受体介导的凝血酶对成骨细胞增殖及分化的作用

目的 通过凝血酶对成骨细胞的增殖及分化作用的研究来探讨受体介导的凝血酶的功能.方法 原代成骨细胞分别取自于蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)-1敲除鼠和野生对照鼠的头颅骨.并利用凝血酶,人工合成的PAR-1或PAR-4特异性激活短肽对细胞进行处理,通过对5.溴-2-脱氧尿嘧啶的嵌入及细胞碱性磷酸酶活性的测定探讨PAR-1或PAR-4激活对细胞增殖和分化的影响.结果 在野生鼠成骨细胞,凝血酶及PAR-1激活肽均能促进的细胞增殖和降低碱性磷酸酶的活性,但PAR-4激活肽却无这些作用.然而在PAR-1 敲除鼠的成骨细胞无论是凝血酶还是PAR-4激活肽均不能改变细胞的增殖及碱性磷酸酶的活性.结论 本研究结果 表明凝血酶促进成骨细胞增殖及抑制其分化是通过PAR-1介导的.其他凝血酶受体并不具有此作用.     

三维培养模型中胰岛素样生长因子-I对人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的 了解胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在三维培养条件下对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.方法 通过组织块法分离培养hPDLCs.采用旋转细胞培养系统(RCCS)建立三维培养环境.将细胞分为4组,分别为阴性对照组、阳性对照组(三维培养组、IGF-I组)、实验组(三维培养加IGF-I...     

模拟微重力条件下成骨生长肽促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖与分化

目的研究回转模拟微重力(simulated microgravity,SMG)条件下成骨生长肽(OGP10-14)对MC3T3-E1成骨样细胞增殖与分化的影响。方法利用回转器模拟失重,MTT法检测OGP10-14对回转24 h,48h,72 h MC3T3-E1细胞增殖的效应,并观察培养液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥素(osteopontin,OPN)活性变化。结果回转模拟微重力条件下,10-8mol/L OGP10-14能够显著促进成骨细胞系MC3T3-E1的增殖(P<0.01)并促进成骨细胞系MC3T3-E1的ALP和OPN活性。结论回转模拟微重力条件下,OGP10-14对成骨细胞系MC3T3-E1的增殖与分化具有促进作用。     

模拟失重抑制荷黑素瘤小鼠的T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能

目的 研究模拟失重对小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能的影响.方法 小鼠右后肢皮下注射B16细胞建立移植性恶性黑素瘤模型,采用头低位-15°～20°尾吊小鼠模拟失重模型.观察模拟失重对荷瘤小鼠肿瘤体积和生存时间的影响;采用全自动血细胞分析仪和流式细胞仪分别检测模拟失重条件下荷瘤小鼠外周血白细胞、淋巴细胞的变化和T淋巴细胞亚群的变化;采用ELISA法和LDH释放法分别检测模拟失重对肿瘤细胞诱导T淋巴细胞产生IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平和肿瘤特异性CTL对肿瘤细胞杀伤活性的影响.结果 与对照组相比,模拟失重组荷瘤小鼠肿瘤生长速度加快,生存期缩短,外周血淋巴细胞总数降低,淋巴细胞比例降低,CD3+、CD4 +/CD3+、CD8+/CD3+T淋巴细胞所占比例降低,丝裂原诱导的脾脏T淋巴细胞增殖能力降低(P＜0.05或P＜0.01).模拟失重条件下,肿瘤细胞诱导产生的细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α水平降低,肿瘤特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤活性降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 模拟失重抑制小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能.     

mTERT启动子调控SEA/CD80基因治疗小鼠肝癌

目的观察我们以前构建的端粒酶反转录酶启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)/CD80基因重组腺病毒载体对肝癌的疗效和诱导的免疫学效应。方法重组腺病毒采用瘤体内直接注射的方式对小鼠皮下移植性肝癌进行治疗,采用RT-PCR和Western blot方法检测腺病毒注射部位的SEA和CD80 mRNA和蛋白的表达情况;采用ELISpot方法和LDH释放实验分别检测脾脏淋巴细胞中肝癌特异性IFN-γ分泌细胞的频数和细胞毒性T细胞(CTLs)对Hepa1-6细胞的特异杀伤活性;通过观察荷瘤小鼠经治疗后肿瘤体积的变化及生存时间,评价重组腺病毒对肝癌的治疗作用。结果我们构建的腺病毒能够使SEA和/或CD80mRNA和蛋白靶向地在肝癌组织中表达;与空载体组和PBS对照组相比,双基因组和单基因组分泌IFN-γ的T细胞数量均明显增多,CTL对Hepa1-6细胞的特异性杀伤作用均明显增强,荷瘤小鼠肿瘤体积明显减小,生存期明显延长;双基因组的疗效和对免疫系统的激活作用明显高于单基因组。结论我们制备的肿瘤靶向性重组腺病毒对肝癌有良好的治疗作用,联合基因治疗优于单个基因治疗。     

高+Gx环境对猴翼内肌C-jun基因表达的影响

目的：探索高＋Gx环境是否造成翼内肌病理性损伤和对c—jun表达的影响。方法：以9只雄性恒河猴为对象，按受试Gx环境、持续时间，随机分4组：对照组为＋1Gx、300s；实验组为3组，分别为＋15Gx、200s；＋18Gx、165s；＋21Gx、140s。采用组织病理学、免疫组织化学方法，观察模拟高正加速度环境下猴翼内肌肌细胞组织和c—jun基因表达的变化。结果：组织病理学观察，实验组、对照组猴翼内肌组织结构无明显变化；免疫组织化学观察，对照组翼内肌细胞核c—jun呈阴性或弱阳性表达，而细胞质着色不明显。实验组翼内肌细胞核c—jun着色明显，呈强阳性表达，不同高＋Gx组之间无明显差别。结论：高于＋15Gx的环境可引起猴翼内肌细胞c—jun基因表达增强。     

SEA-CD80基因过表达Hepa1-6肝癌细胞体外诱导的免疫学效应

目的观察经SEA和CD80重组腺病毒感染Hepa1-6肝癌细胞后体外能否诱导抗肿瘤免疫学反应。方法 Hepa1-6细胞分别经空载体腺病毒Ad(空)和重组腺病毒Ad-MMRE-mTERT-B7、Ad-MMRE-mTERT-SEA、Ad-MMRE-mTERT-BIS感染后,和小鼠脾淋巴细胞共培养,然后采用Brdu酶联免疫法(ELISA)检测淋巴细胞增殖;流式细胞术检测T淋巴细胞亚群增殖;ELISA法检测细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的产生;LDH释放法检测CTLs对Hepa1-6的杀伤作用。结果与感染空载体腺病毒Ad(空)和未感染Hepa1-6细胞相比,经重组腺病毒感染的Hepa1-6细胞体外能够显著诱导脾淋巴细胞的增殖,其中CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞增殖显著;细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-2的产生显著升高;CTLs对肿瘤细胞的杀伤活性显著增强;双基因过表达Hepa1-6细胞体外诱导的免疫应答高于单基因过表达Hepa-6细胞。结论 Hepa-6细胞经重组腺病毒感染后,表达在细胞膜上的SEA和CD80均具有免疫学活性,为今后采用所构建重组腺病毒进行肿瘤的免疫基因治疗提供了实验依据。     

高+Gx环境对猴翼内肌C-jun基因表达的影响

目的:探索高 Gx环境是否造成翼内肌病理性损伤和对c-jun表达的影响。方法:以9只雄性恒河猴为对象,按受试Gx环境、持续时间,随机分4组:对照组为 1Gx、300s;实验组为3组,分别为 15Gx、200s; 18Gx、165s; 21Gx、140s。采用组织病理学、免疫组织化学方法,观察模拟高正加速度环境下猴翼内肌肌细胞组织和c-jun基因表达的变化。结果:组织病理学观察,实验组、对照组猴翼内肌组织结构无明显变化;免疫组织化学观察,对照组翼内肌细胞核c-jun呈阴性或弱阳性表达,而细胞质着色不明显。实验组翼内肌细胞核c-jun着色明显,呈强阳性表达,不同高 Gx组之间无明显差别。结论:高于 15Gx的环境可引起猴翼内肌细胞c-jun基因表达增强。     

孕期VD缺乏以及对胎儿的影响

维生素D缺乏是目前社会所面临的严重健康问题。维生素D的主要作用是增加肠钙的吸收,对维持各年龄段骨骼健康矿化都起着非常重要的作用。维生素D缺乏在儿童导致佝偻病;在成年人会发生软骨病和骨质疏松。近年来发现除了传统的骨骼系统的作用外,维生素D缺乏还与多种疾病的发生有关。VD缺乏累及的人群非常广泛,可以发生在各个年龄阶段,特别是孕妇。造成孕期维生素D缺乏的主要原因是多方面的,主要是由于各种原因导致的阳光照射不足以及孕期VD的需求量增加所致。孕妇VD缺乏可能与胎儿及新生儿的多种不良状况有关,如影响胎儿及新生儿骨骼系统和大脑的发育,还可能与心脏疾病和I型糖尿病等的发生有关。因此,合理补充维生素D,预防孕期VD缺乏对提高产科质量以及母婴保健是非常重要的。