蛋白激酶C-θ在吗啡诱导Th2细胞分化中的作用

目的探讨蛋白激酶C-θ(PKC-θ)在吗啡诱导初始T细胞分化模型中的作用及潜在机制。方法取小鼠脾脏,制备单细胞悬液,使用分离试剂盒获得初始T细胞。将提纯的初始T细胞分为六组:对照组、吗啡组、纳洛酮(吗啡拮抗剂)组、AEB071(PKC-θ抑制剂)组、吗啡+纳洛酮组和吗啡+AEB071组。按组别加入不同刺激物培养,收取细胞,采用流式细胞仪检测Th1和Th2细胞数量,采用ELISA法检测细胞因子IL-4和IFN-γ浓度,采用Western blot法检测PKC-θS676、T538两个位点的磷酸化水平,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测GATA3 mRNA表达量,采用凝胶迁移实验(EMSA)检测GATA3转录活性。结果与对照组比较,吗啡组Th2细胞数量明显增多,IL-4浓度明显升高,PKC-θS676、T538两个位点的磷酸化水平明显升高,GATA3 mRNA表达量及转录活性均明显升高(P0.01)。与吗啡组比较,吗啡+纳洛酮组和吗啡+AEB071组Th2细胞数量明显减少,IL-4浓度明显降低,PKC-θS676、T538两个位点的磷酸化水平明显降低,GATA3 mRNA表达量及转录活性均明显降低(P0.01)。六组Th1细胞数量和IFN-γ浓度差异无统计学意义。结论吗啡通过μ受体激活PKC-θ调控Th2细胞分化,PKC-θ可能作为逆转吗啡免疫抑制功能的一个干预靶点。