骨髓基质贴壁细胞培养的动态观察

正常和受照射豚鼠、C_(57)小鼠骨髓基质细胞体外培养观察表明:骨髓基质细胞间存在着相互作用,它们可通过细胞间短距离进行调节。并且,骨髓基质细胞中存在具有转化为脂肪细胞潜能的抗辐射亚型。     

沉默VEGF对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R侵袭迁移的影响

目的 探讨沉默血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R迁移和侵袭能力的影响。方法 制备含VEGF-shRNA的慢病毒载体（VEGF-LV1、VEGF-LV2、VEGF-LV3）和对照shRNA重组慢病毒（VEGF-NC）,并转染人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R,建立稳定沉默VEGF细胞（CNE-LV1、CNE-LV2和CNE-LV3）和阴性对照细胞（CNE-NC）。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞转染效果,划痕实验和Transwell小室实验检测VEGF沉默后细胞的迁移和侵袭能力。结果 成功构建VEGF-shRNA重组慢病毒并建立了稳定沉默VEGF细胞CNE-LV3。划痕实验和Transwell小室迁移实验显示,与空白对照组和CNE-NC组相比,CNE-LV3组细胞迁移率明显降低［（50.17±1.76）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001;（50.63±1.52）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001］,穿膜细胞数亦明显下降［（95.3±3.8） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001;（94.3±4.0） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001］;Transwell小室侵袭实验结果亦显示,CNE-LV3组细胞穿膜细胞数较空白对照组和CNE-NC组明显下降［（46.3±2.1） 个 vs（105.3±1.5） 个,P＜1.001;（46.3±2.1） 个 vs （93.3±2.5） 个,P＜0.001］。结论 沉默VEGF表达可抑制人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的迁移和侵袭能力。     

shRNA沉默Annxin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨shRNA沉默Annxin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 采用FuGENE HD将Annexin A2 shRNA转染放射抗拒的鼻咽癌CNE2（R743）细胞,qRT-PCR验证转染细胞中Annxin A2基因的表达,细胞划痕实验和Transwell实验观察下调Annxin A2基因表达及联合照射对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2（MMP2）蛋白的表达。结果 转染组细胞Annexin A2 基因的mRNA相对表达量为（0.25±0.17）,较对照组的（1±0.00）和转染对照组的（0.96±0.06）明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。细胞划痕实验显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2（R743）细胞的迁移能力（P<0.05）。Transwell实验结果显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2（R743）细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）。Western blot结果表明,下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导的MMP2蛋白的表达上调（P<0.05）。结论 下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导放射抗拒的鼻咽癌CNE2（R743）细胞的迁移和侵袭能力,可能与MMP2蛋白表达下调相关。     

人结肠癌放射抗拒性细胞株的建立

目的应用连续照射的方法建立人结肠癌放射抗拒细胞株SW480-R,为研究人结肠癌放射抗拒的机制提供模型。方法用2Gv剂量的x射线照射人结肠癌SW480细胞株,每天1次,每周5d,分别照射不同周期后,按照细胞存活率筛选出放射抗拒细胞株SW480．R,并检测细胞的倍增时间。以细胞克隆形成实验检测细胞的放射敏感性,MTT法检测照射后不同时间点的细胞存活分数,流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布,并分别与亲代结肠癌细胞株进行比较。结果经2Gy照射3周后细胞仍有存活,可作为放射抗拒细胞株的模型。SW480．R细胞株的倍增时间明显长于亲代SW480细胞株（脚．05）,SW480-R细胞株的放射抗拒l生增加,照射后12h的细胞存活率较SW480细胞株显著增高（98．40％US92．81％,P〈0．001）。流式细胞仪检测细胞周期显示,SW480一R细胞株的细胞周期分布与SW480细胞株不同,G2／M期明显增高。结论人结肠癌细胞株SW480每天经x射线照射2Gy,连续照射3周后可以得到具有放射抗拒细胞株SW480．R。此细胞株具有稳定的放射抗拒性,且与亲代细胞株有不同的细胞周期分布。     

Interactions between radioresistant T cells from plasmacytoma-bearing mice and radiosensitive T cells from normal mice leading to suppression

Spleens from BALB/c mice bearing the plasmacytoma SPQC 11 contain a population of T cells capable of suppressing the production of antibodies when cultured with normal BALB/c splenocytes, but not with splenocytes from nude BALB/c mice. Inhibition was characteristically the most effective at low suppressor cell numbers using unirradiated T cells. Maximum suppression occurred when a radiosensitive population of T cells from normal mice interacted with a population of radioresistant T cells from plasmacytoma-bearing animals. Accurate characterization of the suppressor T cell activity required testing over a wide range of suppressor/indicator cell ratios. Suppressor activity was eliminated by treatment with anti-Thy 1.2 plus complement, was radioresistant and present over a full range of doses when irradiated cells were used.     

气血康口服液抗辐射的实验研究

采用内源性脾集落形成法，骨髓有核细胞计数及脾脏称重法观察了气血康口服液对辐射小鼠造血功能的影响。研究结果表明，经气血康处理的小鼠ＣＦＵ－Ｓ、骨髓有核细胞数及脾重等项指标均明显明显高于阴性对照组和阳性对照组，提示气血康口服液在辐射损伤紧急状态下，不仅可促进髓内造血细胞生成，而且对动物体内髓外造血也有显著促进作用。其抗辐射的确切机理有待于进一步研究。     

放射抗拒Lewis肺癌细胞系的建立

目的 通过X射线反复照射体外培养的Lewis肺癌细胞系(LLC),建立其放射抗拒细胞系(R-LLC),并比较两种细胞系间Survivin蛋白的表达及分泌细胞因子水平的差异。方法 应用6MV X射线反复照射Lewis肺癌细胞系,5 Gy/次,共6次,30 Gy。采用CCK-8实验及克隆形成实验测定两种细胞系的放射敏感性;Western blot法检测两种细胞系Survivin蛋白表达的差异;ELISA法检测两种细胞系培养液上清细胞因子TNF-α、IL-12的浓度。结果 R-LLC及LLC细胞系的平均致死剂量D₀分别是(1.397±0.128)和(1.053±0.214)Gy,外推值N分别是2.680±1.179和4.149±0.785,D_q值分别为1.038和1.988 Gy,SF₂值分别为0.353±0.092和0.682±0.092,显示了明显的辐射抗性;Western blot结果显示,R-LLC细胞株的Survivin蛋白表达水平较LLC细胞株升高,差异有统计学意义(t=15.310,P<0.05);ELISA结果显示,R-LLC细胞上清液TNF-ɑ和IL-12浓度较LLC细胞明显升高,差异有统计学意义(t=2.867和3.014,P<0.05)。结论 反复照射使肿瘤细胞获得了辐射抗性,同时又促进了Lewis肺癌细胞Survivin蛋白及细胞因子的表达,为放射增敏及肿瘤免疫相关的研究提供依据。     

抑制USP9x表达增强食管癌Ec9706-R细胞的放射敏感性

背景与目的：泛素特异性蛋白酶9x（ubiquitin-specific protease 9x,USP9x）与多种肿瘤的发生、发展以及肿瘤细胞的放射抗拒相关。研究发现,USP9x的表达与食管鳞状细胞癌的浸润深度和淋巴结转移相关,但其食管癌细胞放射抗拒作用尚未见报道。探究USP9x对放射抗拒食管癌Ec9706-R细胞放射敏感性的作用及其机制。方法：首先通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测放射线照射后Ec9706-R细胞及其亲本细胞Ec-9706中USP9x和抗髓样细胞白血病-1（myeloid cell leukemia-1,Mcl-1）mRNA表达和蛋白水平。然后将Ec9706-R细胞随机分成3组：放射（irradiation,IR）组、IR+对照siRNA组（IR+si-NC组,转染Control siRNA）和IR+USP9x siRNA组（IR+si-USP9x组,转染USP9x siRNA）,各组细胞均使用一定量的6 MV-X射线照射。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测不同剂量（0、2、4、6和8 Gy）6 MV-X射线照射下各组细胞的活力。Transwell、流式细胞术、RTFQ-PCR和Western blot分别检测3组细胞在6 Gy照射下的细胞迁移、凋亡、Mcl-1 mRNA表达和蛋白水平以及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和DNA损伤修复相关基因核苷酸切除修复交叉互补基因1（excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1）蛋白水平。结果：放射后Ec9706-R和Ec-9706细胞中USP9x和Mcl-1 mRNA表达和蛋白水平均增加,Ec9706-R细胞尤为显著（P<0.05）。与IR组相比,IR+si-USP9x组中细胞活力、迁移细胞数目、PCNA、ERCC1和Mcl-1的表达均降低,细胞凋亡增加（P<0.05）。但是与IR组相比,IR+si-NC组中上述指标均无显著变化（P>0.05）。结论：抑制USP9x表达能够增强放射抗拒食管癌Ec9706-R细胞的放射敏感性,这可能是通过下调Mcl-1的表达发挥作用的。