重组酶聚合酶扩增技术用于脑脊液中肺炎链球菌检测的价值

目的 探讨重组酶聚合酶扩增(RPA)技术用于脑脊液(CSF)中肺炎链球菌检测的价值。方法 利用RPA技术检测CSF中肺炎链球菌。根据肺炎链球菌LepA基因设计RPA反应引物,收集临床确诊和疑似的52例细菌性脑膜炎患者为研究对象,采集CSF标本并提取DNA,采用RPA技术对临床CSF进行LepA基因扩增检测。结果 52例患者的CSF标本经微生物培养有19例(36.5%)为阳性,阳性标本中有7例检出肺炎链球菌,这7例患者CSF标本的RPA检测结果均为阳性。微生物培养为阴性的33例(63.5%)患者中有7例患者CSF标本的RPA检测结果为阳性。共14例患者CSF标本的RPA检测结果为阳性,从中选取10例患者CSF标本的RPA扩增产物经纯化后,与肺炎链球菌LepA基因目的片段进行核酸序列比对,其比对结果一致。结论 RPA技术可用于肺炎链球菌性脑膜炎病原菌的快速检测。     

基于蛋白质组学对脊柱结核患者外周血浆差异蛋白筛选及功能分析

【摘要】 目的：利用蛋白质组学技术筛选脊柱结核（spinal tuberculosis,STB）患者外周血浆中表达差异的蛋白质,探讨STB致病机制及代谢途径。方法：收集30例STB患者和30例健康志愿者的外周血,取其中3例STB患者（观察组）和3例健康志愿者（对照组）的外周血浆通过蛋白质组学同位素标记相对及绝对定量技术和液相色谱-质谱分析技术鉴定差异蛋白,筛选出表达差异显著（差异倍数>1.2,P<0.05）的蛋白质,并进行基因本体（gene ontology,GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析;然后将30例STB患者和30例健康志愿者的血浆进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR）和酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）验证其差异基因及蛋白。结果：STB患者外周血浆中共筛选出16个与对照组存在显著性差异的蛋白;其中11个蛋白[脂多糖蛋白（lipopolysaccharide-binding protein,LBP）、S100-A8蛋白（protein S100-A8）、S100-A9蛋白（protein S100-A9）、淀粉样蛋白A-2（serum amyloid A-2 protein,SAA2）、富含亮氨酸α-2糖蛋白（leucine-rich alpha-2-glycoprotein,LRG2）、蛋白聚糖4（proteoglycan 4,PRG4）、补体因子Ⅰ（complement factor I,CFI）、α-1-抗胰蛋白酶（alpha-1-antitrypsin,SERPINA1）、组织蛋白酶D（cathepsin D,CTSD）、血浆铜蓝蛋白（ceruloplasmin,CP）和λ免疫球蛋白（lambda-immunoglobulin 4-60,IGLV4-60）]表达上调,5个蛋白[黏着斑蛋白（vinculin,VCL）、3-64D免疫球蛋白（immunoglobulin heavy variable 3-64D,IGHV3-64D）、2D-29免疫球蛋白（immunoglobulin kappa variable 2D-29,IGKV2D-29）、非功能性免疫球蛋白（non-functional immunoglobulin 6D-41,IGKV6D-41）和1-45免疫球蛋白（immunoglobulin heavy variable 1-45,IGHV1-45）]表达下调。LBP、S100-A8蛋白和S100-A9蛋白在STB患者外周血浆的基因和蛋白表达与对照组比较均显著性升高（P＜0.05）,主要参与白介素-17信号通路和自噬信号通路,且在以上信号通路中与炎症、自噬、趋化因子等生物学功能相关。SAA2、LRG2、PRG4、CFI、SERPINA1、CTSD、CP和VCL的基因和蛋白表达与对照组无统计学差异;IGLV4-60、IGHV3-64D、IGKV2D-29、IGKV6D-41和IGHV1-45的基因表达与对照无显著性差异（P＞0.05）,蛋白表达未验证。结论：蛋白质组学可用于STB患者外周血差异蛋白的筛选及STB发病机制的研究,LBP、S100-A8和S100-A9蛋白可能是STB发病相关的重要表达蛋白,主要参与IL-17信号通路和自噬相关信号通路且集中于炎症、自噬、趋化因子等生物学功能。     

circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的 探讨circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH)实验及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA CCND1在HepG2细胞及L02细胞中的表达情况;进一步干扰及过表达circRNA CCND1后,通过qRT-PCR检测circRNA CCND1在HepG2细胞中的表达情况,CCK-8法和EDU法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况。结果 HepG2细胞circRNA CCND1相对表达量较LO2细胞高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组circRNA CCND1相对表达量较Control组和Si-NC组下降(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组和Oe-NC组升高(P <0.05)。各组细胞培养0、24、48、72和96 h后细胞增殖活性比较,经重复测量设计的方差分析,结果：(1)不同时间点细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <...     

S100-A8蛋白在脊柱结核患者外周血中的表达及临床意义

目的：分析S100-A8蛋白在脊柱结核患者外周血中的表达与临床诊断的相关性，评价其作为脊柱结核诊断标志物的价值。方法：收集2018年9月～2021年6月宁夏医科大学总医院脊柱骨科收治的脊柱结核患者100例作为观察组，健康体检者30例作为对照组。观察组男性50例，女性50例，年龄49.5±16.3岁；对照组男性12例，女性18例，年龄53.4±9.7岁。两组各选取3例样本进行蛋白质组学检测并筛选差异蛋白，结合脊柱结核信号通路，确认目标蛋白。选取50例观察组与30例对照组，运用酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定并比较两组血清目标蛋白表达水平。收集观察组临床病历资料，包括：年龄、性别、病程、实验室检查、细菌培养、T-SPOT、抗酸染色、病理学及影像学资料，收集对照组实验室检查并与观察组进行比较；采用T-test分析目标蛋白在观察组各项临床资料之中的表达差异；通过线性回归及双变量斯皮尔曼相关性分析目标蛋白与观察组临床资料的相关性；受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic,ROC）...