自噬在高糖条件下视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子促进RF/6A细胞血管生成中的作用

目的　研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株（ARPE-19）自噬对其表达血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF/6A）迁移和管腔形成的影响。方法　根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤（3-MA）+高糖组。对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24 h，高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h，3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L^-1 3-MA处理24 h，然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h。Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1 轻链 3（microtubule-related protein 1 light chain 3，LC3）II型和I型的比值(LC3-II/LC3-I)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3（autophagy-related gene 3，Atg3）的蛋白表达。ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达。比较三组ARPE-19细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量。然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中，将RF/6A细胞也按以上方法分组，分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数。结果　对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/LC3-I比值分别为0.405±0.095、0.932±0.024和0.635±0.048；Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.205±0.035、0.590±0.120和0.425±0.082；Atg3蛋白相对表达量分别为0.277±0.035、0.539±0.071和0.389±0.019。ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达量三组分别为（44.03±9.08）ng·L^-1、（205.70±17.90）ng·L^-1和（112.52±21.06）ng·L^-1；RF/6A细胞迁移数三组分别为（125.60±6.35）个、（153.60±19.20）个和（67.40±7.95）个；细胞管腔形成数三组分别为（12.22±0.84）个、（18.44±1.68）个和（5.44±0.51）个；整体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01）。与对照组相比，高糖组ARPE-19细胞的LC3-II/LC3-I比值、Beclin-1及Atg3蛋白相对表达量均明显增加（均为P<0.01），VEGF表达水平均明显升高（P<0.01），RF/6A细胞迁移数和管腔形成数均明显增加（均为P<0.01），3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/I比值、Beclin-1和Atg3蛋白相对表达量、VEGF表达量、RF/6A细胞迁移数和细胞管腔形成数均较高糖组明显降低（均为P<0.01）。结论　高糖激活ARPE-19细胞自噬，进而上调VEGF的表达并促进RF/6A细胞迁移和管腔形成，自噬抑制剂3-MA可抑制ARPE-19细胞自噬，并下调VEGF的表达从而抑制RF/6A细胞的血管形成能力。     

原发性眼内淋巴瘤的治疗

<正>原发性眼内淋巴瘤(PIOL)是初发于眼内组织的淋巴瘤,相对少见,恶性程度较高,多为非何杰金淋巴瘤,B细胞来源,少部分为T细胞或u细胞来源。PIOL是原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)的一个特殊类型。PIOL可以仅有眼部表现,也可以累及中枢神经系统。约有15%²5%的PCNSL患者有眼部表现,1/3的PIOL患者有PCNSL表现,42%25%的PCNSL患者有眼部表现,1/3的PIOL患者有PCNSL表现,42%⁹2%的PIOL患者会发展为     

自噬与血管生成的研究进展

血管生成主要包括病理性及生理性血管生成2个方面,新生血管形成在多种疾病致病中发挥重要作用,主要包括肿瘤血管、眼底新生血管疾病（黄斑变性、糖尿病视网膜病变等）,在新生血管形成中自噬起到重要作用。肿瘤生长及侵袭转移与新生血管形成具有密切的相关性,自噬性细胞死亡可能会在一定程度上对血管生成造成抑制,而自噬也可以增强抗肿瘤药物作用。但是,肿瘤组织自噬水平的提高,同时会保护肿瘤组织,导致抗肿瘤药物的耐药,通过调节自噬能够更有效地控制肿瘤。在眼底新生血管疾病中,自噬参与了新生血管形成,通过抑制自噬能够更有效地控制眼底新生血管。     

自噬抑制剂3-MA对缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞表达TNF-α的抑制作用

目的研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法将体外培养的ARPE-19细胞随机分为对照组、缺氧组和3-MA+缺氧组,对照组细胞在常氧条件下培养,缺氧组细胞在缺氧箱(1%O2/5%CO2/94%N2)中进行培养,3-MA+缺氧组先在培养基中加入10 m M 3-MA,然后置于缺氧箱中继续培养。采用Western blot法检测各组细胞的自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 B (LC3B)、Beclin-1及p62的表达;采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α的浓度。结果 (1)对照组、缺氧组、3-MA+缺氧组细胞的TNF-α浓度分别为(59. 46±5. 22) pg/ml、(135. 80±11. 30) pg/ml和(105. 88±10. 42) pg/ml,总体比较差异有统计学意义(F=50. 53,P=0. 000),缺氧组的TNF-α浓度明显高于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P <0. 01),3-MA+缺氧组的TNF-α浓度高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 01)。(2)对照组、缺氧组、3-MA+缺氧组细胞中的LC3B-II/LC3B-I值、Beclin-1值及p62值分别为(0. 20±0. 03、0. 58±0. 07和0. 40±0. 09)、(0. 32±0. 04、0. 97±0. 05和0. 78±0. 06)和(1. 03±0. 02、0. 32±0. 10和0. 78±0. 08),组间总体比较差异均有统计学意义(LC3B-II/LC3B-I:F=21. 73,P=0. 002; Beclin-1:F=149. 34,P=0. 000; p62:F=69. 53,P=0. 000)。缺氧组细胞中LC3B-II/LC3B-I值和Beclin-1值均明显高于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P <0. 05),3-MA+缺氧组的LC3B-II/LC3B-I值和Beclin-1值均高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。缺氧组细胞中p62值明显低于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P <0. 01),3-MA+缺氧组的p62值低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论缺氧激活RPE细胞自噬并促进其TNF-α的表达,自噬抑制剂3-MA可在一定程度上抑制自噬进程,从而发挥抑制细胞表达TNF-α的作用。     

胃饥饿素通过抑制内质网应激减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡

目的 研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法 将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预，高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型，高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞，高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10μmol/L衣霉素联合处理细胞，所有细胞均培养48 h。采用AnnexinⅤ-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达。结果 与对照组比较，高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高糖组相比，高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较，高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P&...     

曲古抑菌素A对人Tenon囊成纤维细胞作用的研究

目的：研究曲古抑菌素A( trichostatin A,TSA)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞( human Tenon capsule fibroblast, HTF)增殖能力以及组蛋白去乙酰化酶1( histone deacetylase 1,HDAC1)和HDAC2蛋白表达的影响。
　　方法：取青光眼滤过术中Tenon囊组织进行HTF体外培养。选取第3~6代细胞进行实验。设置空白对照组及TSA组(600nmol/L TSA加入培养液中),分别于培养后1,2,3 d应用 MTT法检测细胞活力变化;以600 nmol/L TSA处理 HTF 2 d 后, Western blot 法检测细胞中 HDAC1和HDAC2蛋白的表达。
　　结果：与对照组比较,TSA作用1d后HTF活力下降,呈时间依赖性,具有统计学差异( P<0.05)。 TSA处理HTF后2d,Western blot法检测HDAC1和HDAC2蛋白表达受到明显抑制。
　　结论：TSA可以通过抑制HDAC1和HDAC2的表达量,抑制人Tenon囊成纤维细胞增殖,从而减少术后结膜瘢痕形成可能。     

小鼠伊文思蓝尾静脉或腹腔注射及视网膜铺片技术的优化

目的：对小鼠伊文思蓝静脉推注联合视网膜铺片的技术进行优化,以提高视网膜铺片染色实验的准确性和可重复性。

方法：C57BL/6雄性小鼠尾静脉注射10g/L(1%)伊文思蓝0.3mL后体内分别循环10、20min,处死后摘取眼球,4%多聚甲醛分别固定20、40、60min,将不同体内循环时间及不同组织固定时间对于视网膜血管的走形、分布及渗漏的影响进行了优化比较。尾静脉注射失败后,通过腹腔注射1%伊文思蓝0.3mL,体内循环3h,固定60min进行补救,观察视网膜血管的走形、分布及渗漏。同时将尾静脉注射后视网膜血管的走形、分布及渗漏与腹腔注射后的结果进行效果比较,确定最佳的体内循环时间以及视网膜铺片的条件。

结果：尾静脉注射后,与体内循环20min,固定20或40min条件下视网膜血管情况相比,伊文思蓝体内循环10min,固定60min,视网膜血管走行、血管分支清楚,血管渗漏较少。尾静脉注射失败后,腹腔注射补救措施结果显示视网膜血管走行、各级血管形态清晰。腹腔注射伊文思蓝体内循环3h与尾静脉注射伊文思蓝体内循环10min相比,视网膜血管的走形、分布的效果无明显差别。

结论：优化伊文思蓝静脉推注联合视网膜铺片的技术,可提高视网膜铺片染色实验的准确性和可重复性,为相关视网膜血管病变的研究提供借鉴方法。     

玻璃体内注射曲安奈德治疗黄斑水肿的疗效分析

[目的] 探讨玻璃体内注射曲安奈德治疗黄斑水肿的临床疗效.[方法] 对本院2009年3月至2012年3月收治的经检眼镜、荧光素眼底血管造影(FFA)和光相干断层扫描(OCT)等确诊的黄斑水肿患者32例,42只眼,行玻璃体内注射曲安奈德0.1 mL(4 mg)治疗.比较治疗前后患者视力,眼压,眼底情况以及视网膜厚度的变化.[结果] 治疗后1、4、8个月的视力和视网膜厚度较治疗前明显改善(P<0.05),患者黄斑水肿明显消退,血管渗漏减少,较治疗前明显改善(P<0.05).治疗后1个月平均眼压较治疗前上升,但无统计学意义(P>0.05),治疗后4和8个月恢复到正常水平.[结论] 玻璃体内注射曲安奈德治疗黄斑水肿具有较好的疗效和安全性,值得临床推广使用.     

妊娠期高血压与视网膜病变相关性研究

目的 探讨眼底视网膜病变程度在妊娠期高血压病情判定中的应用价值.方法 选择妊娠期高血压女性146例,观察其眼底视网膜病变发生率、病变程度、血压、蛋白尿情况并进行相关性分析.结果 146例患者视网膜病变发生率为78.08%(114/146),其中平均动脉压在140 mm Hg及以上者视网膜病变率高达90.24%,远高于平均动脉压在140 mm Hg以下者(χ2=4.93,P<0.05);患者平均动脉压、蛋白尿水平与患者视网膜病变分期具有正相关(r=0.478,P<0.01;r=0.524,P<0.01).结论 视网膜病变严重程度与妊娠期高血压患者血压、蛋白尿相关.眼底检查在判断妊娠期高血压患者病情进展、严重程度上具有重要应用价值.