高密度壳聚糖对L-929细胞的毒性研究

目的:研究高密度壳聚糖(high density chitosan,HDC)对小鼠L-929细胞的毒性,以期为其临床安全应用提供依据.方法:观察不同浓度HDC浸提液对体外培养L-929细胞形态的影响,四甲基偶氮唑蓝(methlthiazolyl tetrazolium,MTT)实验评价HDC对L-929细胞生长和增殖的影响,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测HDC浸提液对L-929细胞凋亡的影响,单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)检测不同浓度HDC浸提液对培养的L-929细胞DNA分子损伤的影响.结果:HDC浸提液对体外培养的L-929细胞形态无明显影响,对细胞生长和增殖无明显抑制作用,不同浓度材料浸提液的细胞毒性均为0-1级;FCM示凋亡率随浸提液浓度升高而升高,但不明显;SCGE结果显示HDC对L-929细胞的DNA无明显损伤作用.结论:HDC具有良好的细胞相容性和分子相容性,可为临床的安全应用提供依据.     

环磷酰胺诱发的染色体损伤与P53基因表达的关系

目的：探讨环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)对染色体损伤与P53基因表达间的关系。　方法：以正常人外周血淋巴细胞为材料,用流式细胞仪检测环磷酰胺对突变型P53基因表达的影响,同时以微核(MN)及姐妹染色单体互换(SCE)为指标,进行致突变研究。　结果：环磷酰胺用药组突变型P53基因表达率为30.81 ％,微核率为8 ‰,姐妹染色单体互换率为9.21±1.08,与对照组比较均有显著差异。　结论：环磷酰胺的致突变作用可能与影响P53的基因的表达有关。     

医学遗传学教学改革探索

医学遗传学是遗传学和医学相互渗透、相互结合的学科。为了使学科教学与学科发展相适应,南京中医药大学基础医学院在医学遗传学教学改革和实践中,从教学内容、教学手段、教学方法、科研促学和成绩考核标准等各个方面,进行了有益的探索,以期提高医学遗传学教学质量,培养高素质的医学人才。     

白细胞介素-12对干燥综合征小鼠肝脏的损伤作用及其机制

目的 探讨白细胞介素-12（IL-12）对干燥综合征（SS）小鼠肝脏的损伤作用及其机制。方法 选取12周龄C57BL/6小鼠、非肥胖型糖尿病（NOD）SS模型小鼠、IL-12基因敲除NOD小鼠各5只,分别纳入正常对照组、SS模型组和IL-12 KO NOD组。各组小鼠取外周静脉血分离提取外周血单个核细胞（PBMC）和血清,处死小鼠解剖获取颌下腺组织和肝脏组织。（1）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织制备石蜡切片,HE染色观察肝脏肝小叶结构,MASSON染色观察肝脏纤维化情况。（2）取正常对照组和SS模型组小鼠肝脏组织、颌下腺组织的石蜡切片免疫组织化学染色观察比较IL-12阳性细胞光密度（OD）值的改变。（3）采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测正常对照组、SS模型组小鼠PBMC和肝脏组织IL-12 mRNA的相对表达量,以及正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠肝脏组织纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅰ型胶原（Col1）mRNA的相对表达量。（4）取正常对照组、SS模型组、IL-12 KO NOD模型组小鼠外周血血清和肝脏组织,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、转铁蛋白（TRF）、转铁蛋白受体（TFR）蛋白的表达情况。结果 （1）HE染色可见正常对照组小鼠肝小叶结构基本正常,而SS模型组小鼠肝脏的肝小叶、肝索结构紊乱,肝细胞胞浆内有空泡出现。MASSON染色可见SS模型组小鼠肝脏组织中见弥漫不规则的染为蓝色的胶原纤维,正常对照组小鼠肝组织中染为蓝色的胶原纤维则少见。（2）正常对照组小鼠颌下腺和肝脏IL-12阳性细胞OD值分别为0.08±0.01、0.03±0.01,高于SS模型组的8.74±0.78、2.58±0.07,差异均有统计学意义（t=24.82、80.64,P值均<0.001）。（3）正常对照组小鼠肝脏组织及PBMC中IL-12 mRNA表达分别为1.07±0.15、1.03±0.14,均低于SS模型组的3.00±0.50、3.01±0.57,差异均有统计学意义（t=8.27、7.54,P值均<0.001）。与正常对照组比,SS模型组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均增高,差异均有统计学意义（P值均<0.001）;与SS模型组比较,IL-12 KO NOD组FN、TGF-β mRNA的相对表达量均降低,差异均有统计学意义（P值均<0.05）;3组间Col1 mRNA的相对表达量差异无统计学意义（P=0.243）。（4）与正常对照组比较,SS模型组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF蛋白相对表达量均明显降低,TFR蛋白相对表达量均增高,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。与SS模型组比较,IL-12 KO NOD组血清和肝脏组织中SLC7A11、GPX4、TRF的相对表达量均增加,血清TFR蛋白的相对表达量降低,差异均有统计学意义（P值均<0.05）;而肝脏组织中TFR蛋白的相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）。结论 IL-12表达增高对SS小鼠肝脏组织的损伤起到了促进作用,其机制可能与增高的IL-12诱导肝脏细胞铁死亡有关。     

纳米雄黄抑制肿瘤细胞增殖的体内外研究

目的观察雄黄粒径与抑制肿瘤细胞增殖效应之间的相关性。方法传统方法制备水飞雄黄,气流粉碎机制备气流雄黄,微射流制粒机制备微射流雄黄,对3种雄黄颗粒进行电镜观察、粒度测定和X射线衍射测定;显微镜观察3种粒径雄黄对SMMC7721肝癌细胞生长形态的影响;MTT法观察雄黄对SMMC7721细胞增殖的抑制作用;成功建立HepA小鼠实体瘤模型,以生理盐水灌胃作为对照,观察3种粒径雄黄给HepA小鼠灌胃后移植瘤块的质量和坏死率。结果 3种方法制备的雄黄颗粒粒子直径的d50分别为49.26、4.88和0.28μm,以微射流方法制备的样品粒度最小,达到纳米级别;3种颗粒均可使SMMC7721细胞形态发生凋亡变化;MTT法测得的A值分别为0.402±0.036、0.278±0.024和0.183±0.021,对照组为0.634±0.036,F=430.900,P<0.001;瘤块质量分别为(0.425 8±0.230 8)、(0.348 2±0.153 1)和(0.307 7±0.116 8)g,阴性对照组为(0.634 7±0.208 5)g,F=3.76,P=0.028;瘤块坏死率分别为(25.5±19.8)%、(32.7±12.4)%和(37.2±11.8)%,阴性对照组为(18.0±6.5)%,F=2.94,P=0.041。结论雄黄在体内外均对癌细胞有抑制生长和促进凋亡的作用,且随着粒度的降低,作用逐渐增强。     

TLR2和TLR4相关疾病与药物的研究进展

Toll样受体(TLR)家族的TLR2和TLR4在天然免疫和炎症反应中起到重要作用,有利于机体抵抗病原体感染或组织损伤,但是过度的免疫反应也会带来负面影响,与心血管疾病等多种免疫过度相关疾病的发生密切相关。因此,将TLR2、TLR4作为这些疾病防治和药物开发的潜在靶点,研发TLR2、TLR4拮抗剂、对TLR2、TLR4进行负调控成为近年来的热点之一。本文重点对TLR2、TLR4相关的心血管疾病及TLR2、TLR4拮抗剂研发现状进行回顾与总结。     

葛根素对成骨细胞中miRNA-204的调控及其与Runx2基因表达的关系

目的研究葛根素作用于成骨细胞MC3T3-E1后miRNA表达的变化以及与Runx2基因表达的关系。方法 RT-PCR和western blot法检测Runx2的mRNA表达水平和蛋白表达水平;miRNA表达谱检测葛根素作用于成骨细胞后可能靶向Runx2的miRNA;Target Scan、Pic Tar等靶点预测软件预测靶向Runx2的miRNA;RT-PCR测定miRNA-204表达量;构建Runx23’UTR/突变型Runx2 3’UTR重组质粒、合成miRNA-204mimics和miRNA-204NC共转染MC3T3-E1细胞,双荧光素酶报告基因系统验证靶基因;miRNA-204mimics和miRNA-204inhibitor转染MC3T3-E1细胞,RT-PCR和western blot检测转染前后Runx2的mRNA表达量和蛋白表达量的变化。结果与空白组比较葛根素作用后Runx2的miRNA和蛋白表达均上升;miRNA-204表达水平下降;表达谱和靶点预测软件预测靶向Runx2的miRNA共同有miR-204、miR-3072-3p等;过表达miRNA-204后Runx2的蛋白表达水平下降,干扰miRNA-204表达后Runx2的蛋白水平上升。结论葛根素在成骨细胞中可通过调节靶向Runx2基因的miRNA-204来促进细胞增值分化。     

鳖甲龟板的抗突变效应

以小鼠骨髓细胞姐妹染色单体互换为实验指标，对天然中药鳖甲及龟板的抗突变效应进行实验研究。结果表明，鳖甲及龟板的均具有抗突变活性。