磷酸钠协同转运蛋白基因SLC34A2的真核表达重组载体的构建及鉴定

目的构建磷酸钠协同转运蛋白基因SLC34A2的真核表达重组载体pcDNA3.1（＋）,并进行酶切鉴定。方法查得人SLC34A2cDNA全序列,设计合成相应特异性引物,引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,通过RT-PCR获得SLC34A2基因,定向插入真核表达载体pcDNA3.1（＋）多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1（＋）-SLC34A2,通过酶切分析,PCR及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果从正常肺组织中逆转录扩增出的SLC34A2基因,大小约为2073bp,经双酶切及测序鉴定证明成功构建了SLC34A2真核表达重组载体pcDNA3.1（＋）-SLC34A2。结论RT-PCR扩增得到了大小约为2073bp的SLC34A2基因;并成功构建了pcDNA3.1（＋）-SLC34A2真核表达重组载体。     

SLC34A2在钙、磷代谢中的研究进展

SLC34A2是编码磷酸钠协同转运蛋白的基因,在人体的多种组织中表达,以肺组织表达最高。该基因主要参与无机磷代谢,与肺泡微石症(PAM)、睾丸微石症等多种代谢性疾病发病相关。已经成为国外研究钙、磷代谢的热点。本文仅就SLC34A2在钙、磷代谢中的研究进展做以综述。1 SLC34A2基因     

人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将亚克隆构建的pET28a( )/DcR3重组表达质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果:pET28a( )/DcR3重组表达质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为33000的目的蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的38%,纯化后的目的蛋白纯度达98%。Western blot显示纯化蛋白与抗DcR3单克隆抗体(mAb)具有良好的反应性。纯化后多克隆抗体效价达1.28×10-6。结论:DcR3蛋白在E.coli中得到高效表达,成功制备高纯度DcR3蛋白及高效价抗DcR3多克隆抗体,为研究DcR3在组织中的表达、分布,研制ELISA试剂盒以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清DcR3表达水平提供实验基础。     

新生儿黄疸并发肾上腺出血的临床观察与护理体会

目的探究分析新生儿黄疸并发肾上腺出血的临床治疗与护理效果,旨在为提高临床治疗与护理效率提供有效依据。方法选取自2009年7月—2011年5月在该院接受治疗的新生儿黄疸并发肾上腺出血34例,予以其黄疸与肾上腺出血的对症治疗,并进行临床观察,记录相关临床症状与治疗效果;后将其随机分为两组,对照组采取常规临床护理干预,实验组采取该院总结的具有针对性的全面护理干预,比较两组新生儿的临床护理疗效,并以随访调查的形式统计患儿远期疗效,做好相关资料的记录工作。结果采取对症治疗后,所有患儿均得以治愈,相关临床症状得以消退;对其采取对照护理后,治疗组患儿治疗优良率88.2%显著优于对照组64.7%,P<0.05具有统计学意义,且对出院患儿进行随访调查,治疗组患儿生活质量优良率94.1%亦显著优于对照组82.4%,P<0.05具有统计学意义。结论由于新生儿黄疸合并肾上腺出血属于临床少见疾病,因此缺乏诊断特异性,在确诊后应予以对症治疗,并结合全面护理来提高临床效果和远期疗效,以此确保患儿生命健康质量。     

头孢尼西钠的合成方法改进

目的:研究头孢尼西钠的合成新工艺。方法:7-氨基头孢烷酸(7-ACA)与5-巯基-1,2,3,4-四氮唑-1-甲基磺酸双钠盐(SMT)在BF3作用下缩合,"一锅法"反应生成7-氨基-3-[甲磺酸基-1-H-四唑-5-基-巯甲基]-3-头孢烯4一羧酸(7-AMT)。7-AMT与D-(-)-甲酰基扁桃酸酰氯在pH 6.5～7.0下酰化,在盐酸作用下去甲酰基成头孢尼西酸,再与N,N-二苄基乙二胺二醋酸盐(DBED)结合生成头孢尼西胺盐(头孢尼西DBED)。胺盐经过强酸性阳离子树脂交换,成盐反应得头孢尼西钠。结果与结论:本工艺反应路线缩短,头孢尼西钠反应总收率提高至74.5%,操作简单,适合工业化生产。     

头孢曲松钠的合成工艺改进

研究头孢曲松钠的合成新工艺。以7-氨基头孢烷酸(7-ACA)与2,5-二氢-6-羟基-2-甲基-3-巯基-5-氧-1,2,4-三嗪(TTZ)在三氟化硼/乙腈作用下缩合,反应生成的7-氨基-3-［(2,5-二氢-6-羟基-2-甲基-5-氧代-1,2,4-三嗪-3-巯基)甲基］-3-头孢-4-羧酸(7-ACT)与2-(2-氨基-4-噻唑基)-2-(甲氧亚氨基)乙酸硫代苯并噻唑酯(AE)在三乙胺的催化下反应生成头孢曲松和2-巯基苯并噻唑(M),过滤,除去M固体,滤液用醋酸钠处理得到头孢曲松钠。本工艺无需从母液中单独回收M,溶剂消耗明显减少,无二次环境污染,操作简单,已成功用于工业化生产。     

视网膜母细胞瘤的CT与病理诊断对照研究

目的：探讨视网膜母细胞瘤的CT表现与病理诊断的关系及其诊断、鉴别诊断价值。方法：回顾性分析49例经手术病理证实的视网膜母细胞瘤的临床资料、CT表现及病理结果，并进行对照研究。结果：49例眼眶CT检查均显示为眼球内高密度软组织肿块，密度均匀27例，不均匀22例，眼球内钙化45例（91．8％），眼球增大11例，视神经增粗8例，病变侵犯眶内6例、颅内2例。病理分型：未分化型28例，分化型21例。镜下见肿瘤细胞排列成菊花状或假菊花状，绝大部分肿瘤内可见钙化，部分肿瘤细胞出现变性、坏死。两型的CT表现在肿块密度上有显著性差异（P＜0．01）。CT定性诊断准确率95．9％（47／49例）。结论：CT可以显示肿瘤的形态、大小、内部特征及其累及范围，对定性诊断具有重要意义。     

地塞米松对人肺泡上皮细胞中SLC34A2基因表达和钙、磷转运的影响

用不同浓度地塞米松与人肺泡上皮细胞A549共培养24h,检测该细胞SLC34A2 mRNA及细胞上清液中的钙、磷。结果显示,高浓度地塞米松组SLC34A2 mRNA表达量明显高于对照组和其他浓度地塞米松组（P均〈0．05）,细胞上清液中的钙、磷含量则明显低于对照组和其他浓度地塞米松组（P均〈0．05）。认为高浓度地塞米松促进人肺泡上皮细胞的SLC34A2基因表达及细胞外液的钙、磷转运。     

超声激活血卟啉对体外培养的人肺癌细胞NCI-446、PLA-801C和PLA-801D的杀伤作用

目的：探讨超声激活血卟啉（HP）对体外培养的人肺癌细胞NCI-446、PLA-801C和PLA-801D的杀伤效应及机制。方法：以HP二盐酸盐为光敏剂,对不同浓度（5、10和20 g•L^-1）HP处理的人肺癌细胞NCI-446、PLA-801C和PLA-801D进行超声波声照（实验组）,另设细胞对照组不进行HP处理及超声波声照,用MTT法检测细胞活性（A₄₉₂值）,判断HP对肺癌细胞的杀伤作用。选用 10 g•L^-1 HP和NCI-446细胞株进行声动力疗法(SDT),采用流式细胞仪检测HP对细胞周期及凋亡率的影响。结果：人肺癌细胞NCI-446、PLA-801C和PLA-801D各不同浓度HP实验组与对照组比较,细胞活性明显降低,差异有显著性 (P<0.05); NCI-446与PLA-801C、PLA-801D细胞活性比较差异有显著性 (P<0.05),而PLA-801C与PLA-801D比较差异无显著性 (P>0.05)。流式细胞术检测结果显示,SDT组发生了G₀/G< sub>1期生长 停顿,凋亡率为（19.224±6.552）%,明显高于对照组［（0.320±0.360）%］（P<0.01）。结论：超声激活HP对体外培养的人肺癌细胞NCI-446、PLA-801C和PLA-801D有明确的杀伤效应,其发生机制是通过诱导细胞凋亡。     

孪生儿同患先天性胃壁肌层缺损2例

病例A,男,3d,G2P3,孕34周,因脐绕颈剖腹产出生,体重1．4kg,孕母怀孕期间无妊高症、糖尿病、贫血病史,患儿出生后因早产、低体重,入住当地医院新生儿科,给予禁食、置暖箱、吸氧、静脉营养治疗。生后60h患儿出现腹胀,无呕吐,无发热,胎便已解,腹胀前无呼吸困难、青紫等症状发生。