量递增,提示 ROR1?IgG1和IgG1?AGAP可通过调控 Snail和E?cadherin而抑制HO8910细胞发生 EMT,进而抑制其迁移和侵袭能力。结论：IgG1?AGAP可有效靶向表达ROR1的卵巢癌细胞,并具有显著的抗肿瘤活性,IgG1?AGAP可作为ROR1阳性肿瘤患者的潜在候选药物。     

新型炎性反应指标CRP/Alb与类风湿关节炎活动度的相关性

 目的 探讨新型炎性反应标志物血清C-反应蛋白/白蛋白(CRP/Alb)比值与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)疾病活动性之间相关性。方法 回顾性收集150例RA患者的人口学资料与实验室检查结果,根据DAS28-ESR分为RA缓解期(DAS28≤3.2)42例和疾病活动期(DAS28>3.2)108例,比较CRP/Alb等炎性反应指标组间差异及其与RA活动度相关性。结果 RA活动期患者中PLR、NLR与CRP/Alb显著高于RA缓解期患者。CRP/Alb与RA疾病活动度DAS28、红细胞沉降率及PLR、NLR之间呈显著正相关性,ROC曲线显示CRP/Alb用于预测RA活动性曲线下面积为0.748,最佳截断值为0.0951,其敏感性为90.5%,特异性为57.1%。结论 CRP/Alb与RA患者疾病活动性显著相关,具有较好的RA活动性诊断预测价值。     

寨卡病毒NS1单克隆抗体制备及其在临床诊断中的应用

目的用寨卡病毒非结构蛋白NS1免疫小鼠并制备鼠源单克隆抗体,建立捕获ELISA方法检测寨卡病毒NS1蛋白。方法合成NS1基因序列构建真核表达载体pcDNA3.1-NS1,转染HEK293细胞收集上清,经Ni+柱亲和层析法纯化NS1蛋白。以纯化的NS1重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取脾脏进行细胞融合,筛选阳性细胞株,经酶联免疫吸附检测抗体活性和特异性。结果成功表达并纯化NS1重组蛋白,获得7株单克隆抗体,筛选非竞争单抗组合建立捕获ELISA法,该方法可特异性识别NS1重组蛋白,最低检出限为1 ng/ml,且未与其他黄病毒属病毒发生交叉反应。结论成功制备特异性抗寨卡病毒NS1蛋白的鼠源单克隆抗体,建立捕获ELISA法,为寨卡疫情的进一步防控奠定了基础。     

2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株的构建北大核心CSCD

目的构建2型猪链球菌酪氨酸激酶Cps2C基因过表达株,为cps2C基因功能研究提供实验材料。方法使用重叠延伸PCR技术将延伸因子TufA(又名EF-Tu,编码基因为SSU05_0530)的启动子(命名为P0530)与cps2C基因连接为P0530cps2C片段,将P0530cps2C酶切后连接至猪链球菌-大肠埃希菌穿梭质粒pSET2,构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C。将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 2野生毒株05ZYH33感受态细胞,抗性及组合PCR筛选得到cps2C过表达株。qRT-PCR检测过表达株cps2C基因的转录水平。结果重叠延伸PCR成功将P0530启动子片段(300 bp)和cps2C基因片段(696 bp)拼接为P0530cps2C(996 bp),片段及载体经BamH I和EcoR I酶切后连接,成功构建出过表达质粒pSET2::P0530cps2C;将pSET2::P0530cps2C电转化导入S.suis 205ZYH33感受态细胞,抗性筛选及组合PCR检测结果显示cps2C过表达株构建成功。提取野生株05ZYH33和cps2C过表达株总RNA后进行qRT-PCR实验,结果显示过表达株cps2C基因的相对表达水平较05ZYH33株上调2.4倍。结论本研究选用S.suis 205ZYH33的延伸因子TufA强启动子P0530作为启动子,成功构建过表达质粒pSET2::P0530cps2C并导入S.suis 2感受态细胞,成功获得cps2C过表达株,为进一步研究酪氨酸激酶Cps2C功能提供实验材料。     

金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraPL⁃Lectin特异性抗体的制备及其功能分析

目的：制备金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraPL?Lectin单克隆抗体,并分析其体外功能。方法：以USA300基因组为模板,PCR扩增SraPL?Lectin基因序列,克隆到pET28a表达载体中,0.1 mmol/L IPTG 25 ℃诱导6 h,镍柱亲和层析纯化SraPL?Lectin?His蛋白。以纯化的SraPL?Lectin?His重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用常规融合技术制备杂交瘤细胞,间接ELISA法、Western blot法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。扩大培养阳性细胞株后注射小鼠腹腔,收集腹水,经Protein G柱纯化anti?SraPL?Lectin单克隆抗体。以不同终浓度的单克隆抗体预先孵育A549细胞和注射小鼠腹腔,涂板计数单克隆抗体阻断细菌黏附、侵入和感染的能力。结果：成功构建了SraPL?Lectin?pET28a重组表达载体,经镍柱纯化后获得高纯度的重组蛋白,获得稳定分泌单克隆抗体的细胞株,小鼠腹水经Protein G柱纯化后获得纯度高达95%以上的特异性抗体,效价1∶32万。终浓度100 ng/mL单克隆抗体预先孵育A549细胞2 h,能够显著降低金黄色葡萄球菌对A549细胞的黏附和侵入。提前1 d向小鼠腹腔注射1 μg anti?SraPL?Lectin单克隆抗体,能够显著降低小鼠血液中的金黄色葡萄球菌数量。结论：本研究制备的anti?SraPL?Lectin单克隆抗体能够阻断金黄色葡萄球菌对宿主细胞的黏附和侵入,为将SraPL?Lectin作为防控金黄色葡萄球菌感染药物靶点的研发奠定了基础。     

血管紧张素受体脑啡肽酶抑制剂：肥胖性高血压治疗“不二之选”

随着高血压和肥胖在全球的大流行,肥胖性高血压的患病人数持续激增。目前关于肥胖性高血压的发病机制尚未完全清楚,临床亦缺乏针对性的治疗药物。血管紧张素受体脑啡肽酶抑制剂(angiotensin receptor-neprilysin inhibitor, ARNI)是一种同时作用于肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)和利钠肽(natriuretic peptides, NPs)系统的新型心血管药物。作为全球首个上市的ARNI类药物,沙库巴曲缬沙坦已被广泛用于射血分数减低心力衰竭(heart failure with reduced ejection fraction, HFrEF)患者的一线治疗。随着其原发性高血压适应证的获批,越来越多证据显示,沙库巴曲缬沙坦在控制血压达标方面优于传统RAS阻滞剂,并能够带来降压以外改善糖脂代谢、延缓肾功能恶化的额外获益,有望成为治疗肥胖性高血压的“不二之选”。本文通过文献回顾,探讨沙库巴曲缬沙坦对于肥胖性高血压的全面调治作用与其可能机制,为其在高血压及其合并症治疗中提供更多理论依据。     

人源抗c⁃Met抗体与rAGAP偶联物对卵巢癌细胞生物学特性的影响

目的：制备人源抗c?Met的全分子抗体（c?Met?IgG1）及其与重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽（recombinant analgesic?antitumor peptide,rAGAP）偶联的新型抗体（c?Met?IgG1?rAGAP）,分析它们的生物学特性,检测其对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法：以本实验室保存的人源抗c?Met抗体基因为模板,构建c?Met?IgG1?rAGAP真核表达载体并转染真核细胞,表达并纯化抗体偶联物。通过亲和力检测、免疫荧光、流式细胞术等方法,评估c?Met? IgG1和c?Met?IgG1?rAGAP的生物学特性。通过CCK?8、划痕实验、Transwell侵袭实验检测抗体对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：成功制备出能够与c?Met蛋白特异性结合的c?Met?IgG1和c?Met?IgG1?rAGAP两种抗体;一系列实验证明了c?Met?IgG1和c?Met?IgG1?rAGAP均可抑制c?Met阳性的卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且c?Met?IgG1?rAGAP对卵巢癌细胞的抑制作用要强于c?Met?IgG1,而在c?Met阴性的IOSE386细胞中并未观察到这些作用。结论：研究结果表明c?Met?IgG1?rAGAP可靶向作用于c?Met阳性的卵巢癌细胞并具有抗肿瘤活性,可为探索卵巢癌的分子靶向治疗奠定研究基础。