脂质纳米粒-mRNA递送系统及其在嵌合抗原受体T细胞治疗中的应用

尽管嵌合抗原受体（CAR）T细胞治疗在血液系统恶性肿瘤患者中取得了显著的临床疗效，但需要进一步优化。脂质纳米粒（LNP）-信使核糖核酸（mRNA）递送系统作为一种非病毒性基因载体运用于CAR-T细胞治疗研究中，一方面通过LNP将密封蛋白-6 mRNA靶向递送至抗原提呈细胞，从而实现抗原提呈细胞辅助性增强密封蛋白-6靶向的CAR-T细胞的功能，以进一步诱导对实体瘤的清除；另一方面，通过LNP将成纤维细胞激活蛋白（FAP）CARmRNA靶向递送至T细胞，实现体内FAP靶向的CAR-T细胞的制备，以通过阻断心脏纤维化过程达到治疗急性心肌损伤的目的。在CAR-T细胞研究和治疗中，LNP-mRNA递送系统具有不与细胞基因组整合、价格便宜、毒副作用小及可修饰等优点，亦存在蛋白瞬时表达导致调控细胞功能的持久性不足及制备等方面的技术局限性。本文综述了LNP-mRNA递送系统及其在CAR-T细胞治疗中的应用研究。     

PSMA-CAR-CIK转基因细胞体外杀伤三种前列腺癌细胞株效率的研究北大核心

目的:本研究通过检测前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)-肿瘤特异性嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)转基因细胞杀伤三种前列腺癌细胞株的效率,鉴定其用于后期治疗前列腺癌的可行性。方法:通过已经构建的二代PSMA-CAR慢病毒表达载体转染CIK细胞,构建PSMA-CAR-CIK转基因细胞;通过CCK8法检测CIK细胞及PSMA-CAR-CIK转基因细胞杀伤三种前列腺癌细胞株PC3、LNCaP、DU145的效率及效靶比。结果:转基因PSMA-CAR-CIK细胞构建成功;3 h~3.5 h为检测效应细胞对靶细胞细胞毒活性时与CCK8试剂孵育的最佳时间;两种效应细胞均在效靶比为10∶1、15∶1、20∶1时,杀伤率逐步增高,无统计学意义(P>0.05),但与其它组相比差异显著(P<0.05)。结论:两种效应细胞对于前列腺癌细胞的杀伤,只要效靶比达到10∶1的比例,就能起到一个较好的杀瘤效果,并且随着效应细胞的增加,其抗肿瘤能力逐步加强;转基因PSMA-CAR-CIK细胞的构建为CAR技术治疗前列腺癌的临床应用奠定了基础。     

纳米技术在嵌合抗原受体T细胞肿瘤免疫治疗中的应用进展

肿瘤免疫治疗主要通过解除免疫抑制作用与增强免疫应答反应来实现对其有效治疗.纳米技术能够提高免疫刺激分子的聚集度与作用力,在完成局部免疫调节的基础上有效治疗癌症.嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)是肿瘤免疫治疗中的一种有力手段,能够对肿瘤患者的T细胞进行转化处理,令其成为可表达嵌合肿瘤细胞表面抗原受体的CAR-T细胞,随后将相应的CAR-T细胞回输至肿瘤患者体内,并通过特异性识别、杀伤肿瘤细胞的方式,有效杀灭肿瘤病毒.将纳米技术应用至CAR-T肿瘤免疫治疗中,有望提高肿瘤免疫治疗的疗效与安全性.本文就纳米技术在CAR-T肿瘤免疫治疗中的应用进展进行综述.     

不同修复方法修复口腔颌面部肿瘤术后缺损的效果比较

目的探讨不同修复方法修复口腔颌面部肿瘤术后缺损的效果。方法选取口腔颌面部肿瘤根治术后缺损患者89例,根据最终选取的修复方案分为A组(n=49)和B组(n=40),A组给予股前外侧嵌合皮瓣修复,B组给予串联皮瓣修复。观察2组手术情况,采用华盛顿大学头颈肿瘤生活质量量表(UW-QOL)对患者术后生活质量进行评价,检测唾液中唾液酸(SA)及癌胚抗原(CEA)水平。结果A组手术时间、胃管拔除时间和经口进食时间分别为(6.30±1.19)h、(19.77±2.81)d和(20.32±2.19)d,明显少于B组(P<0.05);但A组皮瓣制作时间为(1.20±0.28)h,明显多于B组(P<0.05)。A组术后6个月UW-QOL量表中外观、吞咽、咀嚼、言语、肩功能、情绪评分分别为(63.29±4.54)分、(54.93±5.03)分、(47.12±6.02)分、(64.49±4.33)分、(82.20±5.43)分和(75.50±7.20)分,明显高于B组(P<0.05)。A组和B组术后6个月UW-QOL量表中疼痛、活动、娱乐、味觉、唾液及焦虑评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组修复后1个月唾液中SA和CEA分别为(7.29±1.33)ng/dl和(50.04±16.62)ng/ml,明显低于B组(P<0.05)。A组血管危险发生率为2.04%,明显低于B组(P<0.05)。A组和B组感染、皮瓣坏死发生率差异比较无统计学意义(P>0.05)。结论相比较串联皮瓣修复,股前外侧嵌合皮瓣修复口腔颌面部肿瘤根治术后缺损有较好的效果,可以改善患者生活质量。     

CD20 和CD19 双靶点CAR-T细胞对B淋巴细胞肿瘤的杀伤作用

目的：设计同时靶向B淋巴细胞表面CD20 和CD19 两个抗原蛋白的双特异嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）并制备BiCAR-T 细胞，检测其对B淋巴细胞肿瘤细胞的杀伤作用以及对免疫缺陷B-NSG 小鼠白血病模型的治疗效果。方法：构建基于鼠源CD19 和人源化CD20 scFv 的双靶点CAR分子，将CAR基因装载于慢病毒载体中，在293T细胞中包装慢病毒，感染健康人T 细胞制备BiCAR-T 细胞。构建表达CD19 和CD20 的K562-CD19-GFP、K562-CD20-GFP 以及表达Luciferase 的Nalm6-Luc-GFP 细胞作为靶细胞，将BiCAR-T 细胞与靶细胞共同孵育，检测其对靶细胞杀伤能力及释放IFN-γ 水平。使用Nalm6-Luc-GFP 细胞构建白血病小鼠模型，尾静脉注射BiCAR-T细胞，通过小动物成像方法观察BiCAR-T细胞对荷瘤小鼠的治疗作用。结果：健康人来源的BiCAR-T 细胞经7 d 培养后扩增良好，扩增倍数为20~50 倍，阳性率为10%~92%，显示成功制备BiCAR-T细胞。在效靶比为10∶1 时，BiCAR-T细胞对Nalm-6、K562-CD19-GFP 和K562-CD20-GFP 的杀伤率显著高于对照组细胞[ （76.7±7.4）% vs（8.7±2.4）%、（93.3±5.2）% vs（46.7±6.2）、（51.0±0.8）vs（30.7±0.5）%，均P<0.01]；与对照组相比，与Nalm-6细胞共孵育后BiCAR-T 细胞分泌IFN- γ 量显著增加[（872.7±7.7）vs（101.0±5.3）pg/ml ，P<0.01]。动物实验表明，BiCAR-T细胞对B-NSG小鼠白血病模型治疗效果明显，注射BiCAR-T细胞后白血病细胞逐渐减少，第50 天时基本消失，小鼠全部存活至第70 天被安乐死；PBS和对照T细胞组小鼠分别在（19±3）和（20±1）d 全部死亡。结论：成功设计了表达CD19 和CD20 的双靶点CAR分子后成功制备了BiCAR-T 细胞，该细胞能够有效杀伤表达CD19 和/或CD20 的B淋巴细胞肿瘤细胞，与靶细胞共同孵育后能够分泌大量IFN-γ，对B-NSG免疫缺陷小鼠白血病模型具有明显的治疗效果。     

嵌合穿支皮瓣的发展与现状

<正>随着显微外科技术的不断发展和成熟,穿支皮瓣在临床上的运用越来越广泛,效果愈加显著,在软组织缺损修复领域的王者地位毋庸置疑~([1-2])。当创伤、感染、肿瘤切除等因素造成伴有肌(腱)及骨等复合组织缺损时,以单一组织结构的穿支皮瓣进行修复难以为继,采用逐渐成熟的嵌合穿支皮瓣技术具有较大的优势。Hallock~([3])和Koshima~([4])为代表的学者对此类皮瓣进行了许多研究并转化临床。为全面了解嵌合穿支皮