七厘散含药血清对骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化的影响

目的 分析七厘散对体外培养的骨髓间充质干细胞增殖，成骨分化的影响。方法 采用5倍等效剂量七厘散灌服大鼠，制得含药血清，以灌服等体积生理盐水制得对照血清；采用贴壁筛选法培养大鼠骨髓间充质干细胞，同时进行细胞表型鉴定，并以含药血清干预第三代rBMSCs。MTT 法检测细胞增殖情况；于干预后的第3、6、9和12d分别测定细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性、干预后6、11、16d分别测定骨钙素（BGP）、Ⅰ型胶原、钙盐沉积量及钙化结节数，并比较两组间差异。结果 七厘散含药血清显著促进外源性骨髓间充质干细胞增殖及促进骨髓间充质干细胞成骨性分化，表现在该组的碱性磷酸酶活性、骨钙素、Ⅰ型胶原、钙盐沉积量和钙化结节数高于对照组（P<0.01）。结论 七厘散含药血清具有显著促进rBMSCs增殖和成骨性分化活性的作用。     

不同标记方法对大鼠骨髓间充质干细胞标记的研究

目的 观察Hoechst33342、BrdU、DAPI对大鼠BMSCs标记情况，比较其标记效果的差异性；培养转基因绿色荧光小鼠BMSCs的，观察细胞生长情况和其荧光持续时间，比较其与荧光标记后的干细胞之间的优越性。方法 贴壁筛选提取大鼠BMSCs，培养至第三代，流式细胞仪检测其表面抗原，成骨、成脂诱导后染色；Hoechst33342、BrdU、DAPI标记大鼠BMSCs，检测标记后的大鼠BMSCs增殖率，显微镜下观察其荧光持续时间；观察转基因绿色荧光小鼠BMSCs在培养不同时间段的细胞形态、荧光持续时间以及同上边3种标记方法比较的优缺点。结果 Hoechst33342、BrdU、DAPI可用于对BMSCs的标记；BrdU标记过程较长，在前期不存在荧光猝灭缺点，标记后经过荧光免疫组化处理后可见阳性细胞，Hoechst33342、DAPI标记过程较短，荧光持续时间较长，但此过程中必须避光，对操作带来了一定的困难。3种方法标记后对细胞增殖率无影响；转基因小鼠BMSCs生长较大鼠干细胞生长较慢，其优点是不用标记且荧光持续时间较长，用于细胞追踪研究更为方便可行。结论 干细胞有多向分化的潜能，因此有很好的研究价值和应用价值，对干细胞进行标记，为干细胞迁移、归巢机制的研究提供更好的研究平台。