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1.
腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2基因修复兔桡骨缺损   总被引:20,自引:4,他引:16  
目的 评价腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-hBMP-2)基因对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的诱导成骨活性及修复长骨干骨缺损的效果。方法 (1)抽取兔骨髓行BMSCs培养,经Adv-hBMP-2转染后分别行免疫沉淀加Western印迹法和碱性磷酸酶(ALP)检测及von Kossa染色,并行裸鼠肌内诱导成骨试验。(2)修复兔桡骨缺损:15只兔30侧、1.5cm的骨缺损分为Adv-hBMP-2转染BMSCS加珊瑚及胶原载体组、β半乳糖苷酶(Adv-βgal)转染BMSCs加载体组、未转染BMSCs加载体组、载体组和未治疗组,术后行X线、组织学检查。结果 (1)Adv-hBMP-2组BMSCs表达hBMP-2,其ALP活性升高,并有钙结节形成,裸鼠肌内注射后有异位成骨。(2)在兔桡骨缺损处,Adv-hBMP-2转染组有明显骨痂形成,5个组的愈合率分别为4/5、2/5、2/5、0/5、0/5。结论 Adv-hBMP-2基因转染的BMSCs是修复骨缺损的好方法。  相似文献
2.
目的评价腺病毒介导p53基因(Adp53)转染对人胃癌细胞的凋亡效应和放射增敏作用。方法以重组腺病毒介导p53基因感染4种不同p53状况的人胃癌细胞,用免疫组织化学法和Western blot法检测P53蛋白在胃癌细胞中的表达;用细胞集落形成法检测细胞存活率;用TUNEL法检测细胞凋亡。胃癌细胞感染Adp53后照射4Gy,用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡;胃癌细胞种植肿瘤内注射Adp53后照射6Gy,以肿瘤相对体积增长曲线观察肿瘤抑制情况。结果1:100效靶比(MOI)Adp53产生细胞高转染率,以及p53基因在4种胃癌细胞中均高表达,并产生G2/M期阻滞、凋亡增加和细胞增殖抑制。如果以凋亡评价放射效应,Adp53转染对4Gy照射4种细胞的凋亡率比值为:W细胞3.0,M细胞3.6,neo细胞2.2,823细胞2.5。体内实验结果显示,Adp53对w细胞肿瘤6Gy照射的抑瘤率比值为1.41,而对M细胞肿瘤为1.91。结论腺病毒介导p53基因转染产生细胞凋亡并提高人胃癌细胞的放射敏感性,这种作用不依赖于细胞内在的p53状况。  相似文献
3.
为研究p16和p53基因的联合应用对胆管癌细胞的作用,将重组体腺病毒p16、p53、p16联合p53转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16、p53基因的表达,细胞的生长抑制及机制进行了分析。RT-PCR显示在胆管癌QBC939细胞系中p16呈低表达,p53不表达,重组体腺病毒能介导p16和p53等外源基因在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,两者联合应用能明显抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数证实其能诱导,QBC939细胞发生明显半调并导致其发生G1期阻滞,本研究显示p16及p53基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用,两者联合应用具有协同作用。  相似文献
4.
重组腺病毒Ad-huVEGF121的制备   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的:构建能够用于骨缺血研究的能表达huVEGF121的重组腺病毒载体。方法:将huVEGF121克隆至穿梭质粒,线性化后转染含骨架质粒的BJ5183菌,构建重组腺病毒质粒。酶切及PCR法鉴定;将其线性化后转染293细胞,通过观察绿色荧光监测病毒产生,免疫组化检测VEGF121表达。结果:成功的将hu—VEGF121克隆至穿梭质粒pTrack—CMV,正确构建了重组腺病毒质粒,感染293细胞得到大量病毒。结论:成功构建了huVEGF121重组腺病毒,为缺血性骨病的进一步研究奠定了基础。  相似文献
5.
目的:观察腺病毒介导白介素-12基因治疗联合放射治疗协同抗小鼠肝癌作用。方法:荷肝癌动物模型,肿瘤局部γ射线照射后,瘤内注射AdmIL-12腺病毒,取组织标本进行ELISA及CTL活性检测,免疫组化染色等分析。结果:联合治疗小鼠肿瘤生长受到抑制,体积明显缩小,并可使50%的小鼠肿瘤完全染色等分析。结果:联合治疗小鼠肿瘤生长受到抑制,体积明显缩小,并可使50%的小鼠肿瘤完全消退,疗效显著优于单纯照射组和瘤内注射AdmIL-12及其其他对照组(P<0.01)。而单纯瘤内注射AdmIL-12组的疗效并不优于单纯照射组(P>0.05)。联合治疗组小鼠血清和脾细胞的培养上清中可见INF-γ水平的显著提高,并诱导产生特异性的CTL活性。免疫组化结果显示,联合治疗组肿瘤组织中见有大量CD4^ 、CD8^ 阳性淋巴细胞的浸润。结论:腺病毒介绍导白介素12基因治疗与放射治疗的联合具有协同抗肿瘤作用,并诱导产生特异性抗肿瘤免疫反应。  相似文献
6.
菊蓝感冒冲剂抗病毒作用实验研究   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的:研究菊蓝感冒冲剂对流感病毒甲型、乙型和腺病毒3 型的抑制作用。方法:用鸡胚孵育法,进行菊蓝感冒冲剂对流感甲型、乙型病毒的直接杀伤及抑制病毒繁殖作用,用传代Hela 细胞的细胞培养法,研究菊蓝感冒冲剂对腺病毒3型的直接杀伤及抑制病毒繁殖作用。结果:菊蓝感冒冲剂对流感甲型、乙型病毒的直接杀伤及抑制病毒繁殖均有明显作用( P<0.001),对腺病毒3 型的繁殖有抑制作用,而对腺病毒3 型的直接杀伤作用无效。结论:菊蓝感冒冲剂具有一定的体外抗流感甲型、乙型病毒和腺病毒3 型的作用。  相似文献
7.
目的:评价携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的重组腺病毒对大鼠肝纤维化模型的治疗作用。方法:DMN法建立W istar大鼠肝纤维化模型后,将8.6×109pfu的Ad-HGF经尾静脉注射入大鼠体内,对照组注射同剂量的Ad-GFP。第40天心脏采血,检测血清GPT、GOT、TP和TB il,并取肝组织做HE染色,观察两组大鼠肝脏的病理形态。结果:治疗组部分动物肝功能有所改善,对照组不明显。与对照组相比,治疗组大鼠的肝组织损伤程度较轻,汇管区看不到明显的纤维增生,并可见双核肝细胞和分裂相细胞。结论:腺病毒介导的HGF基因可能有部分治疗大鼠肝纤维化的作用。  相似文献
8.
目的 研究腺病毒介导的脑源性神经营养因子(BDNF)基因转移对脑损伤后细胞凋亡的影响。方法 将重组腺病毒载体4μl注入承受单侧大脑皮质重锤打击伤的海马区,对照组注射病毒缓冲液。伤后3h,1,3,7,14d利用免疫组化单标和(或)双档染色、原位杂交-免疫组化双标染色、DNA末端原位标记以及流式细胞仪等方法,检测伤侧大脑皮质、海马区BDNF及凋亡相关信号表达的改变。结果 与对照组相比,注射病毒载体组动物术后3,7d海马CA1、CA3区BDNF神经元显著增多,而凋亡细胞显著减少(P<0.01);表达BDNF的神经元较少并同时表达凋亡相关信号。结论 腺病毒介导的BDNF基因转移对海马神经元具有保护作用。  相似文献
9.
Purpose Genes encoding for intracellular enzymes or transmembrane proteins are suitable as reporters, but may differ in terms of applicability for cardiac imaging. The aim of this study was to compare the human sodium iodide symporter gene (hNIS) with the herpes simplex virus type 1 thymidine kinase gene (HSV1-tk) as the reporter gene in non-invasive imaging of cardiac transgene expression with positron emission tomography (PET).Methods Equal doses of adenoviral vectors encoding for hNIS, wild-type HSV1-tk, mutant HSV1-sr39tk or LacZ as the control gene were directly injected into the myocardium of 34 animals. Two days later, dynamic PET was performed with a clinical scanner, using reporter probes specific for the respective reporter gene. Imaging with 13N-ammonia was also performed to identify cardiac regions of interest.Results Kinetics differed significantly: 124I as the probe for hNIS showed rapid early uptake, remaining stable over time. Maximal myocardial concentration was 3.61±1.15%. The nucleoside 18F-FHBG, as the specific probe for HSV1-sr39tk, showed increasing uptake over time, but maximal accumulation was significantly lower (1.45±0.54%, P=0.0009). 124I-FIAU, as the specific probe for wild-type HSV1-tk, showed early uptake with subsequent washout. Maximal accumulation was lowest (0.63±0.23%, P<0.0001). Post-mortem analysis by autoradiography and gamma counting confirmed the in vivo data.Conclusion Reporter genes encoding for transporter proteins such as hNIS are an attractive alternative to overexpression of intracellular enzymes for cardiac gene product imaging. hNIS yielded higher signal intensity and imaging contrast for PET than did HSV1-tk and HSV1-sr39tk. Therefore, this approach may be preferable for the future monitoring of cardiac gene- or cell-based therapy.  相似文献
10.
骨形成蛋白2重组腺病毒的构建及异位诱导成骨的研究   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的 构建骨形成蛋白2(BMP2)重组腺病毒,探讨其诱导成骨的作用。方法 将BMP2基因克隆到转移载体pAdTrack-CMV中,在细菌BJ5183中与pAdEasy腺病毒基因组进行同源重组,得到BMP2重组腺病毒基因组,通过转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒。然后,用其进行裸鼠异位诱导成骨。结果经过PCR及酶切鉴定,证明获得了BMP2转移质粒pAdTrack-BMP2和BMP2腺病毒基因组,并包装出重组腺病毒。组织学观察显示,2周时局部大量纤维样细胞聚集,软骨细胞分化;5周时骨小梁形成,软骨细胞已退化。结论 BMP2组腺病毒的构建及其异位诱导成骨的功能为其在BMP2基因治疗中的应用奠定了良好的基础。  相似文献
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