脊髓损伤后内源性神经干细胞激活机制的研究进展

正脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种高度致残性疾病,主要造成脊髓轴突的断裂和神经元的死亡[1],目前还没有一种有效的方法可以治愈SCI。在中枢神经系统中发现了有一些具有分化为神经元潜能的内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,ENSCs),利用脊髓中ENSCs来修复SCI具有独特优势,但是成体中ENSCs数     

Notch1信号通路对小鼠触液神经元体外增殖能力的调节作用

【摘要】 目的：探讨Notch1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用。方法：（1）取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织，消化后提取细胞，经流式细胞分选得到触液神经元（cerebrospinal fluid-contacting neurons, CSF-cNs）。将CSF-cNs悬浮培养并传代。（2）将CSF-cNs传至第2代，培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测CSF-cNs 光密度（optical density，OD）值，培养5d时应用免疫荧光检测CSF-cNs特异性标志物多囊肾病2型1通道蛋白（polycystic kidney disease 2 like 1，PKD2L1）与神经干细胞标志物Nestin、Sox2及增殖标志物Ki67共表达情况。（3）将第3代CSF-cNs分为4组：对照组、Jagged-1组、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）组、γ-分泌酶抑制剂（3，5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯[（3，5-difluorophenylacetyl）-L-alanyl-L-2-phenylglycine tert-butyl ester，DAPT]组。对照组采用无血清神经培养液培养；Jagged-1组采用无血清神经培养液+5μmol/L Jagged-1培养；DMSO组采用无血清神经培养液+0.05% DMSO培养；DAPT组采用无血清神经培养液+50μmol/L DAPT培养。培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测各组CSF-cNs的OD值；培养5d时应用Western Blot检测各组CSF-cNs PKD2L1、Notch1、Notch受体胞内段（NICD）、Hes1、β-actin蛋白表达情况，应用免疫荧光法检测各组CSF-cNs增殖标志物Ki67蛋白荧光强度（arbitrary unit，A.U.）值。结果：（1）提取的细胞经流式细胞分选后得到的CSF-cNs纯度为（94.5±2.03）%，存活率为（93.64±2.35）%。CSF-cNs可连续传代并形成神经球。（2）第2代CSF-cNs培养0h、24h、48h、72h及96h时的OD值具有统计学差异（P<0.05），96h与120h的OD值无统计学差异（P=0.44）。CSF-cNs中PKD2L1可与Nestin、Sox2或Ki67共表达。（3）第3代CSF-CNS分组处理后各组细胞PKD2L1蛋白表达量无统计学差异（P=0.27）。Jagged-1组细胞Notch1、NICD、Hes1蛋白表达量均较对照组升高（P＜0.01）；72h、96h、120h的OD值较对照组均显著性升高（P72h=0.03，P96h=0.02，P120h=0.01）；Ki67蛋白A.U.值较对照组显著性升高（P＜0.01）。DAPT组细胞Notch1、NICD、Hes1蛋白表达量较对照组均显著性减低（P＜0.01）；72h、96h、120h的OD值与对照组比较均显著性降低（P<0.01）；Ki67蛋白A.U.值较对照组显著性降低（P<0.01）。DMSO组各项指标与对照组比较均无统计学差异（P>0.05）。结论：CSF-cNs在体外具有神经干细胞潜能；激活Notch1信号通路可增强CSF-cNs的增殖能力，抑制Notch1信号通路可降低CSF-cNs的增殖能力。