电针对性发育期雄性大鼠睾酮和精子发生影响的实验观察

目的:观察电针(EA)对不同发育阶段正常大鼠血清睾酮(T)和精子发生的效应。方法:将109只SD雄大鼠按不同年龄段分为幼年段(JG)、青春发育早期段(EPG)、青春发育后期段(LPG)、成年段(AG);每个年龄段随机分为穴位组(EWA)、非穴位组(ENA)、非特异刺激组(IC)和自然对照组(NC)。EWA组选取百会、太溪、命门、肾俞穴。3Hz的EA分别刺激EWA组与ENA组大鼠10天,每天20 min。10天后,测定所有大鼠血清T值和精子计数。结果:持续电针后,EPG、LPG与AG中的大鼠血清T值均显著下降(P<0.05),LPG与AG中的大鼠精子数量也明显减少(P<0.05)。结论:持续EA刺激可减少性发育后雄性大鼠血清T的含量和精子数量。     

全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定

目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性?方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库?以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性?结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0 × 107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv?经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体?经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg?结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础?     

cyclinD1和CDK4在低氧心肌中的表达及意义

目的研究低氧心肌细胞周期及缺氧过程中细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)表达的变化,探讨缺氧心肌在凋亡前是否存在增殖能力和自身修复。方法采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺血模型,实验分正常对照、缺血6 h和缺血12 h三组;以四唑盐比色试验(MTT)检测心肌细胞活力,流式细胞术测定细胞周期,免疫组化检测cyclinD1和CDK4表达。结果与对照组比较,心肌细胞缺氧处理6 h后,细胞周期中S 期比例增高(P<0 01),12 h后,S期比例下降(P<0 05);cyclinD1胞浆表达和CDK4 胞核表达增加。结论在缺氧所致死亡、凋亡过程中心肌细胞经历了一定程度的增殖过程,cyclinD1 和CDK4 表达增加参与了细胞增殖,缺氧损伤可刺激心肌细胞增殖能力。     

全人源抗肝癌重组免疫毒素的制备及其对肝癌细胞的杀伤作用

目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE鄄A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin鄄A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用。方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ鄄Abrin鄄A相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A表达质粒转化E.coliTOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用。结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60kD;纯化的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17%,IC50为3.12μg/ml。结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin鄄A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用。     

抗体药物治疗黑色素瘤的现状及进展

黑色素瘤的抗体药物治疗方兴未艾,其中抗CTLA-4抗体(ipilimumab和tremelimumab)及抗PD-1抗体(nivolumab 和lambrolizumab)均已完成或正在进行治疗黑色素瘤的Ⅲ期临床试验,针对其他靶点的多个抗体也处于临床试验或临床前研究阶段。本文就抗体药物治疗黑色素瘤的现状及进展做一综述,为黑色素瘤的新药开发和临床治疗提供参考。     

治疗性抗体的研究及其在前列腺癌的应用

免疫治疗是恶性肿瘤治疗的新方向,鼠源单克隆抗体用于人体可能会产生不良反应,而利用DNA重组技术、转基因技术和噬菌体展示技术制备的人源抗体可以克服这种缺陷,人源抗体已成为治疗性抗体的发展趋势.前列腺癌是男性较为常见的恶性肿瘤,目前治疗效果不能令人满意.针对前列腺特异性抗原、前列腺膜抗原和前列腺干细胞抗原等位点的治疗性抗体已经展开实验室和临床研究.利用抗体的导向作用对前列腺癌的靶向治疗,将有巨大的发展前景.     

人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化

目的:探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件?方法:将含有抗Trop-2 Fab 抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F ′大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响;比较不同诱导温度?诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响;大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性?结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加;16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子;加诱导剂12 h,目的蛋白的表达量至峰值?结论:本实验结果为在原核系统中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础?     

电针对正常大鼠性发育前后下丘脑GnRH释放调控的影响

目的 观察电针(EA)对不同发育阶段大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)的影响.方法 218只SD大鼠分为幼年段(JG)、青春发育早期段(EPG)、青春发育后期段(LPG)和成年段(AG);每个年龄段随机分为穴位组(EWA)、非穴位组(ENA)、非特异刺激组(IC)和自然对照组(NC).EWA组选取"百会"、"太溪"、"命门"、"肾俞"穴.3 Hz的EA分别刺激EWA组与ENA组大鼠10 d,每天20 min.10 d后测定所有大鼠下丘脑GnRH mRNA的表达.结果 EPG与LPG中的EWA组大鼠在持续电针后GnRH mRNA的表达明显受到抑制(P＜0.01).结论 持续EA刺激可降低青春发育早期与成熟期大鼠下丘脑GnRH的释放.     

治疗性抗体的研究及其在前列腺癌的应用

免疫治疗是恶性肿瘤治疗的新方向，鼠源单克隆抗体用于人体可能会产生不良反应，而利用DNA重组技术、转基因技术和噬菌体展示技术制备的人源抗体可以克服这种缺陷，人源抗体已成为治疗性抗体的发展趋势。前列腺癌是男性较为常见的恶性肿瘤，目前治疗效果不能令人满意。针对前列腺特异性抗原、前列腺膜抗原和前列腺干细胞抗原等位点的治疗性抗体已经展开实验室和临床研究。利用抗体的导向作用对前列腺癌的靶向治疗，将有巨大的发展前景。     

肝细胞癌MAGE-A9基因的克隆、表达及特性鉴定

目的：扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE—A9(melanoma antigen A9)cDNA，构建原核表达载体，制备抗MAGE—A9单抗．观察其在肝细胞癌中的表达。方法：从人肝癌组织提取总RNA，用RT—PCR从中扩增出MAGE—A9 cDNA，插入载体pMD18-T中．测序正确后，构建重组表达载体pBAD/gⅢ-MAGE—A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达。重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后．制备抗MAGE—A9单抗．免疫组化检测MAGE—A9在肝细胞癌中的表达和定位。结果：获得MAGE-A9cDNA，测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体，表达可溶重组蛋白，SDS—PAGE分析其相对分子质量为35kD。获得抗MAGE—A9单抗，MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21％(8／39)，主要表达于胞浆，未见肿瘤异质性，统计学分析MAGE—A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性。结论：有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE—A9抗原，且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性．MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点。