新生大鼠原代小胶质细胞分离培养方法的改良

目的研究改良体外小胶质细胞分离培养的方法及效果。传统法存在动物用量大、成本高且细胞培养时间长等局限。方法结合消化试剂组合和手摇震荡法培养分离小胶质细胞;同时采用Iba-1免疫荧光法进行细胞鉴定和纯度分析,台盼蓝染料法进行活力检测以及脂多糖刺激比较不同状态的小胶质细胞。结果改良法可在4 d内稳定获得小胶质细胞 1. 0×10~6个/60 mm培养皿,纯度≥98%,活力 98%,较传统法在动物用量、总成本和培养时间分别减少了2、3. 2、1. 5倍。结论改良法可减少动物用量、降低成本,缩短细胞培养时间;为研究小胶质细胞的生物学功能和中枢神经系统疾病机制建立了一种稳定、简便、高效的细胞模型。     

甲状旁腺激素对大鼠牵张成骨过程中O NC、OPN、C-FOS、COL1、VEGF、RUNX2、ALP基因表达的影响

目的：探讨甲状旁腺激素（PTH）对大鼠牵张成骨（DO）过程中ONC、OPN、C-FOS、COL1、VEGF、RUNX2、ALP基因表达的影响。方法30只雄性大鼠制备大鼠下颌骨DO模型。随机分5组，每组6只。第1组（只有牵张无PTH），术后8周取材，应用HE染色及微CT检测，以确定成骨情况。第2组（有牵张无PTH），第3组（有牵张有PTH），第4组（无牵张有PTH），第5组（对照组：无牵张无PTH）。2、3、4组及对照组术后1周取材，RT-PCR测定ONC、OPN、C-FOS、COL1、VEGF、RUNX2、ALP基因的表达。结果第1组，新骨形成，骨质充满牵张区，骨质连续，大鼠建模成功。RT-PCR检测结果显示，2、3、4组与对照组比较，OPN、COL1、RUNX2、ALP基因表达有明显提高（P＜0．05），其中第3组最为明显。ONC、C-FOS、VEGF基因2、3、4组与对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 PTH在 DO 过程中，间歇性给以 PTH的作用只有在牵张期发挥作用，其对 OPN、COL1、RUNX2、ALP基因表达能够获得理想的协同作用。     

狭窄法动物深静脉血栓模型方法学及其应用研究进展

动物血栓模型是人类研究血栓性疾病及开发临床药物的重要工具,狭窄法动物血栓模型是在结扎法动物血栓模型的基础上改进形成的,因其符合临床患者的发病特点,故得到广泛使用。本文就其制作方法、机制、评价及其应用研究进展作一个综述,为血栓性疾病基础与临床研究提供较实用的方法学依据。     

凉血通瘀方干预高血压大鼠急性脑出血模型对脑组织中差异miRNA表达的影响＊

目的 研究凉血通瘀方对高血压大鼠急性脑出血模型脑组织miRNA表达的影响，对差异表达的miRNA靶基因进行分析，探索凉血通瘀方可能的药效机制。方法 将自发性高血压大鼠随机分成对照组（B）和实验组（C）。适应性饲养一周后，C组灌胃凉血通瘀方，B组灌胃等体积生理盐水，连续5天，每天1次。构建脑出血模型后收集脑组织，借助全转录组测序技术获得miRNA表达量，与miRBase数据库比对获取已知miRNA，使用miRDeep2预测新miRNA。差异分析软件为DESeq2，筛选阈值为|log₂FC| ≥1 并且P <0.05。对显著差异表达的miRNA进行靶基因预测，对靶基因进行GO功能、KEGG通路富集和PPI网络分析。结果 实验组和对照组对比，共发现21个显著差异表达的miRNA，上调有9个，下调有12个，共预测得到1243个有统计学意义的靶基因。GO富集分析发现，生物过程中突触囊泡分泌的调节、神经递质分泌的调节和神经递质运输的调节占前三位，神经元投射终点、全膜、质膜区域和细胞投射则是主要的细胞成分。分子功能分别为小GTPase绑定、底物特异性跨膜转运蛋白活性和离子跨膜转运体活性。通路分析结果显示，靶基因在癌证通路、pI3K-Akt信号通路、人类乳头瘤病毒感染、神经活性配体-受体相互作用和MAPK通路等分布广泛。采用STRING网站和Cytoscape软件，根据MCC算法筛选出ADRA2C、CASR、CCL28、CCR1、DRD2、GNAT3、GRM2、DYNC1LI1、GABBR1、GNAI1等核心靶基因。结论 凉血通瘀方对脑出血急性期鼠脑组织内miRNA的表达有重要影响；显著差异表达miRNAs可能通过靶向核心基因调控凉血通瘀方干预急性脑出血的病理过程及预后。     

补阳还五汤对特发性肺纤维化模型大鼠肺组织内皮间质转化的影响及其机制研究

目的:探讨补阳还五汤对特发性肺纤维化(IPF)模型大鼠肺组织内皮间质转化(EndMT)的影响,并探讨其可能机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组[0.405 mg/(kg·d)]和补阳还五汤低、中、高剂量组[6.435、12.87、25.74g/(kg·d),以生药总质量计],每组8只。除正常组外,其余各组大鼠均于气管内注射博来霉素以复制IPF模型。自造模后第2天起,正常组和模型组大鼠均灌胃水[10 m L/(kg·d)],各给药组大鼠灌胃相应药物,每日1次,连续28 d。末次给药24 h后,采用免疫组化法检测大鼠肺组织中内皮细胞标志物[血小板内皮细胞黏附分子1、血管内皮细胞钙黏蛋白]和间质细胞标志物[α-平滑肌肌动蛋白、成纤维细胞特异性蛋白1]的表达情况,采用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织中Notch4、DLL4的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织中内皮细胞标志物的表达水平均显著降低,间质细胞标志物以及Notch4、DLL4的表达水平均显著升高(P<0.01)。各给药组大鼠肺组织中内皮细胞标志物的表达水平均显著高于模型组,补阳还五汤低剂量组上述指标显著低于地塞米松组;间质细胞标志物以及Notch4、DLL4的表达水平均显著低于模型组,补阳还五汤低剂量组上述指标显著高于地塞米松组(P<0.05或P<0.01)。结论:补阳还五汤可通过干预EndMT来减轻大鼠的IPF,其机制可能与抑制DLL4/Notch4信号通路有关。     

中药的雄激素样作用研究进展

拟/抗激素样作用是很多中药疗效的机制基础,以往的研究中大多关注了植物的拟雌激素样作用,而对中药的雄激素样作用研究较少。对具有拟/抗雄激素样作用的中药及其方剂在临床上的应用情况以及药物的雄激素样作用筛选方法(肾阳虚模型,Hershberger法,体外细胞模型)进行概述。     

静磁场对预防自发性高血压(SHR)大鼠中风的影响

目的研究静磁场对SHR大鼠中风的影响。方法本研究起止年月为2014年4月3日~2014年6月28日,实验地点为浙江省中医药研究院基础实验研究所。将20只SHR大鼠适应性喂养14d后,给予1%氯化钠盐水高渗饮水,用以加速血压升高,随机分成两组,每组10只,雌雄各半。其中一组在饲养笼底部放入和也牌磁健康床垫磁板模型作为磁板组,另一组则不放磁板作模型组,另设Wistar大鼠正常组做对照。每周固定时点测量血压和体重一次。从置入磁板开始,实验周期为60d。结果模型组的10只大鼠中死亡2只,而磁板组和正常组则无大鼠死亡;磁板组和模型组大鼠的脑重量与脑系数都大于正常组,但磁板组大鼠的脑重量和脑系数与模型组相比较都相对较小(P0.05);雄性SHR大鼠血压明显下降,与模型组比较有显著性差异(P0.05),但对雌性大鼠血压没有明显影响;磁板对雄性SHR大鼠血流变高切和血浆粘度有明显降低作用,与模型组比较有显著差异(P0.05),但对雌性SHR大鼠作用不显著。病理检查显示,磁板组大鼠1只出现了脑水肿现象,而模型组有3只大鼠出现了脑出血现象,1只有脑水肿现象,其中2只为实验期间中风死亡大鼠。结论可见使用磁板可降低SHR大鼠中风死亡率,对SHR大鼠脑重量和脑系数有一定降低作用,对雄性SHR大鼠血压、血流变高切和血浆粘度有明显降低作用,说明磁板(静磁场)可能对高血压引起中风及脑水肿有一定的抑制作用。     

湖北省贫困山区老年高血压患病因素结构方程模型

目的通过结构方程模型探讨湖北省贫困山区60～69岁高血压患病因素。方法采用整群分层抽样方法选取湖北省恩施土家族苗族自治州60～69岁老年人804人,进行人口学特征和体力活动资料调查和体质测试,采用结构方程模型对外观变量进行分析。结果修改后的结构方程中潜在变量对高血压患病率影响大小依次为社会特征、人口学特征、体质和身体活动,外观变量中退休前职业、教育程度、城乡、体重指数、腰臀比的系数较高。结论影响湖北省贫困山区老年高血压患病的最主要因素是社会特征,其次是人口学特征、体质特征和身体活动,脑力劳动者高血压患病率高于体力劳动者,乡村人口高血压患病率低于城镇人口,向心性肥胖是高血压的危险因素。     

中国老年人医疗支出影响因素——基于安德森模型

目的探讨中国老年人医疗支出的影响因素。方法基于安德森医疗服务利用行为模型框架,利用中国健康与养老追踪调查2015年数据,建立影响中国老年人医疗卫生支出的Tobit模型。结果安德森模型一定程度上解释了影响中国老年人医疗支出的原因。老年人的心理健康情况与其医疗支出显著相关,社会支持在老年人生活中具有不可比拟的作用。社会支持越高,心理越健康积极,老年人患病的机会越少,从而在医疗方面开支越少。结论国家应完善社会保障建设,通过构建积极的老龄化社会缓解老龄化带来的问题。     

大鼠皮肤类过敏试验的组织学机制

目的探索大鼠皮肤类过敏试验的组织学机制。方法大鼠背部脊柱两侧分别皮内注射C48/80、吐温-80、碘海醇注射液、紫杉醇注射液、注射用血塞通(冻干)、喜炎平注射液后,立即尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液,15 min后麻醉处死,剪取背部皮肤,测量蓝斑直径,取蓝斑皮肤观察肥大细胞形态,计算脱颗粒率。再采用Pearson检验进行相关性分析。结果皮内注射C48/80、吐温-80、碘海醇注射液、紫杉醇注射液、注射用血塞通(冻干)后,蓝斑直径、肥大细胞脱颗粒率与药物质量浓度(体积分数)均呈正相关,两者之间亦然,但肥大细胞数均无明显变化[除0.8、1.6 mg/mL注射用血塞通(冻干)外];皮内注射喜炎平注射液后,蓝斑直径、肥大细胞数、脱颗粒率均无明显变化(除质量浓度5 mg/mL时蓝斑直径外)。结论大鼠皮肤类过敏试验组织学机制是类过敏阳性物质致皮肤肥大细胞脱颗粒,其脱颗粒率与阳性物质浓度、皮肤蓝斑直径呈高度正相关,可作为药物类过敏性及其反应强度评判的一项补充指标。