β-丙内酯在Vero细胞HFRS疫苗中的应用

目的 探讨β-丙内酯灭活双价Vero细胞肾综合征出血热纯化疫苗的最佳条件。方法 采用不同终浓度的β-丙内酯和不同的灭活时间对疫苗进行灭活，用细胞培养法进行病毒增殖试验，以确定灭活效果。应用高效液相色谱法分析β-丙内酯的最佳水解条件和3批双价Vero细胞出血热纯化灭活疫苗β-丙内酯残留虽。检测3批双价纯比灭活疫苗的免疫效果。结果 疫苗经终浓度为1：2000和1：4000的β-丙内酯作用24h，均可完全灭活病毒；疫苗中的β-丙内酯在37℃水浴下，随着水解时间的延长，其含量逐渐下降，水解2h后已无β-丙内酯检出；3批经β-丙内酯灭活的双价Vero细胞出血热纯化疫苗均未检出β-丙内酯残留，在家兔体内诱导产生针对汉滩型和汉城型病毒的中和抗体效价均达到1：20。结论 肾综合征出血热纯化疫苗经终浓度为1：4000β-丙内酪4℃灭活24h，然后再于37℃水浴中水解2h，既可达到完全灭活病毒且无β-丙内酯残留的目的；采用此方法灭活的双价Vero细胞肾综合征出血热纯化疫苗保持良好的免疫原性。     

突变型天花粉蛋白TCSYFF81-83ACS的生物活性及免疫原性分析

目的:构建一种突变型天花粉蛋白(trichosanthin,TCS),并对其生物活性和免疫原性进行分析。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSYFF81-83ACS)在大肠杆菌中进行表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测显示,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而其免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。     

与大劣按蚊先天免疫相关丝氨酸蛋白酶的克隆及分析

目的克隆及分析与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因。方法利用抑制性消减杂交 （ suppression subtractive hybridization, SSH）方法克隆大劣按蚊差异基因，并对与先天免疫相关的差异基因（文中命名为T6基因）进行生物信息学分析及半定量实验，分析约氏疟原虫感染前后其转录的变化，探讨它与按蚊抗疟原虫感染的先天免疫反应的关系。结果目前克隆的差异基因包含以下几类：①与先天免疫相关的酶类；②与能量代谢有关的酶：③与信号传递和调节有关的因子。对与先天免疫相关的分子进行的半定量实验表明，大劣按蚊T6基因的转录与感染疟原虫相关。结论本研究成功地克隆了与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因，进一步的实验分析提示该基因可能与按蚊抗约氏疟原虫感染的黑化反应相关。     

基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统构建北大核心CSCD

目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点)。双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶。涂布含有5%蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况。结果sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5%蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5%蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点。结论建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础。     

QIAGEN质粒DNA纯化柱的再生利用

1　材料和方法1.1　材料　 QIAGEN Plasmid Maxi kit (QIAGEN- tip 5 0 0 ) ,纯化专用试剂 (P1,P2 ,P3,QBT,QC,QF,具体配方见 QI-AGEN质粒纯化手册 ) . pc DNA3.1(- ) /MSP1 - 1 9为将 PCR扩增的恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 1(MSP1)的 17区基因片段(30 0 bp)以 Eco RI和 Bam HI酶切位点克隆入 pc DNA3.1(- )中 [2 ] ,pc DNA3.1(- )为 Introgen公司的真核表达质粒 .在研究 pc DNA3.1(- ) /MSP1 - 1 9作为 DNA疫苗效果时 ,需大量纯化该质粒 ,故本研究在纯化该质粒的同时 ,同样用该质粒进行纯化柱再生研究 .菌株为大肠…     

淋巴丝虫病：重新认识这个古老的疾病

淋巴丝虫病是经蚊媒传播的一种寄生虫病，给世界上生活在热带地区的人们带来了严重的痛苦。该病有数千年的历史，可追溯到古代，但直至现在对淋巴丝虫病的认识仍然比较贫乏。最近20年对丝虫病的研究，使人们感到需重新认识全球丝虫病的感染数量、发病机制、诊断和控制等问题。     

三峡库区重庆段斯氏肺吸虫病流行病学及临床研究-附58例斯氏肺吸虫病误诊原因分析

目的为了解重庆地区人群斯氏肺吸虫病流行的现状、临床表现和诊断，并分析导致其误诊的原因。方法进行肺吸虫病现场流行病学调查和收集误诊病例的临床资料。采用肺吸虫抗原皮试（IDT）和ELISA检测易感人群；检测中间宿主溪蟹的肺吸虫囊蚴携带率以及保虫宿主犬、猫的肺吸虫感染情况。结果重庆地区人群的IDT阳性率为14．36％（104／724），ELISA为21．96％（92／419），当地溪蟹的肺吸虫囊蚴携带率为4．08％，虫种鉴定为斯氏肺吸虫（Pagumogonimus skrjabini）。三峡库区的人群有生食和半生食溪蟹的习惯，且感染与职业、年龄有关，差异有统计学意义（P〈0．05）；并分析了58例斯氏肺吸虫病的误诊原因。结论重庆地区人群的肺吸虫病呈点状、散在流行，并有局部扩散流行的可能性。应加强肺吸虫病防治知识的宣传和教育，制定相应的防制措施，阻断该病在重庆地区的流行。     

斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因pET22b载体的构建及表达

目的构建含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的pET22b(+)表达载体,利用SDSPAGE和免疫印迹分析阳性克隆菌株的诱导表达及其表达产物的免疫原性。方法提取斯氏狸殖吸虫成虫总RNA,经RTPCR扩增及T/A克隆后测定其核苷酸序列并进行序列查询与比对。根据已获得的序列和pET22b(+)载体的内切酶位点信息设计引物并再次进行T/A克隆,阳性克隆质粒经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段与pET22b(+)载体连接并转化至BL21(DE3)菌株,收集经IPTG诱导表达后的菌液进行SDSPAGE和免疫印迹分析。结果SDSPAGE显示,经诱导表达的阳性克隆菌株、未经诱导菌株与空载体菌株之间的蛋白带型未见明显差异,但经诱导表达的阳性克隆菌株的22ku蛋白条带比另两菌株明显,免疫印迹证实,该蛋白条带可与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生强阳性反应。结论成功构建了含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因的pET22b(+)载体,经诱导表达的融合蛋白能与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生较强的免疫反应。     

NK细胞在TLR9激动剂CpG抑制肝期约氏疟原虫发育中的作用

目的探讨NK细胞在TLR9激动剂CpG抑制肝期约氏疟原虫发育中的作用。方法小鼠尾静脉注射NK细胞拮抗剂Anti-Asialo-GM1 40μg后48h给予1 000个约氏疟原虫BY265株子孢子攻击,采用Real-time PCR检测肝脏虫荷并血检疟原虫,分析CpG在NK细胞阻断小鼠中对肝期约氏疟原虫发育的影响。结果 NK细胞阻断后GM1+CpG组小鼠肝脏虫荷与CpG组相比显著增加(t=3.539,P<0.01),与PBS对照组相比显著降低(t=3.658,P<0.01);GM1组与PBS对照组比较差异无统计学意义(t=1.768,P>0.05)。CpG组未出现原虫血症,GM1+CpG组出现原虫血症,但出现时间和PBS对照组相比推迟且原虫血症的峰值降低,小鼠逐渐自愈。PBS组和GM1组小鼠从感染第13d开始出现死亡,第15d全部死亡。结论 NK细胞参与对肝期疟原虫的杀伤过程,TLR9激动剂CpG依赖NK细胞杀伤肝期疟原虫。