氧化芍药苷对泡沫细胞胆固醇流出的影响

分析氧化芍药苷对THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法THP-1 细胞加入160 nmol/L 佛波酯（PMA）24 h，再加入50 μg/ml 乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL）建立泡沫细胞模型，CCK-8 法测定氧化芍药苷的细胞毒性，同位素标记法测定各处理组泡沫细胞胆固醇流出率。共聚焦显微镜观察泡沫细胞内脂肪分化相关蛋白（ADFP）表达变化，Western blot分析泡沫细胞中ADFP、三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）和过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）蛋白表达变化。结果成功建立THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞模型。氧化芍药苷毒性分析表明，质量浓度在200.0μg/ml 以下无细胞毒性。150.0μg/ml 与200.0μg/ml氧化芍药苷处理泡沫细胞，胆固醇流出率分别为（10.317±0.508）%与（11.265±0.713）%，与apoA-1组相比，差异有统计学意义（p <0.05），均高于apoA-1 组。氧化芍药苷处理的泡沫细胞内ADFP 荧光明显减弱。Western blot分析泡沫细胞ADFP 表达量降低28%。氧化芍药苷处理组PPARα 表达量增加51%，ABCA1 表达量增加45%。结论实验表明氧化芍药苷可通过上调PPARα增加ABCA1 表达，进而促进泡沫细胞胆固醇流出。     

慢病毒介导磷酸二酯酶7A基因沉默细胞株的构建及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达变化

目的  利用慢病毒介导构建磷酸二酯酶7A（PDE7A）基因沉默人单核巨噬细胞（THP-1）株,并分析沉默细胞株的三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达变化。方法  以PDE7A基因为靶点,设计合成3段shRNA片段,与慢病毒载体PmiRzip连接,构建重组质粒。测序鉴定后进行病毒包装,感染THP-1细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）进行分析,确定最佳干扰片段。嘌呤霉素筛选得到PDE7A基因沉默稳转细胞株。qPCR和Western blot检测鉴定所构建的细胞株,将其诱导成为泡沫细胞后鉴定ABCA1基因的表达。结果  转染shRNA1、shRNA2、shRNA3细胞的PDE7A相对表达量分别为（0.480±0.028）、（0.561±0.016）和（0.377±0.013）,故选择shRNA3作为干扰PDE7A基因的最佳片段。采用1.4 g/L嘌呤霉素成功筛选出PDE7A沉默细胞株,qPCR和Western blot检测PDE7A基因的干扰效率,其抑制效率>70%。将其诱导成巨噬泡沫细胞后,Western blot检测显示,ABCA1的表达量增加40%。结论  成功构建PDE7A shRNA慢病毒干扰载体,并筛选出PDE7A基因沉默的THP-1细胞株,且ABCA1的表达量增加。

     

一种简便的骨动态参数计量方法

目的探索操作方法简便、耗时少且对切片仪器要求不高的大鼠股骨硬组织切片方法。方法选取12只两月龄SD雌性大鼠,随机分组为假手术组和双侧卵巢切除组(每组各6只),构建骨质疏松模型。在取材前第9天和第2天腹腔注射钙黄绿素(25 mg/kg)。取材后采用4%中性多聚甲醛固定并进行microCT扫描和硬组织冰冻切片观察骨量情况。结果卵巢切除组大鼠骨量明显少于假手术组,且股骨经蔗糖梯度脱水后冰冻切片完整,荧光显微镜下能明显观察到2条荧光带且卵巢切除组条带宽度明显小于假手术组。结论利用常规冰冻切片机借助透明胶带的黏附作用可对大鼠股骨进行冰冻切片,能有效提高骨组织切片完整度,此办法操作简单快捷,对仪器要求不高,便于常规实验室的普及应用。     

长链非编码RNA作为绝经后妇女诊断骨质疏松标志物的可行性研究

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NONHSAT005760.2在绝经后骨质疏松妇女和骨量正常妇女外周血中的表达差异,以及其在人骨髓间充质干细胞(h-BMSCs)成骨分化过程中的作用.方法 收集2019年全年在我院体检病人样本,选取30例骨密度T值≥-1 SD妇女纳入骨量...