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1.
目的观察机械牵张力(SS)是否通过激活PKCδ诱导小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移,并进一步探究小檗碱(BBR)对其的影响及作用机制。方法体外常规培养小鼠VSMC分为6组:阴性对照组(NC)、小檗碱组(BBR)、PKCδ抑制剂Sotrastaurin组(Sotras)、SS组、SS+BBR组和SS+Sotras组。静息培养的VSMC分别用BBR或Sotrastaurin或ddH2O预处理1 h,继而机械牵张力(10%牵张强度)牵拉不同时间或不牵拉作为对照。收集各组VSMC,Western blot检测PKCδ磷酸化水平;免疫荧光法检测VSMC增殖;细胞划痕实验检测VSMC迁移。结果免疫荧光和细胞划痕实验结果显示,与阴性对照组相比,机械牵张力刺激显著提高VSMC中Ki67阳性水平约469%(P<0.05,n=3),划痕宽度缩小约54.9%(P<0.05,n=3),而BBR和Sotrastaurin能明显抑制机械牵张力引起的上述变化,与SS组相比,Ki67阳性水平分别下降约66.9%和80.2%(P<0.05,n=3),划痕宽度增加约79.4%和120.1%(P<0.05,n=3);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,机械牵张力刺激可诱导PKCδ磷酸化水平呈时间依赖性升高,以30 min最显著,提升约97.5%(P<0.05,n=3);而BBR可呈浓度依赖性抑制机械牵张力刺激诱导的PKCδ磷酸化水平升高,以200μmol/L效果最显著,降低约37.6%(P<0.05,n=3)。结论BBR可通过抑制PKCδ磷酸化进而阻断机械牵张力诱导的VSMC增殖和迁移。  相似文献   
2.
背景与目的:丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)与肿瘤的发生、发展密切相关。食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,但SRSF1在食管癌中的作用罕有报道。检测SRSF1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:收集2020年1月—2021年12月于河北医科大学第四医院行手术切除的40例ESCC患者的癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测ESCC组织中SRSF1的水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测ESCC细胞系中SRSF1 mRNA表达和蛋白水平。筛选SRSF1高表达的Eca9706细胞进行研究。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术降低SRSF1 mRNA表达。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、transwell和Matrigel基质胶实验分别检测Eca9706细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用数据库分析ESCC组织中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达,并分析SRSF1与VEGFA表达的相关性。采用RTFQ-PCR检测Eca9706细胞VEGFA Iso8a和Iso8b亚型的表达水平,以及敲低SRSF1后VEGFA Iso8a和Iso8b亚型的表达变化。结果:SRSF1在ESCC组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。SRSF1 mRNA表达和蛋白水平在ESCC Eca9706细胞系中最高(P<0.01)。转染siRNA-SRSF1组中SRSF1 mRNA表达和蛋白水平显著低于siRNA-NC组(P<0.01)。与siRNA-NC组相比,siRNA-SRSF1组Eca9706细增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。ESCC组织中VEGFA表达明显高于食管正常组织(P<0.05),且与SRSF1表达呈正相关(P<0.01)。Eca9706细胞VEGFA Iso8a亚型表达明显高于VEGFA Iso8b亚型(P<0.01),且敲低SRSF1后VEGFA Iso8a亚型表达降低,VEGFA Iso8b亚型表达升高(P<0.01)。结论:SRSF1可通过作用于VEGFA可变剪接促进ESCC Eca9706细胞增殖、侵袭和迁移。  相似文献   
3.
目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。  相似文献   
4.
目的 探讨松果菊苷(ECH)对高糖诱导的人视网膜毛细血管内皮细胞(HRCECs)增殖、迁移及新生血管形成的影响及其作用机制。方法 将HRCECs分为5组:正常对照(Con)组、高糖组(HG,25 mmol·L-1 D-葡萄糖)、HG+1 μmol·L-1 ECH组、HG+5 μmol·L-1 ECH组和HG+25 μmol·L-1 ECH组。利用细胞管腔形成实验检测各组HRCECs血管新生能力,用MTT法检测各组HRCECs的细胞活性;用细胞集落形成实验检测各组HRCECs集落形成能力;用Transwell法检测各组HRCECs的迁移能力;用Ki67抗原(Ki67)免疫荧光染色评估各组HRCECs增殖情况;用免疫荧光染色观察各组HRCECs中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)阳性表达;采用Western blot法检测各组HRCECs中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果 与Con组比较,HG组HRCECs的血管新生能力、细胞活性、集落形成能力、Ki67阳性细胞比例、迁移能力以及细胞中ICAM-1、HIF-1α蛋白和VEGF蛋白表达均明显升高(均为P<0.001);与HG组比较,HG+1 μmol·L-1 ECH组、HG+5 μmol·L-1 ECH组和HG+25 μmol·L-1 ECH组HRCECs的上述指标随ECH剂量的增加而递减(P<0.05、P<0.01、P<0.001)。结论 ECH具有抑制HG诱导的HRCECs增殖、迁移及血管新生的作用,这些作用可能与其抑制HIF-1α/VEGF信号通路有关。  相似文献   
5.
《Clinical breast cancer》2022,22(7):690-698
BackgroundTo explore the expression of frizzled related protein (FRZB) in triple-negative breast cancer (TNBC) and role of FRZB in TNBC cell growth and invasion.MethodsBreast cancer clinical data were downloaded from the Cancer Genome Atlas. FRZB and early growth response 1 (EGR1) mRNA levels in TNBC were measured by quantitative real-time polymerase chain reaction. FRZB protein level was measured by immunohistochemistry and western blot. Proliferation, migration, and invasion of TNBC cells were detected by colony formation, wound healing, and transwell assay, respectively. The protein levels of EGR1, E-cadherin, N-cadherin, Snail, p-JAK1/JAK1, p-JAK2/JAK2, and p-STAT3/STAT3 were measured by western blot. JASPAR was used to predict the binding site of FRZB and EGR1. The binding ability of FRZB and EGR1 was verified by dual-luciferase reporter gene assay and chromatin immunoprecipitation assay.ResultsFRZB was low expressed in TNBC tissues and cells. Silencing FRZB promoted cell proliferation, migration, invasion, and EMT and activated JAK/STAT pathway in MDA-MB-468 and MDA-MB-231 cells, but overexpression of FRZB acted opposite effects in MDA-MB-468 and MDA-MB-231 cells. EGR1 was low expressed in TNBC samples and positively correlated with FRZB. Moreover, EGR1 could recover the promotion of silencing FRZB on cell proliferation, migration, invasion, and JAK/STAT pathway in MDA-MB-468 cells, but silencing EGR1 led to the opposite results in MDA-MB-231 cells.ConclusionFRZB was low expressed in TNBC and was regulated by EGR1, and FRZB inhibited TNBC cell growth and invasion by regulating the JAK/STAT3 pathway.  相似文献   
6.
目的探讨RhoA基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoidcysticcarcinoma,SACC)细胞的迁移和侵袭能力的影响。方法将液氮冻存的20例SACC及正常癌旁组织研磨匀浆,分别提取总RNA和总蛋白检测RhoA的表达情况。同时构建RhoA?siRNA转染2个细胞株SACC?LM和SACC?83细胞进行细胞学实验,实验分为实验组(转染RhoA?siRNA基因),阴性对照组(转染siRNA?NC基因)和空白对照组。通过qRT?PCR检测各组细胞RhoA的mRNA表达并确定转染效率;Western blot分析各组细胞RhoA及上皮-间充质转换(epithelial?mesenchymal transition,EMT)标志分子(E?cadherin、N?cadherin、Vimentin)的蛋白表达;Transwell实验及划痕实验分析各组细胞侵袭和迁移能力的变化。结果与正常癌旁组织相比,RhoA mRNA和蛋白相对表达量在SACC组织中增高(P<0.01);实验组与对照组相比,RhoA mRNA的相对表达量和蛋白的相对表达量降低,E?cadherin蛋白的相对表达量增加,N?cadherin、Vimentin蛋白的相对表达量降低(P<0.01);实验组细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.01)。结论RhoA在SACC组织中表达增高;体外沉默RhoA基因可有效抑制SACC?LM和SACC?83细胞迁移和侵袭能力,其可能通过作用EMT影响SACC细胞迁移和侵袭能力。  相似文献   
7.
目的探究微小型RNA-196a(miR-196a)对宫颈癌Hela细胞生存和运动能力的影响和作用机制。方法RT-PCR检测正常宫颈上皮HcerEpic细胞和宫颈癌Hela细胞、CaSki细胞中miR-196a和核受体NR6A1的mRNA水平;阴性对照miR-NC和miR-196a inhibitor转染Hela细胞,分别记为NC组和miR-196a inhibitor组,免疫印迹检测NR6A1蛋白的表达,生物信息学和荧光素酶报告实验分析和验证miR-196a和NR6A1的靶向调控关系;阴性对照质粒pcDNA和过表达质粒pcDNA-NR6A1转染Hela细胞,分别记为pcDNA组和pcDNA-NR6A1组,免疫印迹检测NR6A1蛋白表达;将miR-196a inhibitor和pcDNA-NR6A1单独或联合转染Hela细胞,分别记为miR-196a inhibitor组、pcDNA-NR6A1组和inhibitor+NR6A1组,CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫印迹检测Ki-67、Caspase-3、VEGF和MMP-9的表达。结果与HcerEpic细胞比较,Hela细胞和CaSki细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达水平均较高(P<0.01),Hela细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达变化最为显著(P<0.05);miR-196a inhibitor组Hela细胞中NR6A1蛋白表达显著降低(P<0.01),pcDNA-NR6A1组NR6A1的蛋白表达显著升高(P<0.01);miR-196a inhibitor能显著降低Hela细胞增殖倍数和Ki-67表达水平(P<0.05),同时还能提高Hela细胞凋亡率和Caspase-3表达(P<0.01);此外,miR-196a inhibitor还能减少侵袭细胞数,降低Hela细胞划痕闭合率并抑制VEGF和MMP-9的表达(P<0.01);NR6A1能显著减弱miR-196a inhibitor对Hela细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及对Ki-67、Casapse-3、VEGF和MMP-9表达的调控作用(P<0.01)。结论miR-196a inhibitor能通过靶向抑制NR6A1表达降低宫颈癌Hela细胞的生存和运动能力。  相似文献   
8.
To assess the effects of exposure to extremely low-frequency magnetic fields (ELF-MFs) on MDCK cell lines, experiments were performed in a chamber under controlled conditions (temperature, humidity and CO2). Therefore, the measured physicochemical and electrical changes in the cells are due solely to the magnetic field exposure and not to external factors. A developed sinusoidal magnetic field generator produced the ELF-MFs with a uniform magnetic field and adjustable intensity and frequency. Three experimental indicators were used: (i) transepithelial electrical impedance (TEEI); (ii) cell migration and proliferation; and (iii) expression of the proteins of the tight junctions, and changes in the area and shape of the cell nuclei. No significant effects on TEEI values were observed when 10 and 50 G 60 Hz magnetic fields were applied to confluent cell monolayers. There were no significant differences in migration and proliferation of the cell monolayer exposed to 60 Hz magnetic fields10 and 50 G , but a contact inhibition factor was observed. The expression of the CLDN-1 protein decreased by 90% compared with the control, while ZO-1 protein expression increased by 120%. No significant effects were observed in the area and shape of the cell nuclei. Experimentation in a controlled environment, under physiological conditions, ensures that the observed effects were strictly due to exposure to magnetic fields. Different exposure conditions are necessary to determine the impact on TEEI and cell migration–proliferation indicators.  相似文献   
9.
目的:探讨miR-338-3p和PTP1B对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:Western Blot法测定PTP1B在胃癌标本及癌旁组织中的表达。通过qRT-PCR检测miR-338-3p的表达。用PTP1B质粒和siRNA、miR-338-3p类似物转染SGC7901细胞,用Transwell法测定miR-338-3p和PTP1B对细胞迁移和侵袭的影响。最后,使用双重荧光素酶报告基因来验证miR-338-3p对PTP1B的靶向作用。结果:在这项研究中,我们发现PTP1B蛋白水平在胃癌组织中明显增加,并且PTP1B促进了胃癌细胞的迁移和侵袭。生物信息学分析表明,miR-338-3p可能靶向PTP1B。在胃癌组织中,miR-338-3p与PTP1B负相关(r=-0.653,P=0.013)。我们证明了miR-338-3p可能调节胃癌细胞中的PTP1B,通过靶向PTP1B来调节胃癌细胞的迁移和侵袭。结论:miR-338-3p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,可能与靶向PTP1B有关,本研究为胃癌治疗提供新的分子靶点和依据。  相似文献   
10.
目的 探讨造血干细胞特异性相关结合蛋白-1(Hax-1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选择2018年9月至2019年6月手术切除并得到术后病理证实的胶质瘤组织35例和颅脑损伤内减压术切除的正常脑组织35例,采用qRT-PCR检测Hax-1 mRNA水平;同时检测胶质瘤细胞系(U87、A172、T98及U343)和人星形胶质细胞(NHAs)Hax-1 mRAN水平。使用Lipofectamine 2000法将Hax-1 siRNAs和阴性对照siRNA转染U87细胞构建Hax-1低表达细胞株,将Hax-1高表达质粒和PCDNA3.1空载质粒转染U343细胞构建Hax-1过表达细胞株,使用蛋白印迹法验证转染效果,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,免疫印迹法检测NF-κB信号通路相关蛋白表达水平(NF-κB、CCND1、C-myc、MMP-2、MMP-9)。结果 胶质瘤组织Hax-1 mRNA水平明显高于正常脑组织(P<0.05);胶质瘤细胞系(U87、A172、T98及U343)Hax-1 mRNA水平明显高于人星形胶质细胞(P<0.05),其中U87细胞Hax-1 mRNA水平最高,U343细胞最低。U343细胞转染Hax-1过表达质粒后,Hax-1蛋白水平显著增高(P<0.05),细胞增殖、侵袭、迁移能力均明显增强(P<0.05),NF-κB p65及IκBα蛋白磷酸化水平以及CCND1、C-Myc、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。U87细胞转染Hax-1 siRNA后Hax-1蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞增殖、侵袭、迁移能力均明显降低(P<0.05),NF-κB p65及IκBα蛋白磷酸化水平以及CCND1、C-Myc、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 胶质瘤组织Hax-1呈高表达,明显促进肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与激活NF-κB信号通路有关。  相似文献   
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