Parkin介导的线粒体自噬:调控心血管疾病的新机制

Parkin是由PARK2基因编码的蛋白,其基因突变和蛋白表达异常首先在帕金森病患者中发现。近年来研究发现Parkin除参与神经、肿瘤疾病的发生发展外,在心血管疾病中也发挥显著作用。研究表明,Parkin通过介导线粒体自噬参与对细胞内受损线粒体的清除,来维持细胞内环境稳态和线粒体正常形态结构。现主要总结了Parkin介导的线粒体自噬的研究现状及其在心血管疾病中的作用及机制,这些发现将为Parkin介导的线粒体自噬与心血管疾病发病机制之间可能存在的联系提供理论依据,并探索新的治疗心血管疾病的靶点。     

长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞

目的探究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE ）基因敲除小鼠（ApoE-/- 小鼠）,通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠（模型组）;12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照（negative control,NC）组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达。通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase3）、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达。结果①血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功。荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组（P＜0.05）;②CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36h之后低于NC组（t36=2.683、P＜0.05,t48=2.554、P＜0.05）;划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组（t=3.136、P<0.05）;③流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组（22.6%和11.7%,χ2=4.245、P＜0.05）;④蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组（t分别为9.546、5.647、5.42,P＜0.05）,caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组（t=4.892、 P＜0.05）。结论沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖。     

MiR-153-3p调控异丙肾上腺素诱导的心肌肥大机制研究

目的 本研究旨在利用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导心肌细胞肥大,研究miR-153-3p调控心肌肥大的作用机制。方法 体外分离培养大鼠乳鼠心肌细胞,通过ISO不同时间（0、8、12、18、24、48 h）梯度培养检测细胞肥大情况以及miR-153-3p的表达情况;转染miR-153-3p的拮抗剂(antagomir)于ISO诱导的大鼠原代心肌细胞中使miR-153-3p低表达,根据转染情况分为空白组,ISO组（药物诱导组）,ISO+NC组（阴性对照组）和ISO+miR-153-3p antagomir组（实验处理组）;用FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽染色观察细胞表面积的变化,荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测心房利钠肽,β-肌球蛋白重链和miR-153-3p基因的表达。结果 在一定时间内随着ISO诱导时间的延长心肌细胞肥大效果逐步升高,到18 h和24 h呈显著差异（P<005）,48 h后细胞肥大效果降低;miR-153-3p的表达量与肥大效果呈一致趋势,表面积结果与RT-qPCR结果一致。结论 MiR-153-3p在大鼠心肌细胞中响应ISO诱导上调,并且敲低miR-153-3p显著降低心肌细胞的肥大效果。表明miR-153-3p是心肌肥大的重要调节因子,敲低miR-153-3p有抑制心肌肥大的作用,揭示了miRNA在控制心肌肥大发展中的新信号机制。     

改进型生物慢滤池对饮用水中氟及相关污染物的 去除效果研究

目的：探讨用活性氧化铝或活性炭作为除氟剂的改进型生物慢滤池对饮用水中氟及相关污染物的净化效果。方法：分别用活性氧化铝和活性炭作为除氟剂制备2种慢滤池，采用氟离子选择性电极法、酸性高锰酸钾法、纳氏试剂比色法、铂-钴标准比色法和玻璃电极法分别测定改进型生物慢滤池进水和出水中的氟含量、化学需氧量（CODMn）、氨氮（NH₄⁺-N）、色度及pH值，分析评价改进型生物慢滤池对高氟水中氟化物及相关污染物的净化效果。结果：以活性氧化铝/活性炭为除氟剂的改进型生物慢滤池对水中氟离子的平均瞬时去除率、处理24 h后氟离子去除率、COD_Mn去除率、NH₄⁺-N去除率、pH值达标率以及色度去除率分别为73.17%/6.14%、87.57%/18.33%、41.77%/18.28%、37.66%/21.17%、100%/85.71%和65.71%/22.14%。结论：以活性氧化铝为除氟剂的改进型生物慢滤池对饮用水中氟及相关污染物具有良好的净化效果，有一定的应用推广价值。     

piRNA与心脏相关疾病研究进展

非编码基因组与人类疾病的关系一直是研究的热点,而非编码RNA在心血管疾病的研究还处于起步阶段。Piwi蛋白互作RNA(Piwi-interacting RNA,piRNA)是一种小的非编码RNA,可与Piwi蛋白结合,通过DNA甲基化沉默转座子,在生殖系中高表达和得到了广泛的研究。关于piRNA与心脏相关疾病的研究尚在起步阶段。作者对piRNA及其与心脏相关疾病的某些潜在调控关系作一综述。     

肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移

目的观察肌细胞增强因子2D（myocyte enhancer factor 2D，MEF2D）对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响，并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6（mitogen induced gene 6，MIG6）的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达，以MEF2D mRNA表达量作为横坐标，以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标，制作线性相关图；用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后，通过细胞增殖与毒性测定试剂盒（7Sea-Cell Counting Kit，7Sea-CCK）和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力；用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后，通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验，共分为阴性对照（negative control，NC）组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M（同时下调MIG6和MEF2D）组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系（r=-0.78）。细胞增殖实验，24 h和48 h时，下调MIG6或MEF2D后，与NC组比较，siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化；同时下调MIG6和MEF2D后，与siMEF2D组比较，si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化。72 h时，各组间方差分析差异有统计学意义（F=20.68、P<0.01）；下调MIG6后，与NC组比较，siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度（optical density，OD）值为3.73±0.18，t=3.84、P=0.02]；下调MEF2D后，与NC组比较，siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降（OD=1.79±0.22，t=3.95、P=0.02）；同时下调MIG6和MEF2D后，与siMEF2D组比较，si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强（OD=2.99±0.03，t=4.83、P<0.01）。细胞划痕实验，各组间方差分析差异有统计学意义（F=42.27、P<0.01）；48 h时，下调MIG6后，与NC组比较，siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为（51±4）%，t=3.22、P<0.05）]；下调MEF2D后，与NC组比较，siMEF2D组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为（19±3）%，t=7.70、P<0.01]；同时下调MIG6和MEF2D后，与siMEF2D组比较，si2M组中PLC/PRF5细胞迁移能力增强[细胞迁移率为（46±3）%，t=6.99、P<0.01]。蛋白质印迹检测，下调MEF2D后，与NC组比较，siMEF2D组中PLC/PRF5细胞MIG6蛋白表达水平显著上升（t=7.86、P<0.001）；上调MEF2D后，与空载对照组比较，MEF2D组中SMMC7721细胞MIG6蛋白表达水平显著下降（t=4.61、P=0.004）。结论肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721中MEF2D和MIG6表达量呈负相关关系，MEF2D很可能通过负向调控MIG6的表达从而促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移。