内皮功能障碍与冠脉疾病

冠脉疾病的发生、发展与内皮功能障碍密切相关，逆转失调的内皮功能是心血管疾病治疗的新趋势。本文较系统地阐述了血管内皮细胞的功能、评价方法及内皮功能障碍与冠脉疾病发生、发展的关系。     

抗血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的：研制抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa Fab抗体。方法：通过问接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验，选取鼠源抗血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa单克隆抗体(mAb P140)。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株(P140)中，克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因，构建原核表达重组质粒p3MH／P140x-Fd，并在XLI-Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P140 Fab抗体进行纯化，用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法，对P140 Fab抗体进行检测，并通过血小板聚集抑制试验，观察P140 Fab抗体的抗栓活性。结果：SDS-PAGE和Western blot表明，纯化的P140Fab抗体的相对分子质量(Mr)约为47000。ELISA的结果显示，P140 Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中，P140 Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性，IC50的平均值为16．85mg/L。结论：成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的Fab抗体。     

内皮功能障碍与冠脉疾病

冠脉疾病的发生、发展与内皮功能障碍密切相关，逆转失调的内皮功能是心血管疾病治疗的新趋势。本文较系统地阐述了血管内皮细胞的功能、评价方法及内皮功能障碍与冠脉疾病发生、发展的关系。     

抗血小板糖蛋白IIb/IIIa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的 :研制抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIaFab抗体。方法 :通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验 ,选取鼠源抗血小板糖蛋白IIb/IIIa单克隆抗体 (mAbP14 0 )。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株 (P14 0 )中 ,克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因 ,构建原核表达重组质粒p3MH/P14 0к Fd ,并在XLI Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P14 0Fab抗体进行纯化 ,用SDS PAGE、ELISA和Westernblot等方法 ,对P14 0Fab抗体进行检测 ,并通过血小板聚集抑制试验 ,观察P14 0Fab抗体的抗栓活性。结果 :SDS PAGE和Westernblot表明 ,纯化的P14 0Fab抗体的相对分子质量 (Mr)约为 4 70 0 0。ELISA的结果显示 ,P14 0Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中 ,P14 0Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性 ,IC50 的平均值为 16 .85mg/L。结论 :成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIa的Fab抗体     

丙型肝炎病毒E2／NS1区基因cDNA的克隆及序列分析

从北京地区１份丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中提取ＲＮＡ，经逆转录和套式聚合酶链反应扩增ＨＣＶＥ２／ＮＳ１区基因约９３０ｂｐ，将其插入至ｐＧＥＭ－Ｔ质粒载体中，利用双脱氧链末端终止法测出该基因５’端４３１ｂｐ的核苷酸序列，将此序列与其它９个ＨＣＶ分离株的相应序列进行比较分析，结果表明，此序列与ＨＣＶⅡ型序列同源性较高，核苷酸水平同源性在８０％以上。由其编码的ＨＣＶ外膜蛋白Ｎ端存在两个高变部位（ＨＶＲ），在ＨＶＲ内、外具有几个保守氨基酸残基和氨基酸区域，它们与外膜蛋白空间构型的维持有关。     

细胞因子诱导的杀伤细胞在早期肾癌术后治疗中的应用

目的观察早期肾癌根治术后行自体细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer,CIK）细胞治疗的临床疗效。方法选取解放军总医院2009年期间Ⅰ、Ⅱ期肾癌术后患者40例,治疗组20例采自体外周CIK细胞血进行CIK细胞扩增,采取静脉回输方法治疗;对照组20例术后未行其他治疗。观察CIK细胞培养前后细胞表型情况, 对比治疗前及治疗后4周、24个月外周血T淋巴细胞亚群变化,记录不良反应情况、疗效和生活质量评定。结果CIK细胞培养后可见CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞较培养前显著增加（P＜001）;治疗后外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较治疗前升高（P＜001）。治疗组20例：19例完全缓解,1例进展, 患者治疗后生活质量提高,均无明显不良反应出现,疾病控制率95%;对照组20例:13例完全缓解,7例进展,疾病控制率65%（P＜005）。结论自体CIK细胞治疗可以提高患者的免疫功能,延缓和阻止早期肾癌术后患者肿瘤的复发或转移,延长无病生存期,提高生活质量。     

蛋白酶体抑制剂可增加足叶乙甙对白血病细胞系M-07e和TF-1的凋亡诱导效应

近年来的研究显示泛素—蛋白酶体通路在细胞凋亡调控中发挥了重要的作用。本实验就蛋白酶体抑制剂Z—LLL—CHO与经典的凋亡诱导剂足叶乙甙(VP16)对白血病细胞系M—07e及TF—1的联合效应进行了初步研究。应用MTT法及台盼蓝拒染法显示Z—LLL—CHO及VP16联合作用于M—07e及TF—1细胞。可增强两种药物单独的细胞杀伤效应。流式细胞术检测提示单独应用Z—LLL—CHO及VP16均可使S G2／M期细胞比例增加，两联合应用导致细胞凋亡峰比例的显增高。通过对M—07e细胞裂解物做免疫印迹检测．发现在Z—LLL—CHO及VP16单独作用中均导致Bcl—2蛋白被酶解为22kD的片段，而联合作用时Bcl—2的酶解现象具有叠加效应。结论：Z—LLL—CHO与VP16联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性。细胞周期S G2／M期比例的增加及Bcl—2酶解片段的增加是导致蛋白酶体抑制剂Z—LLL—CHO及VP16对白血病细胞系联合效应的可能机制。