腰椎术后邻近节段退变疾患的最新研究进展

邻近节段退变是脊柱外科研究的热点,作者就其发生率、相关影响因素和预防等方面临床研究现状加以综述。     

基因和基因修饰的骨髓间充质干细胞治疗椎间盘退变的研究进展

骨髓间充质干细胞及相关的基因治疗作为一种新的生物治疗手段,在退变椎间盘修复的领域展现了巨大潜力,作者就其相关进展及问题进行综述。     

内质网应激在酸诱导的人椎间盘髓核细胞损伤中的作用机制研究

目的 :模拟人椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)酸性环境,研究酸诱导的内质网应激活化以及内质网应激在酸诱导的髓核细胞损伤中的作用机制。方法:体外单层培养人正常髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)系,以p H值7.4为对照,p H值7.0和6.5分别模拟正常和退变椎间盘酸性环境,培养12~72h,建立酸诱导的髓核细胞损伤模型。采用CCK8法检测髓核细胞增殖情况,透射电镜检测髓核细胞中内质网应激活化情况,免疫荧光检测内质网应激特异性标志物糖调节蛋白78(78 k Da glucose-regulated protein,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达。应用4-PBA(内质网应激阻断剂)阻断内质网应激后,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;β半乳糖苷酶染色检测细胞老化。Western blot检测LC3、GATA4、p53、p21、p16、Bax、Bcl-2和Caspase3蛋白变化情况。结果 :与对照组相比,酸刺激下(p H6.5组)髓核细胞整体增殖力较对照组明显下降;透射电镜下可见内质网扩张明显,膜表面积增加,内质网线粒体膜结构形成,伴线粒体肿胀;细胞免疫荧光检测提示GRP78和CHOP表达明显增加(P0.05)。应用4-PBA后,细胞凋亡率增加,且能够显著增加酸诱导的G1期停滞及β半乳糖苷酶阳性染色率(P0.05)。Western blot检测发现,酸刺激下,髓核细胞LC3、GATA4、p53、p21、p16、Bax和Caspase3表达增高(P0.05),Bcl-2表达降低(P0.05);应用4-PBA后可降低LC3比值和Bcl-2表达水平,并显著升高GATA4、p53、p21、p16、Bax和Caspase3(P0.05)。结论:酸性微环境能够活化内质网应激,在酸诱导的人髓核细胞急性损伤中起保护作用。     

2型糖尿病血糖变异性对腰椎椎间融合术后手术部位感染的影响

【摘要】 目的：分析2型糖尿病患者围手术期血糖变异性与经椎间孔腰椎椎间融合术（transforaminal lumbar interbody fusion，TLIF）术后手术部位感染（surgical site infection，SSI）的相关性。方法：回顾分析 2018年1月~2021年4月305例在东南大学附属中大医院脊柱外科接受TLIF的合并2型糖尿病的腰椎退行性疾病（lumbar degenerative diseases，LDD）患者，其中男性133例，女性172例，平均年龄67.6±9.3岁。收集所有患者的病历资料，一般资料包括性别、年龄、体质指数（body mass index，BMI）（是否≥25kg/m2）、糖尿病病程、是否合并高血压、是否合并冠心病、入院空腹血糖、术前糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin A1c，HbA1c）、术前及术后平均空腹血糖（mean fasting blood glucose，MFBG）、术前降糖方案（①口服降糖药；②皮下注射胰岛素；③联合用药：口服降糖药+皮下注射胰岛素；④饮食疗法）。手术相关资料包括术中出血量、术中输血量、手术时间、手术节段（是否≥2个）、术后引流时间、术后引流量、切口长度。血糖变异性（glycemic variability，GV）监测指标包括术前及术后的空腹血糖水平的标准差（standard deviation of blood glucose，SDBG）、空腹血糖变异系数（coefficient of variation，CV）、空腹血糖最大变异幅度（largest amplitude of glycemic excursions，LAGE）、日间血糖平均绝对差（mean of daily differences，MODD）。根据SSI诊断标准确定术后SSI病例，将患者分为感染组与非感染组。对比两组患者术前及术后的血糖变异性指标，即SDBG、CV、LAGE、MODD等进行分析，同时通过相关性分析和受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）探讨围手术期血糖变异性参数和患者TLIF术后SSI的关系及其预测价值。结果：305例患者中发生SSI者51例，单因素分析显示糖尿病病程、术前及术后的MFBG、SDBG、CV、LAGE、MODD、术前降糖方案、手术节段、术后引流时间、切口长度等因素两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。而在性别、年龄、BMI、高血压、冠心病、入院空腹血糖、术前HbA1c、手术时间、术中出血量、术中输血量、术后引流量等因素比较差异无统计学意义（P＞0.05）。术前SDBG、CV、LAGE、MODD曲线下面积（areas under the curve，AUC）分别为0.840、0.813、0.851、0.680，cut-off值分别是0.89mmol/L、13.69%、2.25mmol/L、0.92mmol/L。术后SDBG、CV、LAGE、MODD曲线下面积分别为0.697、0.672、0.693、0.698，cut-off值分别是1.72mmol/L、16.09%、3.95mmol/L、1.59mmol/L。岭回归多因素分析结果显示术前MFBG、SDBG、CV、LAGE、MODD及术后SDBG、CV、LAGE、MODD大以及术后引流时间长、多手术节段均是2型糖尿病患者发生TLIF术后SSI的独立危险因素（P<0.05），而感染组与非感染组术后平均空腹血糖差异无统计学意义（P>0.05）。结论：2型糖尿病患者围手术期血糖变异性与TLIF术后SSI的发生密切相关，减小血糖变异性可能有助于降低术后SSI发生率。     

黄韧带血肿:1例报道及文献综述

黄韧带血肿是一种罕见的椎管内硬膜外血肿,其发病机制尚不清楚,可能是由于轻微的外伤引起退变的黄韧带中增生的小血管破裂出血所致,最早由Sweasey于1992年报道,多见于腰椎,临床症状进行性加重,与椎间盘突出、滑膜囊肿等相似,主要表现为神经、硬膜囊受压的症状。本文报道了1例腰椎黄韧带血肿的病例,并对已发表文献回顾总结。     

糖尿病对后路腰椎间融合术预后的影响

既往研究显示,糖尿病作为一种全身代谢性疾病与后路腰椎间融合术（posterior lumbar interbody fusion, PLIF）的预后密切相关,其具体机制尚不明确。虽然有相关文献提示糖尿病患者PLIF术后并发症发生率高,但是通过有效控制围手术期的血糖,保证血糖的稳定性,评估患者的身体状况,糖尿病患者能够获得良好的手术疗效。本文旨在通过回顾以往文章,总结糖尿病患者行PLIF术全身、围手术期及远期并发症,探讨并完善糖尿病患者预测术后并发症的指标,分析糖尿病影响PLIF预后的机制,以期进一步评估PLIF手术的有效性和安全性,为临床医师提供参考。     

大鼠椎间盘巢源性干细胞对退化髓核细胞作用的研究

目的 :研究大鼠椎间盘巢源性干细胞(stem cells derived from ISN,ISN-SCs)对衰老髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的作用。方法:取10只SD大鼠(雄性,10周龄),处死后分离获取脊柱功能单位,显露髓核及椎间盘干细胞巢(stem cell niches of the intervertebral disc,ISN)区域,解剖显微镜下仔细分离获取髓核和ISN组织,采用Ⅱ型胶原酶消化、细胞滤网过滤后,将原代ISN-SCs和NPCs分别重悬于培养液,接种于普通培养箱培养,细胞达约90%融合后进行传代,第三代(P3)NPCs及第四代(P4)ISN-SCs用于进一步实验。采用三系诱导分化(成骨、成软骨、成脂肪)培养液对P4 ISN-SCs分别进行定向诱导分化培养,采用茜素红、钙钴染色检测其成骨分化能力,阿利新蓝染色检测其成软骨分化能力,油红O染色检测其成脂肪分化能力;采用连续传代法,将P3 NPCs连续传代,制备NPCs衰老模型,衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-Gal)染色法检测衰老模型的有效性。研究将细胞培养体系进一步分为正常对照组、衰老组、共培养组,正常对照组采用P3NPCs接种,衰老组采用衰老NPCs接种,共培养组采用P4 ISN-SCs与衰老NPCs以1∶1混匀后接种,各组样本细胞总数及培养环境相同。培养1周后,采用甲苯胺蓝染色检测各组蛋白聚糖表达水平,采用免疫组化检测各组Ⅱ型胶原蛋白表达水平,采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测各组ACAN和COL2a1的m RNA表达水平。结果 :在特定诱导环境下,ISN-SCs可以定向成骨、成软骨、成脂肪分化。SA-β-Gal染色显示连续传代后NPCs衰老率随着传代次数而逐渐增加,P3 NPCs未出现明显的衰老[衰老率(3.0±0.5)%],P5 NPCs衰老率为(18.3±0.7)%,P10 NPCs达到严重衰老标准[衰老率为(86.0±4.6)%]。胞外基质蛋白检测结果显示:与正常对照组相比,衰老组的蛋白聚糖甲苯胺蓝染色明显减弱,Ⅱ型胶原免疫组化染色强度定量也显著减弱(P0.05);而接触共培养后,与衰老组相比,共培养组中的蛋白聚糖甲苯胺蓝染色明显增强,Ⅱ型胶原免疫组化染色强度定量显著增强(P0.05)并恢复至正常水平。qPCR结果显示:与正常对照组相比,衰老组的ACAN和COL2a1的m RNA表达水平均显著性降低(分别为1.00±0.05 vs 0.43±0.03,P0.05;1.00±0.03 vs 0.40±0.02,P0.05);接触共培养后,与衰老组相比,共培养组中ACAN和COL2a1的m RNA表达水平均显著性增加(分别为0.43±0.03 vs 0.99±0.05,P0.05;0.40±0.02 vs1.07±0.04,P0.05),且与正常组相比无显著性差异。结论:ISN-SCs具有较好的三系分化能力,通过接触共培养能够提高胞外基质蛋白和基因的表达水平,对衰老NPCs产生良好的修复作用,为后续ISN-SCs修复椎间盘的体内研究打下理论基础。     

酸敏感离子通道1a偶联内质网应激在人髓核细胞退变中的作用机制初探

[目的]模拟人椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)酸性环境,探讨酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)的活化与内质网应激的关系。[方法]体外单层培养人正常髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)系,不同p H值培养不同时间,模拟椎间盘酸性微环境,建立酸诱导的退变髓核细胞模型。CCK-8检测细胞增殖能力。Western blot、q PCR检测内质网应激。Western blot检测ASIC1a的表达。Fura-2/AM荧光探针检测ASIC1a活化介导的Ca2+内流。流式细胞术检测ASIC1a活化后细胞凋亡率。Pc TX1(ASIC1a特异性阻断剂)阻断ASIC1a后,观察细胞凋亡及内质网应激指标变化情况。[结果]酸诱导髓核细胞凋亡,酸激活ASIC1a及内质网应激,Pc TX1能降低促凋亡的内质网应激通路和髓核细胞凋亡率(P0.05),而未折叠蛋白反应相关指标无明显变化(P0.05)。[结论]ASIC1a能够调控内质网应激中的促凋亡通路,阻断ASIC1能够保护酸诱导的髓核细胞凋亡。     

高毒力肺炎克雷伯菌致硬脊膜外脓肿1例报道

高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae，HvKP）是肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）的新型高毒力变种，其显著特征是高黏液表型。与经典肺炎克雷伯菌（classic Klebsiella pneumoniae，cKP）相比，HvKP毒力更强，多在健康人群中引起社区获得性感染，且发展迅速，常引起全身多灶感染。硬脊膜外脓肿（spinal epidural abscess，SEA）是椎管内硬脊膜外脂肪组织和静脉丛的化脓性感染，临床误诊率及致残率均较高。约2/3的SEA病例都由金黄色葡萄球菌引起，革兰氏阴性细菌很少导致SEA。目前，KP引起的SEA非常罕见，仅有少数病例报告，而HvKP致SEA尚未检索到报道。我们收治了1例HvKP引起的SEA患者，减压术后，患者发生了脑脓肿和颈椎硬膜外脓肿，延髓、高位颈脊髓受压，患者病情危重，但延迟减压联合抗生素治疗后，预后良好，该病例极为罕见，报道如下。