兔血浆利福平的反相高效液相色谱分析及药代动力学研究

目的建立兔血浆利福平（rifampicin,RFP）反相高效液相色谱分析方法（reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）。研究其静脉给药后兔体内血浆药代动力学参数。方法以Agilent ZORBAX XDB-C18柱（5μm,4.6mm×150mm）为分析柱,流动相为0.02mol·L^-1磷酸二氢钠缓冲液（PH7.0）∶甲醇=30∶70;流速1.0mL·min^-1;柱温：35℃,检测波长330nm。8只新西兰大白兔分别按RFP12mg·kg^-1静滴,RP-HPLC法检测血浆药物浓度。所得血药浓度数据经DAS软件拟合分析。结果 RFP在0.5～72μg·mL^-1血浆浓度范围内线性关系良好（r=0.99969）,平均提取回收率为99.72%,日内、日间变异系数（RSD=5）分别为2.6%～4.4%和2.2%～2.9%。静脉滴注RFP在兔体内药代动力学过程符合双隔室模型（权重系数为1/cc）,T1/2=（2.87±0.78）h,Cmax=（12.49±1.57）mg·L^-1,AUC（0-∞）=（50.05±14.50）mg·（h·L）^-1。结论本研究建立的兔血浆利福平RP-HPLC方法简便、准确、重现性好,可用于兔体内利福平血药浓度的测定,兔体内利福平药代动力学过程符合双隔室模型,体内药代谢动力学参数为利福平其它剂型的研究提供参考。     

兔血浆异烟肼反相高效液相色谱分析及药代动力学研究

目的 建立兔血浆中异烟肼（Isoniazid,INH）的反相高效液相色谱分析方法（reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）.研究其静脉给药后兔体内血浆药代动力学参数.方法 以Agilent ZORBAX SB-C18柱（5μm,4.6mm×250mm）为INH的分析柱,流动相为0.02 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液（H3PO4调pH4.0）：乙腈=55：45;流速1.0 mL·min-1;柱温：35C,血浆经桂皮醛衍生化后325nm波长下检测.8只新西兰大白兔分别按INH 11.43 mg·kg-1静滴,RP-HPLC法检测血浆药物浓度.所得血药浓度数据经DAS软件拟合分析.结果 INH在0.05～20μg·mL-1血浆浓度范围内线性关系良好（r=0.99989）,最低检测浓度为50ng·mL-1,平均提取回收率为100％,日内、日间变异系数（RSD =5）分别为1.2％ ～4.3％和2.5％ ～4.4％.INH在兔体内药代动力学过程符合双隔室模型（权重系数为1/cc）,T1/2=（1.92 ±0.80）h,Cmax=（9.70±1.38）mg·L-1,AUC（0-∞）=（20.97±3.11）mg· （h·L）-1.结论 本研究建立的兔血浆异烟肼HPLC方法具有较高的灵敏度、精密度和特异性,适用于兔体内药代动力学的研究.兔体内异烟肼药代动力学过程符合双隔室模型,体内药代谢动力学参数为异烟肼其它剂型的研究提供参考.     

斜外侧椎间融合术联合Wiltse入路单侧椎弓根钉棒固定治疗腰椎管狭窄症

目的:探讨斜外侧椎间融合术(oblique lumbar interbody fusion,OLIF)联合Wiltse入路单侧椎弓根钉棒固定治疗腰椎管狭窄症的疗效。方法:对2017年7月至2019年1月采用OLIF联合Wiltse入路单侧椎弓根钉棒固定治疗腰椎管狭窄症90例进行回顾性分析,男38例,女52例,年龄43~75(59.9±8.8)岁。责任节段分布:单节段L₂-L₃ 8例,L₃-L₄ 12例,L₄-L₅ 30例;双节段中L₂-L₄ 10例,L₃-L₅ 22例;3节段L₂-L₅ 8例,共138个手术节段。记录患者的手术时间、术中出血量以及并发症发生情况,采用腰痛和腿痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)和Oswestry功能障碍指数(Oswestry Disability Index,ODI)以及SF-36评分量表评估临床疗效;术后3 d拍摄腰椎X线片和腰椎MRI,测量椎间隙高度、椎间孔高度、椎间孔面积和椎管面积变化;术后半年根据CT评价椎间融合情况,定期随访拍摄腰椎X线片及MRI检查相邻节段退变的情况。结果:所有病例获得随访,时间12~33(20.2±6.6)个月。手术时间(103.3±35.9) min,术中出血量(70.4±17.8) ml;腰痛和腿痛VAS和ODI分别由术前的(6.2±1.1)分、(6.1±0.9)分和(59.9±4.2)%下降至术后半年时的(2.7±0.5)分、(2.5±0.5)分和(31.3±8.8)%,SF-36量表由术前的(37.2±3.1)分增加到术后半年时的(54.9±6.1)分(P<0.05);术后3 d测量椎间隙高度、椎间孔高度、椎间孔面积、椎管面积均较术前明显改善(P<0.05);术后6个月CT检查3例融合欠佳,发生在单节段1例,多节段2例,余87例融合良好。总融合率96.7%(87/90),单节段融合率为98.0%(49/50),多节段融合率为95.0%(38/40)。总体并发症发生率为17.8%(16/90),其中一过性髂腰肌无力5例(5.6%),终板骨折2例(2.2%),腹膜损伤1例(1.1%),术后血肿1例(1.1%),邻椎病1例(1.1%),融合器沉降6例(6.7%)。3例患者术后随访复发神经根性疼痛,行翻修手术后症状缓解。所有并发症在随访期间得到不同程度地缓解或消失,无融合器移位、螺钉断裂等并发症发生。结论:OLIF联合Wiltse入路单侧椎弓根钉棒固定治疗腰椎管狭窄症疗效满意,具有创伤小、并发症少等微创优势,在严格掌握适应证的前提下,该术式应用于多节段时同样能取得满意的临床疗效。     

载异烟肼、利福平白蛋白纳米粒在兔体内的药代动力学研究

目的 :研究载异烟肼(Isoniazid,INH)、利福平(Rifampicin,RFP)牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)纳米粒经新西兰大白兔静脉给药后的体内药代动力学特征及其相关参数。方法 :16只新西兰大白兔随机分为2组:纳米粒组8只,INH、RPP对照组8只。经耳缘静脉分别滴注等计量的载INH、RFP白蛋白纳米粒和普通对照品(INH 11.43mg/kg、RFP 12mg/kg)。采用高效液相色谱分析方法测定各自INH、RFP的血浆药物浓度。对比研究静脉给药后两种剂型药物在不同时间(0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96、120h)兔体内的血浆药代动力学参数,包括最大血药浓度(Cmax)、生物半衰期(T1/2)、血药浓度时间曲线下的面积(AUC)及体内平均驻留时间(MRT),以DAS 2.0药动学程序进行血药浓度数据拟合分析。结果:给药后两组药物的血药浓度-时间曲线显示:纳米粒药组INH、RFP血药浓度相对稳定,药物浓度持续缓慢下降,给药后96h INH仍能检测到,RFP则为48h。INH的Cmax=9.79±1.38(mg/L),T1/2=28.10±6.69(h),AUC=22.34±8.81(mg/L·h),MRT=15.13±5.48(h);RFP的Cmax=16.79±3.74(mg/L),T1/2=14.13±3.78(h),AUC=116.64±66.26(mg/L·h),MRT=15.89±2.49(h)。对照组中INH的Cmax=9.52±2.19(mg/L),T1/2=1.92±0.80(h),AUC=20.97±3.11(mg/L·h),MRT=2.03±0.62(h);RFP的Cmax=12.50±1.58(mg/L),T1/2=2.87±0.78(h),AUC=50.05±14.50(mg/L·h),MRT=3.70±0.99(h)。对照组INH、RFP血药浓度快速下降,分别在给药后24h和12h检测不到。结论 :载异烟肼、利福平白蛋白纳米粒在兔体内的药代动力学过程符合双隔室模型(权重系数为1/cc)。白蛋白纳米粒可有效改变异烟肼和利福平的药动学行为并具有显著的缓释效果。     

体感诱发电位监测在腰椎管狭窄症斜外侧椎间融合术中的应用

【摘要】 目的：探讨术中体感诱发电位（SEP）监测在退行性腰椎管狭窄症斜外侧椎间融合（OLIF）术中的应用价值。方法：选择2017年7月～2019年2月在宁夏医科大学总医院采用OLIF联合Wiltse入路单侧椎弓根螺钉固定术治疗的92例单节段退行性腰椎管狭窄症患者进行回顾性研究,手术全程给予SEP监测。随访时间15.6±1.8个月（12～23个月）。根据Lee等的腰椎管狭窄MRI分级将患者分为1级组（31例）、2级组（33例）和3级组（28例）。记录分析各组椎间隙处理前及融合器置入后的SEP波幅值;测量手术前、末次随访时责任间隙硬膜囊面积、椎间隙高度及椎间孔高度;临床疗效评价采用腰腿痛VAS评分和腰椎JOA评分。影像学结果及临床疗效改善率与SEP波幅改善率的相关性采用Pearson相关性分析。结果：3组椎间隙处理前与融合器置入后SEP平均波幅值的差异有统计学意义（P<0.05）;1级组、2级组和3级组SEP波幅平均改善率分别为（48.32±7.37）%、（112.34±18.67）%和（28.05±6.78）%,其中3级组有3例患者SEP波幅无任何变化。3组术后末次随访时的椎间隙高度、椎间孔高度、硬膜囊面积及腰腿痛VAS评分和腰椎JOA评分均较术前明显改善,差异有统计学意义（P<0.05）;2级组末次随访时椎间隙高度、椎间孔高度、硬膜囊面积改变值大于1级组和3级组,差异有统计学意义（P<0.05）;3组之间末次随访时腰腿痛VAS评分和腰椎JOA评分改变值差异有统计学意义（P<0.05）。末次随访时,1级组、2级组和3级组腰椎JOA评分改善率分别为（87.0±36.2）%、（85.8±35.3）%和（46.1±26.2）%,优良率分别为93.5%（29/31）、84.8%（28/33）和50%（14/28）。1级组和2级组SEP波幅改善率与末次随访时硬膜囊面积、椎间隙高度、椎间孔高度、腰腿痛VAS评分和腰椎JOA评分的改善率呈正相关;3级组SEP波幅改善率与末次随访时硬膜囊面积、腿痛VAS评分和腰椎JOA评分的改善率呈弱相关。1级组优良病例SEP改善率均大于25.6%,2级组优良病例SEP波幅改善率均大于85.3%。结论：OLIF治疗1、2级腰椎管狭窄症术中SEP波幅改善率可以作为判断间接减压是否有效的参考指标,对于手术中判断腰椎管狭窄间接减压的程度具有一定的参考意义。     

载异烟肼、利福平白蛋白纳米粒中异烟肼在兔腰椎及其椎旁肌组织分布及药代动力学研究

目的 :研究载异烟肼、利福平白蛋白纳米粒(INH-RFP-BSA-NPs)经静脉给药后异烟肼(isoniazid,INH)在兔腰椎及其椎旁肌中的生物分布及药代动力学特性。方法:选取132只健康成年新西兰大白兔,平均分为两组,以普通异烟肼制剂作为对照,经兔耳缘静脉分别注射INH-RFP-BSA-NPs溶液与异烟肼注射液。采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析方法,检测各时间点(1、2、4、8、12、24、36、48、72、96、120h)兔L6椎体和椎旁肌组织中异烟肼的药物浓度。使用DAS 3.2.1软件计算各组织中异烟肼的药物浓度-时间曲线下面积(AUC)、半衰期(t1/2)、平均驻留时间(MRT)等主要药代动力学参数。根据纳米制剂与异烟肼普通制剂在各时间点靶器官组织药物浓度及药时曲线下面积的比值,计算靶向指数(DTI)及相对靶向效率(RTE),评价INH-RFP-BSA-NPs对兔脊柱及椎旁肌的靶向性。结果:各时间点实验组兔L6椎体及椎旁肌组织中异烟肼浓度均高于对照组。药代动力学结果显示:实验组兔椎体中AUC0→∞为(533.71±162.44)μg/g·h,t1/2为(55.32±38.38)h,MRT为(58.12±44.26)h;椎旁肌中AUC0→∞为(17.40±4.89)μg/g·h,t1/2为(25.78±6.05)h,MRT为(27.77±8.51)h。对照组兔椎体中AUC0→∞为(278.61±41.90)μg/g·h,t1/2为(14.90±7.10)h,MRT为(18.92±6.11)h;椎旁肌中AUC0→∞为(7.38±0.93)μg/g·h,t1/2为(5.97±2.68)h,MRT为(5.20±0.8)h。相对于对照组,实验组兔椎体和椎旁肌组织中AUC值显著增高(P0.01),MRT、t1/2延长(P0.05或P0.01)。兔椎体及椎旁肌中的DTI、RTE值基本都大于1。结论:与异烟肼普通制剂相比,INH-RFP-BSA-NPs使异烟肼在兔腰椎及其椎旁肌组织中浓度升高、消除减慢,具有良好的药代动力学特征,明显提高了异烟肼在兔腰椎及其椎旁肌的药物分布。     

结核杆菌裂解物刺激后的成骨细胞来源外泌体对破骨细胞的影响

目的:研究结核分枝杆菌裂解物(MTL)刺激后的成骨细胞来源外泌体(MTL-OB-Exo)对破骨细胞形成的影响。方法:采用细胞增殖与毒性实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)确定MTL的最佳剂量为35.9ng/ml,用最佳剂量的MTL刺激小鼠成骨细胞,采用差速离心法分离、提取MTL-OB-Exo和正常小鼠成骨细胞来源外泌体(OB-Exo),经透射电镜观察其形态及大小,采用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测外泌体跨膜蛋白CD9和成骨细胞特异性碱性磷酸酶(AKP)的表达。将小鼠破骨细胞的前体细胞单核巨噬细胞(RAW264.7),按不同的干预方式分为三组:实验组,MTL-OB-Exo(10ng/ml);对照组,OB-Exo(10ng/ml);空白组,不予任何处理。培养4d后,在光学显微镜下观察RAW264.7的分化情况,并采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(tartrate resistant acid-phosphatase,TRAP),观察各组破骨细胞的形态并计数,比较破骨细胞形成的数量。同样的分组条件下,将干预后的细胞在骨磨片上培养10d,采用亚甲蓝染色,观察各组骨吸收陷窝的形态并计数,比较骨吸收陷窝形成的数量。结果:MTL-OB-Exo为直径30～100nm的圆形或椭圆形结构,高表达CD9和AKP蛋白。采用不同的方式对RAW264.7进行干预后,实验组破骨细胞形成的数量为39.60±1.95个,显著高于对照组(30.20±1.64个)和空白组(28.80±1.58个),差异有统计学意义(P0.05);实验组骨吸收陷窝数量为21.40±1.52个,显著高于对照组(16.20±1.30个)和空白组(14.40±1.52个),差异有统计学意义(P0.05)。结论:MTL-OB-Exo可以诱导并增强破骨细胞的形成,造成骨质破坏。     

经中线皮质骨螺钉固定椎间融合术治疗腰椎退行性疾病的中期疗效分析

【摘要】 目的：对比分析经中线皮质骨螺钉固定椎间融合术（midline lumbar interbody fusion,MIDLIF）和传统后路椎弓根螺钉固定椎间融合术（posterior lumbar interbody fusion,PLIF）治疗腰椎退变性疾病患者的中期疗效。方法：回顾性分析2017年2月～2018年4月我院行腰椎后路植骨融合内固定术治疗并随访的93例腰椎退变性疾病患者的临床资料,其中采用皮质骨螺钉（cortical bone trajectory,CBT）固定45例（CBT组）,传统椎弓根螺钉（pedicle screw,PS）固定48例（PS组）。术后1个月及末次随访时应用视觉模拟评分法（visual analogue scale,VAS）、Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）及日本骨科学会（Japanese Orthopaedic Association,JOA）腰痛评分进行疗效评价;通过腰椎正侧位X线片及CT扫描评估椎间融合情况,测量手术前后及末次随访时融合节段椎间高度、椎间孔高度、椎间孔面积及前凸角,采用改良MacNab量表评估最终疗效,通过患者主观感受评价满意度。结果：CBT组平均随访52.56±4.52个月,PS组平均随访52.08±3.92个月。两组患者在年龄、性别比例、疾病类别组成、手术节段构成比、术前腰腿痛VAS评分、ODI及JOA评分均无统计学差异（P>0.05）。两组患者术前手术节段椎间高度、椎间孔高度、椎间孔面积及节段前凸角无显著性差异（P>0.05）。两组患者术后1个月、末次随访腰痛和下肢痛VAS评分、ODI及JOA评分与术前比较差异均具有统计学意义（P<0.05）;术后1个月、末次随访时手术节段椎间高度、椎间孔高度、椎间孔面积及节段前凸角较术前增加（P<0.05）;术后1个月、末次随访时两组间相应随访时间点各指标对比均无统计学意义（P＞0.05）。末次随访时患者均达到骨性融合;93例患者共出现9例并发症;CBT组3例（6.7%）,其中螺钉松动并融合装置移位1例;下位椎弓峡部骨折1例;1例出现邻近节段退变,无翻修病例;PS组6例（12.5%）,其中伤口感染不愈合1例,螺钉松动2例,3例出现邻近节段退变,1例为症状性ASD行翻修手术;两组无椎弓根骨折、关节突干扰等其他并发症;两组总体并发症发生率无统计学差异（P>0.05）。末次随访时,两组MacNab优良率分别为82.22%和79.17%（P>0.05）;患者满意度分别为95.6%和93.8%（P>0.05）。结论：在腰椎退行性疾病的外科治疗中,采用MIDLIF技术能够获得与PLIF技术一致的临床疗效且中期随访结果满意。     

三种腰椎固定融合术式治疗腰椎术后邻椎病的疗效对比分析

【摘要】 目的：分析斜外侧腰椎椎间融合术（oblique lumbar interbody fusion,OLIF）、后路皮质骨轨迹（cortical bone trajectory,CBT）螺钉固定中线腰椎椎间融合术（midline lumbar interbody fusion,MIDLIF）、传统后路腰椎椎间融合术（posterior lumbar interbody fusion,PLIF）治疗腰椎融合术后邻椎病的临床疗效。方法：回顾性分析2013年5月~2020年9月收治的60例腰椎融合术后邻椎病患者的临床资料,男31例,女29例;年龄40~73岁（57.4±13.8岁）,距首次融合固定术6~84个月（56.3±20.8个月）。融合邻近节段腰椎间盘突出26例,腰椎管狭窄23例,腰椎滑脱不稳11例。依据不同术式分为OLIF组16例、MIDLIF组20例和PLIF组24例。记录3组患者手术时间、术中出血量、住院时间及围手术期情况。应用视觉模拟量表（visual analogue scale,VAS）及Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）评定术前、术后3个月和末次随访时的腰腿痛和腰椎功能情况,在术前、术后3个月的腰椎正侧位X线片上测量邻椎病手术节段椎间隙高度（interbody disc height,IDH）、椎间孔高度（interbody foraminal height,IFH）及椎间孔面积（interbody foraminal area,IFA）。结果：3组患者年龄、性别、病变节段、术前VAS评分和ODI均无统计学差异（P>0.05）。OLIF组术中出血量、手术时间、住院时间分别为125.6±14.5ml、92.3±13.5min、6.3±1.2d,MIDLIF组分别为220.4±15.2ml、120.6±11.4min、10.5±1.4d,PLIF组分别为218.4±12.5ml、115.4±10.7min、10.4±1.4d,OLIF组术中出血量、手术时间、住院时间均较MIDLIF组和PLIF组显著性减少（P<0.05）,而MIDLIF组和PLIF组无显著性差异（P>0.05）。随访10~32个月（20.5±5.8个月）,OLIF组术后3个月时腰痛、下肢痛VAS评分、ODI分别为2.43±0.52分、2.37±0.63分、（20.47±3.10）%,末次随访时分别为2.10±0.52分、2.05±0.31分、（14.14±2.41）%;MIDLIF组术后3个月时分别为2.84±0.67分、1.93±0.36分、（21.89±3.07）%,末次随访时分别为1.94±0.55分、1.75±0.20分、（15.32±2.11）%;PLIF组术后3个月时分别为3.22±0.82分、2.24±0.42分、（23.51±3.41）%,末次随访时分别为1.83±0.49分、1.92±0.28分、（16.40±2.10）%。3组术后3个月和末次随访时的腰痛VAS评分、下肢痛VAS评分和ODI均较术前[OLIF组7.47±1.03分、7.55±1.04分、（70.63±5.46）%;MIDLIF组7.50±0.99分、7.46±1.10分、（69.89±5.55）%;PLIF组7.51±1.01分、7.53±1.11分、（71.05±5.71）%]显著性改善（P<0.05）,3组间同时间点比较均无显著性差异（P>0.05）。OLIF组术后3个月时IDH、IFH、IFA分别为10.47±0.86mm、21.41±2.57mm、210.57±11.34mm2;MIDLIF组分别为9.11±0.79mm、18.70±2.62mm、196.41±13.40mm2;PLIF组分别为9.26±0.91mm、19.37±2.51mm、193.42±12.12mm2。3组患者术后3个月时IDH、IFH、IFA较术前（OLIF组5.86±0.76mm、14.52±2.31mm、135.84±10.41mm2;MIDLIF组5.90±0.69mm、14.43±2.27mm、127.10±10.64mm2;PLIF组5.79±0.81mm、14.39±2.40mm、126.47±10.55mm2）均有显著性改善（P<0.05）,三组间同时点比较均无显著性差异（P>0.05）。3组患者围手术期并发症无统计学差异（P>0.05）。结论：OLIF、MIDLIF、PLIF治疗腰椎融合术后邻椎病均可获得满意的临床疗效,但OLIF手术时间和住院时间更短、术中出血量更少。