相变高分子微球增效高强度聚焦超声消融裸鼠骨肉瘤

目的制备相变高分子微球,观察其增效高强度聚焦超声(HIFU)消融裸鼠骨肉瘤模型的效果。方法制备包裹液态氟碳的高分子微球,检测其形态、结构、粒径电位及相变条件;建立裸鼠骨肉瘤模型,随机分为空白组(不予处理)、对照组(注射生理盐水)和实验组1、2、3(注射稀释倍数分别为5、10、20倍的Pct-MP溶液),处理后立即用海级星对肿瘤进行辐照。于辐照后即刻和72h提取标本并观察坏死面积、行HE染色,并对72h提取的标本的坏死周边组织进行细胞增殖和凋亡测定。结果成功制备相变高分子微球;HIFU辐照后即刻提取的标本,实验组1、2的坏死面积与对照组差异均有统计学意义(P均0.05),但与实验组3的差异无统计学意义(P0.05);72h后提取的标本,实验组1、2的坏死面积进一步扩大、与辐照后即刻提取的标本的差异有统计学意义(P均0.05)。HIFU辐照72h后,实验组1、2、3与对照组间坏死周边组织的凋亡和增殖指数差异均有统计学意义(P均0.05)。结论在骨肉瘤裸鼠模型中,自制相变高分子微球能够增强HIFU对于骨肉瘤的消融效果,增强作用与微球浓度有关。     

靶向VEGFR2光声/超声双模态造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的制备一种特异性靶向新生血管内皮细胞的光声/超声双模态造影剂,探讨其体外寻靶能力及双模态显影效果。方法采用多步乳化法制备载有印度墨水和液态氟碳的高分子造影剂,用碳二亚胺法将造影剂与抗血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)单克隆抗体相偶联,制备出靶向VEGFR2高分子造影剂(Vi-PFH-PLGA)。检测该造影剂的一般特性、体外寻靶能力及双模态显影效果,并与非靶向高分子造影剂进行比较。结果所制备的靶向高分子造影剂的平均粒径为(565.5±15.6)nm,间接免疫荧光法观察到抗体成功的连接到造影剂表面,流式细胞仪测得抗体微球连接率为99.72%,体外寻靶能力实验显示较多的靶向造影剂呈花环状牢固的聚集在人脐静脉内皮细胞HUVEC表面,而非靶向组和抗体干预组未见造影剂与HUVEC的特异性结合。体外光声/超声显影实验显示,经脉冲激光辐照后,靶向造影剂组可检测到明显的光声信号和超声信号,与非靶向造影剂相比差异无统计学意义(P均0.05)。结论成功制备出靶向VEGFR2的光声/超声双模态造影剂,该造影剂在体外与HUVEC细胞具有较强的靶向结合能力且具备较好的光声/超声双模态显影效果。     

超声造影定量评价肾血流灌注研究进展

目前肾脏CEUS不再局限于对局灶性病变的研究,日渐倾向于肾脏血流灌注的定量评价。CEUS定量分析技术可用于评估肾脏的血流灌注情况。CEUS具有更高的时间和空间分辨率,可较灵敏地检出肾脏血流及灌注改变,为评价肾脏血流灌注提供了一种便捷、无创、有效、重复性好的新方法。本文就CEUS定量评价肾灌注的原理、方法、临床应用及研究进展进行综述。     

纳米抗体:一种潜力巨大的超声造影剂靶向分子

Gramiak等于1968年提出超声造影的概念，给超声诊断带来了新的希望，近年来超声造影剂的研究和开发取得了快速发展。第一代超声造影剂只能在右心系统显影；第二代造影剂经静脉注射后可通过肺循环达左心，使左心腔显影；第三代造影剂使用低弥散度、高分子量的氟烷类气体成分，提高了在循环中的稳定性，可达到冠脉循环使心肌显影，已用于体内许多重要器官（如心、肝、肾、子宫、卵巢等）和多种疾病（肿瘤、血管性疾病等）的检查。近年来，又设计出针对特定组织的靶向超声造影剂，通过改变造影剂外壳的组成成分或在外壳上连接针对组织特异性抗原的抗体及特异受体的配体，使造影剂更好地应用于显像和治疗。但目前的靶向超声造影剂尚存在一些不足，寻找高效、特异性强、稳定、穿透力强的靶向超声造影剂已成为超声分子成像领域最为重要的研究方向。最近研究发现的纳米抗体是构建理想靶向超声造影剂的良好靶向分子。     

脉冲超声辐照微泡增强脂质体介导基因转染的体外实验研究

目的 探讨脉冲超声辐照微泡超声造影剂提高脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒在肝癌,细胞(HepG2)中转染率的可行性.方法 将HepG2接种在24孔板中,随机分为以下6组:①空白对照组;②质粒+脂质体组;③超声+质粒组;④超声+质粒+微泡组;⑤超声+质粒+脂质体组;⑥超声+质粒+脂质体+微泡组.荧光显微镜及流式细胞仪检测增强型绿色荧光蛋白表达及转染效率;MTT法检测此转染方法对HepG2生长活性的影响.结果 超声+质粒+脂质体组的转染效率最高,并对细胞活性无明显影响;而超声+质粒+脂质体+微泡组转染效率与超声+质粒+脂质体组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但细胞活性与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脉冲超声辐照可介导基因转染,并能提高脂质体基因转染效率.同时,在一定条件下,超声微泡造影剂可提高超声介导基因转染效率,此方法可为基因转染提供新的思路.     

多普勒超声收缩期峰值与阻力指数在鉴别诊断乳腺肿瘤中的应用价值

目的 探讨多普勒超声收缩期峰值血流速度(PSV)与阻力指数(RI)在乳腺良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值.方法 回顾分析经手术证实的120例乳腺肿瘤患者(良性46例,恶性74例)的血流参数PSV、RI,比较两者在鉴别诊断乳腺良恶性肿瘤中的敏感性、特异性和准确性.结果 乳腺恶性肿瘤RI较良性肿瘤明显增高,两者差异有统计学意义,而PSV差异无统计学意义.以PSV>20 cm/s,RI>0.7作为乳腺恶性肿块的判定标准,PSV与RI的诊断准确性分别为55.8%、77.5%;敏感性为50.0%、77.0%;特异度为65.2%、78.3%.联合PSV与RI两项指标其鉴别准确率为79.4%.结论 彩色多普勒血流参数PSV、RI有助于乳腺良恶性肿瘤的鉴别诊断;RI的鉴别诊断价值明显优于PSV;联合两者判定可提高诊断准确性,但与单独使用RI并无明显差别.     

超声微泡介导EGFP 质粒对视网膜母细胞瘤细胞转染效率的实验研究

目的探讨不同浓度的超声微泡造影剂，在不同声强的超声辐照下，介导DNA质粒转染视网膜母细胞瘤（RB）细胞的效率及可行性，为实现外源基因高效、定向的转移奠定基础。方法将培养的RB细胞分别予以超声条件为0．25，0．5，0．75，1．0，1．25W／cm^2，60S的连续波辐照，微泡造影剂浓度为1％，100．4，20％，30％，以筛选出对RB细胞活性无明显抑制的最适超声声强、辐照时间和微泡浓度。根据以上筛选条件，转染EGFP基因入RB细胞，24～48h后，在荧光显微镜下观察EGFP表达情况，并用RT-PCR对EGFPmRNA进行半定量检测。结果声强〈0．75W／cm^2（60s），以及微泡浓度〈20％时，对RB细胞的活性无明显抑制。当微泡浓度10％，超声声强为0．5W／cm^2或0．75W／cm^2时，介导的DNA质粒对RB细胞转染具有较高的转染效率，明显高于其他实验组。超声声强为0．5W／cm^2或0．75W／cm^2介导的转染效率，在统计学上差异无显著性意义。结论浓度适当的微泡在优化的声强条件下，能够有效地提高DNA质粒在RB细胞中的转染效率。     

超声微泡介导bcl-xl基因抗视网膜神经节细胞凋亡作用的实验研究

目的评价超声微泡介导bcl-x1基因抗视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的作用。方法体外混合培养Long Evans大鼠RGCs，并建立N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）损伤的RGCs凋亡模型。将体外培养的RGCs分为A组（正常对照组），B组（NMDA组），C组（bcl-x1转染＋NMDA组）；其中C组在加入NMDA前48h用超声微泡介导bcl-x1转染RGCs。转染48h后采用免疫组化分析转染细胞和未转染细胞的bcl-x1蛋白水平；加入NMDA36h后采用吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）双荧光染色检测细胞凋亡的形态特征，琼脂糖电泳检测细胞凋亡DNA片断。结果免疫组化检测表明转染细胞与未转染细胞的bcl-x1蛋白表达水平有差异，AO／EB检测发现B组可见大量凋亡小体，C组可见少许凋亡细胞。琼脂糖电泳检测亦发现B组呈典型的DNA“梯度”条带，而A组和C组无明显的DNA“梯度”条带。结论超声微泡介导bcl-x1基因抗视网膜神经节细胞凋亡有一定作用，有可能为视网膜视神经疾病的基因治疗提供一种新的方法。     

载吲哚菁绿超声微泡造影剂活体近红外荧光显像兔淋巴结

目的制备载吲哚菁绿的聚乳酸羟基乙酸（ICG-PLGA）超声微泡造影剂并检测其特性,观察以之进行活体近红外荧光显像兔淋巴结的效果。方法用双乳化法制备ICG-PLGA超声微泡造影剂,行光镜、扫描电镜、粒径检测检查,观察其形态及大小;用分光光度法绘制吲哚菁绿的标准曲线,计算造影剂中吲哚菁绿的载药量和包封率。对3只正常大白兔经足垫注射该造影剂,观察活体近红外荧光显像兔腘窝淋巴结的效果。结果 ICG-PLGA超声微泡造影剂为淡绿色乳液,光镜和电镜下形态规则,表面光滑,大小均匀;活体近红外荧光成像能清晰显示兔腘窝淋巴结。结论 ICG-PLGA超声微泡造影剂具备荧光成像的特征,具有高敏感性,可作为荧光成像的示踪剂。     

相变型链霉亲和素化PLGA纳米粒的制备

目的 制备一种相变型链霉亲和素化的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒(PLGA-SA/PFP),研究体外热致相变、声致相变增强超声显影的效果.方法 采用单乳化法及碳二亚胺法制备PLGA-SA/PFP,显微镜加热板法进行热致相变,低强度聚焦超声(LIFU)进行声致相变.结果 PLGA-SA/PFP的平均粒径为(346.2±74.49) nm,链霉亲和素结合量为2 208个分子/纳米粒.43.7℃时纳米粒发生相变,LIFU作用后可观察到超声显影增强.结论 成功制备了PLGA-SA/PFP,可用于预定位靶向实验.