巨细胞病毒感染捕获ELISA分析方法的建立和应用

目的：建立CMVIgM抗体捕获ELISA法并用聚合酶链反应（PCR）技术对此方法进行了评价。评价：采用巨细胞病毒（CMV）AD－169株感染人胚肺细胞的方法制备CMV抗原，并采用冻化抗制备法及甘愿酸法制备抗原，羊抗人IgM（μ链）McAb包被酶标板，建立CMVIgM抗体捕获ELISSA法。结果：不同浓度抗μ链McAb包被，包被时间、包被液、封闭液等不同条件，以有抗原浓度、抗CMV抗体酶结合物浓度对此法的建立有不同的影响。PCR法与用最佳条件配合后的本方法CMVIgM抗体检出率无显著差异（P＞0．05）。结论：本法测定CMV－IgM抗体的敏感性和特异性较高，简便、适用，易于推广，可广泛应用于临床。     

VP-16诱导细胞凋亡及其细胞核基质中热休克蛋白表达的研究

目的　研究VP 16诱导HL 6 0细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白 (HSP)表达的变化。　方法　琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂 ;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化 ;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异。　结果　VP 16作用HL 6 0细胞 0 5h出现早期凋亡特征。作用 4h可见明显的DNA梯状条带。与未凋亡的细胞比较 ,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调 ;VP 16作用 2、3及 4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加 ;诱导 2 2h比诱导 4h时去除VP 16后孵至 2 2h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了 3 4倍。　结论　 1 HL 6 0细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前。 2 凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加 ,经 2、3及 4h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著。这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上。 3 VP 16作用细胞时间增长至2 2h ,HSP的保护作用可能消失     

心肌型脂肪酸结合蛋白在急性心肌梗死早期诊断中的应用

目的　评定脂肪酸结合蛋白 (H FABP)在急性心肌梗死 (AMI)早期诊断中的应用。　方法　采用自行开发的H FABP酶联免疫吸附试验一步夹心法对 12 6名健康体检者和 5 3例AMI患者血清H FABP进行检测 ,同时测定肌红蛋白 (MYO)、肌酸激酶同工酶 (CK MB)、肌钙蛋白I(cTnI) ,并对AMI进行动态观察 ,对早期诊断的敏感性、特异性、时效性等进行分析。　结果　H FABP在AMI后 (1 84± 0 6 4 )h血浆浓度即开始升高 ,比CK MB、cTnI早 (P <0 0 1) ;时间浓度动态曲线与MYO相似 ,与CK MB、cTnI相比曲线前移。AMI后 2h的敏感性和特异性分别为 76 4 7%、80 4 1% ;4h的敏感性和特异性分别为 89 16 %、91 2 6 %。　结论　AMI后 2、4hH FABP检测对AMI早期诊断具有较高的敏感性和特异性 ,可望成为重要的早期和排除诊断的血清心肌标志物的手段之一。     

肌浆网钙ATP酶基因转导对慢性心力衰竭犬心肌蛋白质组影响的初步研究

目的 分析心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a,SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(HF)犬心肌蛋白质组的影响,探讨SERCA2a基因转导改善心功能的机制.方法 快速右心室起搏建立HF犬模型并随机分为HF组、HF+绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent pmtein,EGFP)组、HF+SERCA2a组.后两组分别向心肌内注射携带EGFP和SERCA2a基因的rAAV载体.于基因转导30 d时停止起搏后进行超声心动图和血流动力学检查并制备心室肌双向电泳蛋白样品和心肌双向电泳图谱,图像分析软件分析蛋白表达差异点,MALDI-TOF-MS数据库搜索鉴定蛋白质.结果 基因转导30 d时,HF+SERCA2a组犬的症状、超声心动图和血流动力学指标与HF+EGFP组相比有显著好转(P＜0.05);与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).挑选SERCA2a基因转导后表达量发生明显改变的10个蛋白点进行分析,经质谱鉴定分别为心肌收缩相关蛋白、线粒体能量代谢酶类和应激相关蛋白.结论 以rAAV为载体介导SERCA2a基因转导能够改善HF犬心脏的收缩和舒张功能,其可能的机制是恢复了心肌收缩相关蛋白正常表型或正常表达量,增加了心肌能量的产生,改变了应激相关蛋白的表达.     

外源性金属硫蛋白对β-淀粉样蛋白所致大鼠海马氧化应激的影响

目的　观察金属硫蛋白对 β 淀粉样蛋白 (Aβ)所致的氧化应激 (OS)的影响。 方法　在成年大鼠侧脑室内注入聚集态 β 淀粉样蛋白1 5nmol后 ,随即在实验组用微渗泵持续注射不同剂量和种类的金属硫蛋白 (metallothionein ,MT) ,对照组金属硫蛋白用生理盐水代替。 5d后测定大鼠海马几种氧化 抗氧化指标以及与认知能力有关的乙酰胆碱酯酶 (AChE)的活力。结果　相对于对照组 ,低浓度MT2 (0 0 5g/L)和高低 (1 0和0 0 5g/L)两种浓度的MT3均可导致GSH水平升高 ,低浓度MT3还可以使海马中GSH Px的活性增强。高浓度MT3不但对抗氧化酶无影响 ,组织中MDA含量反而升高。结论　MT脑室内注射可以提高鼠脑的抗氧化能力 ,但MT3的作用效果与浓度有关。相同浓度的MT2和MT3后者使动物抗氧化能力提高的作用更强。     

体外诱导Balb／C小鼠ES细胞定向分化为胰岛样细胞团的形态观察

目的 体外诱导Balb／C小鼠胚胎干细胞定向分化为胰岛样细胞团，观察细胞表面形态学的变化。方法 选用Balb／C小鼠ES细胞．经过拟胚体(EB)发育分化4d后开始定向诱导培养，不同时问段分别向细胞培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子-1和尼克酰胺和N等细胞生长因子，使ES细胞定向分化为胰岛样细胞团。免疫细胞化学检测表达胰岛素和胰高血糖素的阳性细胞。原子力显微镜(AFM)原位扫描阳性细胞团。结果EB细胞生长为大小不一、境界清楚的细胞团，细胞团内细胞排列紧密。胰岛B细胞数量多，主要分布在细胞团的中央，边缘少，染色较淡。而表达胰高血糖素的A细胞主要分布在细胞团的边缘，数量相对较少。AFM扫描可见表达胰岛素的阳性细胞团，其表面有很多类似神经纤维的纤维束，连接成网络状。在细胞质中，还有很多类圆形的颗粒物质，其大小几乎一致．粒径都处于0．5～1．0μm间。结论 诱导分化得到的细胞团不仅有形态和功能上的成熟，而且还具备良好的组织结构，为细胞的移植疗法提供了可靠的凭据。     

滋肾健脑法对老龄小鼠脑海马区神经细胞密度及超微结构的影响

背景：补肾是治疗神经系统老化的主要方法，而神经系统老化主要表现为神经细胞的密度减少、细胞老化和胞质中脂褐素颗粒沉积。目的：探讨滋肾健脑法对老龄小鼠脑海马CA1，CA3区神经细胞密度及超微结构的影响，并与阳性药物维生素E进行对照。设计：完全随机对照实验。单位：湖南省中医药研究院。材料：实验于2000-09/2003-11在湖南省中医药研究院中药研究所药理实验室完成。选择昆明种小鼠30只，益肾健脑1号药液（以下简称滋肾方），由湖南省中医药研究院制剂研究室提供（由制首乌15g，桑椹15g，枸杞子15昏五味子6g，丹参30昏葛根30g，红花10g，石菖蒲10g，郁金10g，远志10g，山楂10g，全蝎等药物组成，先将全蝎粉碎成细粉，余药加水煎煮2次，合并煎煮液，滤过，加入全蝎细粉即得），生药量为1．0g/mL。方法：30只小鼠随机分为3组，每组10只。对照组给蒸馏水，滋肾方组给滋肾方20．0g/kg，维生素E组给维生素E40．0mg/kg。均灌胃给药，体积为20mL/kg，1次/d，连续给药4周。末次给药后1h，在麻醉状态下迅速处死小鼠。剪开颅骨，取出海马组织，在显微镜下计量CA1和CA3区的神经细胞数，计算出神经细胞密度值。主要观察指标：①各组小鼠脑海马神经细胞密度。②各组小鼠脑海马神经细胞超微结构。结果：30只小鼠均进入结果分析。①脑海马CA1和CA3区神经细胞密度：滋肾方组和维生素E组均高于对照组[CA1区：（3707&;#177;495），（3812&;#177;981），（257&;#177;372）mm^-2；CA3区：（2746&;#177;262），（2397&;#177;366），（1992&;#177;307）mm^-2，t=2．68～8．30，P〈0．05～0．01]。②滋肾方组和维生素E组能减少线粒体老化及胞质中脂褐素颗粒沉积和溶酶体等老化改变。结论：滋肾健脑颗粒对老龄小鼠脑海马区神经细胞密度减少和细胞老化有一定延缓作用。     

重组腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导治疗慢性充血性心力衰竭：短期及中期作用

背景:慢性充血性心力衰竭(CHF)时,心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2 ATPase,SERCA2a)的蛋白表达和活性均明显降低,这导致钙离子的调控异常和心脏收缩和舒张功能不全。目的:观察腺相关病毒为载体的SERCA2a基因转导对CHF大鼠的短期和中长期治疗作用,探讨其治疗心力衰竭的多种可能的机制。设计:随机对照设计。单位:解放军总医院老年心内科和病理生理研究室。方法:将雄性SD大鼠随机分为,假手术组,CHF组,CHF GFP组和CHF SERCA2a组4组,每组又分为基因转导10,30d2个时间点,后3组采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,手术后18～20周,造模成功的大鼠进行经腹心包腔内注射,CHF组注射500μL无菌生理盐水,CHF GFP组和CHF SERCA2a组分别注射等量携带GFP基因和SERCA2a基因的重组腺相关病毒。主要观察指标:①于基因转导后10,30d,检测大鼠的血流动力学参数,应用WesternBlot方法检测SERCA2a蛋白表达;改良的Jones法测定SERCA2a活性。②应用蛋白质组学研究技术分析比较基因转导30d组中CHF和CHF SERCA2a亚组大鼠的心肌蛋白质组表达的差异。③应用电泳分离和定量的方法检测基因转导30d组的各亚组大鼠心肌肌球蛋白重链亚型的表达情况。结果:①SERCA2a蛋白表达和活性:CHF组和CHF GFP组低于假手术组。基因转导10d后,CHF SERCA2a组与CHF组比较,SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%,但低于假手术组水平;基因转导30d后,CHF SERCA2a组SERCA2a蛋白表达和活性已经达到假手术组大鼠水平。②心脏功能:基因转导10d后,CHF SERCA2a组血流动力学指标中左室舒张末压力明显下降,其他指标明显升高,但未完全达到对照大鼠的心功能水平;基因转导30d后心脏收缩和舒张功能进一步改善,各项指标与假手术组比较差异不显著。③心肌蛋白质组的研究发现,基因转导30d后,CHF SERCA2a组多种能量代谢的酶表达明显增加。④凝胶电泳发现:CHF时α-MHC的表达明显降低而β-MHC则显著增加,α-MHC/β-MHC明显低于假手术组大鼠;基因转导30d后,α-MHC、β-MHC的表达以及α-MHC/β-MHC恢复至假手术组大鼠水平。结论:以重组腺相关病毒2作为载体,SERCA2a基因转导可以增强衰竭心脏的SERCA2a功能,纠正Ca2 稳态异常,增加心脏能量代谢,纠正MHC亚型的异常表达,增强心脏收缩和舒张功能;因而SERCA2a基因转导对CHF具有良好的短期和中长期治疗作用。     

多巴胺D3受体在药物依赖研究中的新进展

近年来多巴胺D3受体(DRD3)在药物依赖中的作用受到大量关注,药理学实验证明DRD3受体参与成瘾药物的强化和奖赏作用[1-2].DRD3通过G蛋白的Gi/o亚型与腺苷酸环化酶的耦联非常有效,当然也包括其他的转换机制,如有丝分裂激活的蛋白激酶,以及K+通道[3].本文详述有关DRD3研究的新进展.     

银杏叶提取物对中枢神经系统的作用

银杏叶提取物（ｅｘｔｒａｃｔｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ）自１９７５年在法国始用于临床，先后在欧联体国家（德国、瑞士、卢森堡、希腊、爱尔兰以及后来的意大利）中注册，至今已在３０多个国家中广为应用。目前用于临床的银杏叶提取物［ＥＧｂ７６１，商品名，Ｔａ...