多囊卵巢综合征患者卵泡液中6种miRNAs表达的检测

目的:分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵泡液外泌体中miRNA-9、miRNA-18b、miRNA-19、miRNA-24、miRNA-199和miRNA-320水平,初步探讨其在PCOS发生、发展中的潜在意义。方法:48例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的不孕症患者,分为PCOS组(23例)和对照组(25例),留取其卵泡液。采用超速离心法提取卵泡液外泌体,分别用外泌体粒径分析(NTA)、蛋白质印迹(Western blotting)和透射电镜验证外泌体。通过实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法检测卵泡液和外泌体miRNA-9,miRNA-18b,miRNA-19,miRNA-24,miRNA-199,miRNA-320的表达情况。结果:卵泡液中PCOS组miRNA-199的表达水平高于对照组(5.42±0.80 vs.1.02±0.94,P0.01),miRNA-320的表达水平低于对照组(0.47±0.06 vs.1.23±0.09,P0.01);2组间miRNA-9,miRNA-18b,miRNA-19和miRNA-24的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。在外泌体中,PCOS组miRNA-9和miRNA-18b的表达水平高于对照组(8.94±0.54 vs.1.01±0.97,2.66±0.19 vs.1.12±0.06,均P0.01),miRNA-199和miRNA-320的表达水平则低于对照组(0.43±0.11 vs.1.22±0.07,0.53±0.09 vs.1.18±0.15,均P0.01)。结论:PCOS患者卵泡液和外泌体存在miRNA-9,miRNA-18b和miRNA-199的表达,可能与PCOS发生、发展相关。     

人脐带间充质干细胞外泌体的分离鉴定及其溶血性能研究

目的：分离并鉴定人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSC）分泌的外泌体,研究其对人血的溶血性能。方法：通过超速离心法从脐带干细胞培养上清中分离外泌体,采用蛋白免疫印迹法、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;制备人红细胞悬液,加入不同浓度外泌体,进行溶血试验,用试管法观察并用紫外分光光度法测定计算溶血度。结果：分离获得的外泌体特异富集蛋白CD9、CD81、Alix,不含有高尔基体蛋白Gm130;透射电镜下可见其呈杯盘状结构,粒径直径为40~120 nm;脐带干细胞外泌体对人血的溶血率小于5%。结论：HUCMSC分泌的外泌体具有外泌体的经典结构及典型特征,不引起人血溶血反应,为未来脐带干细胞外泌体作为载体进行药物递送提供了实验依据。     

多囊卵巢综合征患者卵泡液中6种miRNAs表达的检测

目的：分析多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵泡液外泌体中miRNA-9、miRNA-18b、miRNA-19、miRNA-24、miRNA-199和miRNA-320水平，初步探讨其在PCOS发生、发展中的潜在意义。方法：48例接受体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的不孕症患者，分为PCOS组（23例）和对照组（25例），留取其卵泡液。采用超速离心法提取卵泡液外泌体，分别用外泌体粒径分析（NTA）、蛋白质印迹（Western blotting）和透射电镜验证外泌体。通过实时荧光聚合酶链式反应（PCR）法检测卵泡液和外泌体miRNA-9，miRNA-18b，miRNA-19，miRNA-24，miRNA-199，miRNA-320的表达情况。结果：卵泡液中PCOS组miRNA-199的表达水平高于对照组（5.42±0.80 vs. 1.02±0.94，P＜0.01），miRNA-320的表达水平低于对照组（0.47±0.06 vs. 1.23±0.09，P＜0.01）；2组间miRNA-9，miRNA-18b，miRNA-19和miRNA-24的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。在外泌体中，PCOS组miRNA-9和miRNA-18b的表达水平高于对照组（8.94±0.54 vs. 1.01±0.97，2.66±0.19 vs. 1.12±0.06，均P＜0.01），miRNA-199和miRNA-320的表达水平则低于对照组（0.43±0.11 vs. 1.22±0.07，0.53±0.09 vs. 1.18±0.15，均P＜0.01）。结论：PCOS患者卵泡液和外泌体存在miRNA-9，miRNA-18b和miRNA-199的表达，可能与PCOS发生、发展相关。